呂　倩，王國海

(1.渭南市食品藥品檢驗所中藥室，陜西 渭南　714000；2.陜西省食品藥品檢驗所中藥室，陜西 西安　710061)

氣相色譜法測定有機氯農(nóng)藥隨飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率

呂倩1，王國海2

(1.渭南市食品藥品檢驗所中藥室，陜西 渭南714000；2.陜西省食品藥品檢驗所中藥室，陜西 西安710061)

摘要：目的通過測定14種有機氯農(nóng)藥隨當歸、白芷、甘草飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率，為制劑的安全性評估提供參考依據(jù)。方法采用磺化法制備樣品，用氣相色譜法―ECD電子捕獲檢測器測定，DB-1701(30 m×0.32 mm×0.25 μm)毛細管色譜柱，程序升溫，進樣口溫度230℃，檢測器溫度250℃。結果3種飲片中14種有機氯農(nóng)藥轉(zhuǎn)移率分別在0～32.9%與0～49.1%之間。結論有機氯農(nóng)藥在伴隨飲片煎煮前后有較大的損失，不同農(nóng)藥其轉(zhuǎn)移率存在一定的差異，監(jiān)測農(nóng)藥殘留有一定的必要性，為藥品的安全性提供保障。

關鍵詞：飲片;農(nóng)藥殘留量;氣相色譜-質(zhì)譜法

隨著中醫(yī)藥事業(yè)的快速發(fā)展，中藥材的需求量劇增，在天然藥用資源供不應求的今天，人工栽培已經(jīng)成為了中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展中舉足輕重的一環(huán)。中藥種植過程中易受到病蟲危害越，農(nóng)藥雖然可以很好地進行控制，但同時也帶來了污染[1]，一定程度上制約了中藥材、中藥飲片及其制劑的發(fā)展。我國于20世紀80年代末宣布禁止使用滴滴涕、六六六等有機氯農(nóng)藥，但由于此類農(nóng)藥為高效廣譜殺蟲劑，具有穩(wěn)定性高、半衰期長、不易降解和代謝、可引起積蓄性中毒等特點[2-3]，因此近年來在中藥材六六六、滴滴涕等農(nóng)藥殘留量測定方面的報道很多[4-7]，但農(nóng)藥殘留量在制劑過程中的轉(zhuǎn)移率尚不明確。因此，研究農(nóng)藥在飲片、制劑中的殘留轉(zhuǎn)移情況有著重要的意義。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 6890氣相色譜儀，電子捕獲檢測器(ECD)；超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥農(nóng)藥對照品：六六六包括(α-BHC，GBW(E)06008112001，49.8 mg·L-1；β-BHC，GBW(E)06008212002，50.0 mg·L-1；γ-BHC，GBW(E)06008312001，50.2 mg·L-1；δ-BHC，GBW(E)06008412001，50.1 mg·L-1)4種異構體，滴滴涕包括(PP’-DDT，GBW(E)06010212001，50.2 mg·L-1；OP’-DDT，GBW(E)06010312001，50.0 mg·L-1；PP’-DDE，GBW(E)06010412002，50.0 mg·L-1；PP’-DDD，GBW(E)06010512001，50.0 mg·L-1)4種異構體，六氯苯(GSB05-1846-2008，100.0 mg·L-1)，七氯(GSB05-2316-2008，100.0 mg·L-1)，艾氏劑(GSB05-2320-2008，100.0 mg·L-1)，反氯丹(SB05-065-2008，20.0 mg·L-1)，順氯丹(SB05-064-2008，20.0 mg·L-1)，環(huán)氧七氯(GSB05-2317-2008，100.0 mg·L-1)均由中國計量科學研究院提供；當歸、白芷、甘草由制藥企業(yè)提供；正己烷為色譜純，二氯甲烷、濃硫酸、丙酮均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：DB-1701毛細管柱(30 m ×0.32 mm×0.25 μm)；程序升溫：初始溫度140 ℃，以5 ℃·min-1的速率升溫至230 ℃，保持10 min；進樣口溫度230 ℃，ECD檢測器，檢測器溫度250 ℃，進樣量1 μL，不分流進樣，載氣(氮氣)，流速：1.5 mL·min-1；尾吹氣：50 mL·min-1。在此條件下色譜圖見圖1，各成分保留時間見表1。

