呂　倩，王國海

(1.渭南市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，陜西 渭南　714000；2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，陜西 西安　710061)

氣相色譜法測定有機(jī)氯農(nóng)藥隨飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率

呂倩1，王國海2

(1.渭南市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，陜西 渭南714000；2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，陜西 西安710061)

摘要：目的通過測定14種有機(jī)氯農(nóng)藥隨當(dāng)歸、白芷、甘草飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率，為制劑的安全性評(píng)估提供參考依據(jù)。方法采用磺化法制備樣品，用氣相色譜法―ECD電子捕獲檢測器測定，DB-1701(30 m×0.32 mm×0.25 μm)毛細(xì)管色譜柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度230℃，檢測器溫度250℃。結(jié)果3種飲片中14種有機(jī)氯農(nóng)藥轉(zhuǎn)移率分別在0～32.9%與0～49.1%之間。結(jié)論有機(jī)氯農(nóng)藥在伴隨飲片煎煮前后有較大的損失，不同農(nóng)藥其轉(zhuǎn)移率存在一定的差異，監(jiān)測農(nóng)藥殘留有一定的必要性，為藥品的安全性提供保障。

關(guān)鍵詞：飲片;農(nóng)藥殘留量;氣相色譜-質(zhì)譜法

隨著中醫(yī)藥事業(yè)的快速發(fā)展，中藥材的需求量劇增，在天然藥用資源供不應(yīng)求的今天，人工栽培已經(jīng)成為了中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展中舉足輕重的一環(huán)。中藥種植過程中易受到病蟲危害越，農(nóng)藥雖然可以很好地進(jìn)行控制，但同時(shí)也帶來了污染[1]，一定程度上制約了中藥材、中藥飲片及其制劑的發(fā)展。我國于20世紀(jì)80年代末宣布禁止使用滴滴涕、六六六等有機(jī)氯農(nóng)藥，但由于此類農(nóng)藥為高效廣譜殺蟲劑，具有穩(wěn)定性高、半衰期長、不易降解和代謝、可引起積蓄性中毒等特點(diǎn)[2-3]，因此近年來在中藥材六六六、滴滴涕等農(nóng)藥殘留量測定方面的報(bào)道很多[4-7]，但農(nóng)藥殘留量在制劑過程中的轉(zhuǎn)移率尚不明確。因此，研究農(nóng)藥在飲片、制劑中的殘留轉(zhuǎn)移情況有著重要的意義。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 6890氣相色譜儀，電子捕獲檢測器(ECD)；超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥農(nóng)藥對(duì)照品：六六六包括(α-BHC，GBW(E)06008112001，49.8 mg·L-1；β-BHC，GBW(E)06008212002，50.0 mg·L-1；γ-BHC，GBW(E)06008312001，50.2 mg·L-1；δ-BHC，GBW(E)06008412001，50.1 mg·L-1)4種異構(gòu)體，滴滴涕包括(PP’-DDT，GBW(E)06010212001，50.2 mg·L-1；OP’-DDT，GBW(E)06010312001，50.0 mg·L-1；PP’-DDE，GBW(E)06010412002，50.0 mg·L-1；PP’-DDD，GBW(E)06010512001，50.0 mg·L-1)4種異構(gòu)體，六氯苯(GSB05-1846-2008，100.0 mg·L-1)，七氯(GSB05-2316-2008，100.0 mg·L-1)，艾氏劑(GSB05-2320-2008，100.0 mg·L-1)，反氯丹(SB05-065-2008，20.0 mg·L-1)，順氯丹(SB05-064-2008，20.0 mg·L-1)，環(huán)氧七氯(GSB05-2317-2008，100.0 mg·L-1)均由中國計(jì)量科學(xué)研究院提供；當(dāng)歸、白芷、甘草由制藥企業(yè)提供；正己烷為色譜純，二氯甲烷、濃硫酸、丙酮均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：DB-1701毛細(xì)管柱(30 m ×0.32 mm×0.25 μm)；程序升溫：初始溫度140 ℃，以5 ℃·min-1的速率升溫至230 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度230 ℃，ECD檢測器，檢測器溫度250 ℃，進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣，載氣(氮?dú)?，流速：1.5 mL·min-1；尾吹氣：50 mL·min-1。在此條件下色譜圖見圖1，各成分保留時(shí)間見表1。

A對(duì)照品溶液B白芷供試品溶液

注：1.六氯苯；2.α-BHC；3.γ-BHC；4.七氯；5.艾氏劑；6.β-BHC；7.δ-BHC；8.環(huán)氧七氯；9.反氯丹；10.順氯丹；11.PP'-DDE；12.OP'-DDT；13.PP'-DDD；14.PP'-DDT。

圖1　14種有機(jī)氯農(nóng)藥混合對(duì)照品溶液(A)和白芷供試品溶液(B)色譜圖

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密吸取14種農(nóng)藥對(duì)照品溶液適量，置100 mL的量瓶中，用正己烷稀釋并定容至刻度，搖勻，作為混合標(biāo)準(zhǔn)液的濃溶液，品種及濃度見表2。分別精密吸取濃溶液1、2、4、6、8、10 mL至10 mL量瓶中，用正己烷定容至刻度，作為系列對(duì)照溶液。

表2　混合對(duì)照品濃溶液的濃度

2.3供試品溶液的制備

2.3.1藥材供試液的制備[8-9]取當(dāng)歸、白芷、甘草藥材粉末各5 g，精密稱定，分別置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使分層(必要時(shí)可離心)，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，氮吹至近干，加少量正己烷如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加正己烷精密稀釋至5 mL，緩慢加入硫酸1 mL，振搖1 min，離心10 min，取上清液，濾過，即得。

2.3.2浸膏的制備由于原藥材中農(nóng)藥種類及殘留量都有限，需加入適量農(nóng)藥來模擬試驗(yàn)。精密稱取當(dāng)歸、白芷、甘草藥材粉末各4份，每份120 g，均將其平均分為兩組，每組每份樣品中均加入14種有機(jī)氯農(nóng)藥的濃溶液，見表3，一組加水(8倍量)回流提取兩次，另一組加70%乙醇(8倍量)回流提取兩次，每次4 h，濾過，合并提取液，分別置稱定的蒸發(fā)皿中，于水浴鍋上濃縮為浸膏，稱定浸膏與蒸發(fā)皿總重，計(jì)算浸膏量，浸膏備用。

表3　藥材中添加農(nóng)藥的品種及添加量

2.3.3浸膏供試液的制備各精密稱取相當(dāng)于5 g原藥材粉末量的浸膏,分別置100 mL具塞錐形瓶中，自“2.3.1”項(xiàng)下“加水20 mL……”起重復(fù)操作，制備供試品溶液。

2.4精密度試驗(yàn)取測定項(xiàng)下的同一種對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各峰面積，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、環(huán)氧七氯、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDT、PP'-DDD、順氯丹、七氯、反氯丹、艾氏劑、六氯苯峰面積的RSD值分別為1.2%、1.0%、1.3%、0.9%、0.8%、1.1%、1.2%、1.1%、1.3%、0.9%、0.7%、1.5%、1.0%、1.0%，表明儀器精密度良好。

2.5加樣回收試驗(yàn)精密稱取白芷藥材粉末6份，每份5 g,分別置100 mL具塞錐形瓶中，各加入混合標(biāo)準(zhǔn)液1 mL，自“2.3.1”項(xiàng)下 “加水20 mL……”起重復(fù)操作，制備供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算其回收率，結(jié)果見表4。

表4　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表5　轉(zhuǎn)移率結(jié)果

注：“-”標(biāo)示浸膏中農(nóng)藥殘留量低于檢出限。

2.6檢測限試驗(yàn)精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)液的濃溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件檢測，根據(jù)不同農(nóng)藥的信噪比，將該標(biāo)準(zhǔn)液再稀釋一定倍數(shù)后按上述色譜條件檢測，結(jié)果α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、環(huán)氧七氯、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDT、PP'-DDD、順氯丹、七氯、反氯丹、艾氏劑、六氯苯的檢測限分別為0.2、0.2、0.2、0.2、0.2、0.2、0.5、0.2、0.4、0.5、0.2、0.2、0.5、0.2 μg·L-1。

2.7轉(zhuǎn)移率的測定原藥材粉末中農(nóng)藥殘留測定結(jié)果均低于檢出限，因此，浸膏中所含農(nóng)藥的總量可視為由所加入農(nóng)藥轉(zhuǎn)移而來，其轉(zhuǎn)移率結(jié)果見表5。

3討論

通過對(duì)上述14種有機(jī)氯農(nóng)藥在當(dāng)歸、白芷、甘草藥材水提取和70%乙醇提取前后轉(zhuǎn)移率結(jié)果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，有機(jī)氯農(nóng)藥在提取過程中的分解、降解程度有一定的差異，70%乙醇提取前后的有機(jī)氯農(nóng)藥轉(zhuǎn)移率普遍高于水提取的轉(zhuǎn)移率，δ-BHC農(nóng)藥的轉(zhuǎn)移率最高。

進(jìn)行有機(jī)氯農(nóng)藥隨飲片煎煮前后的轉(zhuǎn)移率試驗(yàn)研究為制劑的安全性評(píng)估提供了參考依據(jù)，因此對(duì)制劑中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的監(jiān)測有一定的必要性。

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Determination of transfer rates of organochlorine pesticides with medicinal slices decocting rate of before and after by gas chromatography method

LUE Qian1,WANG Guo-hai2

(1.TraditionalChinesemedicineroomofWeinanInstituteforControlofFoodandDrug.Weinan,Shaanxi714000;2.TraditionalChineseMedicineRoomofShaanxiProvincialInstituteforControlofFoodandDrug,Xi′an,Shaanxi710061,China)

Abstract:ObjectiveBy determining the transfer rates of fourteeen organochlorine pesticides with Angelica sinensis.Radix Angelicae Dahuricae.Radix Glycyrrhiza medicinal slices decocting of before and after to provide some references for safety evalustion.MethodsUsing sulfonated prepared samples.Determining by Gas Chromatograph (GC)-Electron Capture Detector(ECD) with DB-1701 capillary column(30 m ×0.32 mm×0.25 μm).The column temperature was programmed,injection temperature was 230℃，detector temperature was 230℃.ResultsThe transfer rates of fourteeen organochlorine pesticides with three medicinal slices between 0～32.9% and 0～49.1%.ConclusionOrganochlorine pesticides have bigger loss with medicinal slices decocting of before and after.The transfer rates of different organochlorine pesticides have difference.Detection of pesticide residues has certain necessity and provide safety nets for drugs.

Key words:HERBAL PIECES FOR DECOCTION;Pesticide Residues;Gas Chromatography-Mass Spectrometry

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.012

(收稿日期：2016-02-07，修回日期：2016-03-28)