A對照品溶液B白芷供試品溶液

注：1.六氯苯；2.α-BHC；3.γ-BHC；4.七氯；5.艾氏劑；6.β-BHC；7.δ-BHC；8.環(huán)氧七氯；9.反氯丹；10.順氯丹；11.PP'-DDE；12.OP'-DDT；13.PP'-DDD；14.PP'-DDT。

圖1　14種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液(A)和白芷供試品溶液(B)色譜圖

2.2標準溶液的制備精密吸取14種農(nóng)藥對照品溶液適量，置100 mL的量瓶中，用正己烷稀釋并定容至刻度，搖勻，作為混合標準液的濃溶液，品種及濃度見表2。分別精密吸取濃溶液1、2、4、6、8、10 mL至10 mL量瓶中，用正己烷定容至刻度，作為系列對照溶液。

表2　混合對照品濃溶液的濃度

2.3供試品溶液的制備

2.3.1藥材供試液的制備[8-9]取當歸、白芷、甘草藥材粉末各5 g，精密稱定，分別置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置使分層(必要時可離心)，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，氮吹至近干，加少量正己烷如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加正己烷精密稀釋至5 mL，緩慢加入硫酸1 mL，振搖1 min，離心10 min，取上清液，濾過，即得。

2.3.2浸膏的制備由于原藥材中農(nóng)藥種類及殘留量都有限，需加入適量農(nóng)藥來模擬試驗。精密稱取當歸、白芷、甘草藥材粉末各4份，每份120 g，均將其平均分為兩組，每組每份樣品中均加入14種有機氯農(nóng)藥的濃溶液，見表3，一組加水(8倍量)回流提取兩次，另一組加70%乙醇(8倍量)回流提取兩次，每次4 h，濾過，合并提取液，分別置稱定的蒸發(fā)皿中，于水浴鍋上濃縮為浸膏，稱定浸膏與蒸發(fā)皿總重，計算浸膏量，浸膏備用。

表3　藥材中添加農(nóng)藥的品種及添加量

2.3.3浸膏供試液的制備各精密稱取相當于5 g原藥材粉末量的浸膏,分別置100 mL具塞錐形瓶中，自“2.3.1”項下“加水20 mL……”起重復操作，制備供試品溶液。

2.4精密度試驗取測定項下的同一種對照品溶液連續(xù)進樣6次，記錄各峰面積，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、環(huán)氧七氯、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDT、PP'-DDD、順氯丹、七氯、反氯丹、艾氏劑、六氯苯峰面積的RSD值分別為1.2%、1.0%、1.3%、0.9%、0.8%、1.1%、1.2%、1.1%、1.3%、0.9%、0.7%、1.5%、1.0%、1.0%，表明儀器精密度良好。

2.5加樣回收試驗精密稱取白芷藥材粉末6份，每份5 g,分別置100 mL具塞錐形瓶中，各加入混合標準液1 mL，自“2.3.1”項下 “加水20 mL……”起重復操作，制備供試品溶液。按“2.1”項下色譜條件進樣，計算其回收率，結果見表4。

表4　加樣回收試驗結果

表5　轉(zhuǎn)移率結果

注：“-”標示浸膏中農(nóng)藥殘留量低于檢出限。

2.6檢測限試驗精密量取混合標準液的濃溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，作為混合標準溶液。按“2.1”項下色譜條件檢測，根據(jù)不同農(nóng)藥的信噪比，將該標準液再稀釋一定倍數(shù)后按上述色譜條件檢測，結果α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、環(huán)氧七氯、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDT、PP'-DDD、順氯丹、七氯、反氯丹、艾氏劑、六氯苯的檢測限分別為0.2、0.2、0.2、0.2、0.2、0.2、0.5、0.2、0.4、0.5、0.2、0.2、0.5、0.2 μg·L-1。

2.7轉(zhuǎn)移率的測定原藥材粉末中農(nóng)藥殘留測定結果均低于檢出限，因此，浸膏中所含農(nóng)藥的總量可視為由所加入農(nóng)藥轉(zhuǎn)移而來，其轉(zhuǎn)移率結果見表5。

3討論

通過對上述14種有機氯農(nóng)藥在當歸、白芷、甘草藥材水提取和70%乙醇提取前后轉(zhuǎn)移率結果進行比較發(fā)現(xiàn)，有機氯農(nóng)藥在提取過程中的分解、降解程度有一定的差異，70%乙醇提取前后的有機氯農(nóng)藥轉(zhuǎn)移率普遍高于水提取的轉(zhuǎn)移率，δ-BHC農(nóng)藥的轉(zhuǎn)移率最高。

進行有機氯農(nóng)藥隨飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率試驗研究為制劑的安全性評估提供了參考依據(jù)，因此對制劑中有機氯農(nóng)藥殘留的監(jiān)測有一定的必要性。

參考文獻

[1]梁衛(wèi)青,浦錦寶,鄭軍獻,等.氣相色譜法測定中藥材中有機氯農(nóng)藥殘留量[J].浙江中醫(yī)雜志,2011,46(5):376-377.

[2]程壽峰,張明時,夏品華.30種黔產(chǎn)中藥材飲片中11中有機氯農(nóng)藥殘留的污染調(diào)查與研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2013,24(9):2288-2290.

[3]楊立新,張永欣,張啟偉,等.毛細管氣相色譜法測定中藥材中19種有機氯類農(nóng)藥殘留[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(4):96-99.

[4]郭萬周,賈荷麗,楊媛媛.毛細管氣相色譜法測定南陽道地藥材唐半夏的有機氯農(nóng)藥殘留[J] .河南中醫(yī)藥學刊,2012,27(2):201-202.

[5]隆穎,栗建明,陳浩銨，等.毛細管氣相色譜法測定半夏中20種有機氯農(nóng)藥的殘留量[J].中國新藥與臨床藥理,2010,21(5):528-530.

[6]謝耀軒,王淑紅,王鐵杰,等.分散固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣象色譜-質(zhì)譜法檢測香港中成藥中20種有機氯農(nóng)藥殘留[J].沈陽藥科大學學報,2014,31(7):535-541.

[7]馬麟,段啟,周海玲.氣相色譜法測定太子參中有機氯農(nóng)藥殘留量[J].廣州中醫(yī)藥大學學報,2011,28(3)：268-271.

[8]關澤明,郭曉玲,陸子釗.GC法測定人參有機氯農(nóng)藥殘留物的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011,7(10) :42-45.

[9]李妮娜,王舉濤.氣相色譜法對丹參中有機氯農(nóng)藥殘留的分析研究[J].安徽醫(yī)藥,2015，19(4)：656-659.

Determination of transfer rates of organochlorine pesticides with medicinal slices decocting rate of before and after by gas chromatography method

LUE Qian1,WANG Guo-hai2

(1.TraditionalChinesemedicineroomofWeinanInstituteforControlofFoodandDrug.Weinan,Shaanxi714000;2.TraditionalChineseMedicineRoomofShaanxiProvincialInstituteforControlofFoodandDrug,Xi′an,Shaanxi710061,China)

Abstract:ObjectiveBy determining the transfer rates of fourteeen organochlorine pesticides with Angelica sinensis.Radix Angelicae Dahuricae.Radix Glycyrrhiza medicinal slices decocting of before and after to provide some references for safety evalustion.MethodsUsing sulfonated prepared samples.Determining by Gas Chromatograph (GC)-Electron Capture Detector(ECD) with DB-1701 capillary column(30 m ×0.32 mm×0.25 μm).The column temperature was programmed,injection temperature was 230℃，detector temperature was 230℃.ResultsThe transfer rates of fourteeen organochlorine pesticides with three medicinal slices between 0～32.9% and 0～49.1%.ConclusionOrganochlorine pesticides have bigger loss with medicinal slices decocting of before and after.The transfer rates of different organochlorine pesticides have difference.Detection of pesticide residues has certain necessity and provide safety nets for drugs.

Key words:HERBAL PIECES FOR DECOCTION;Pesticide Residues;Gas Chromatography-Mass Spectrometry

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.012

(收稿日期：2016-02-07，修回日期：2016-03-28)