張武財(cái)　董曉慧*　譚北平　章　雙　遲淑艷　楊奇慧　劉泓宇　陳效儒

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.通威股份有限公司，成都610041)

飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能、組織生化指標(biāo)和肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

張武財(cái)1董曉慧1*譚北平1章雙1遲淑艷1楊奇慧1劉泓宇1陳效儒2

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.通威股份有限公司，成都610041)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能、組織生化指標(biāo)和肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響。在以酪蛋白為主要蛋白質(zhì)源的基礎(chǔ)飼料中分別添加0(對照組)、5、10、15、20和25 g/kg的膽固醇，配制成6種等氮等能試驗(yàn)飼料，并分別命名為C0、C0.5、C1、C1.5、C2和C2.5，飼料中膽固醇實(shí)測含量分別為2.6、7.5、12.7、17.2、22.2和27.2 g/kg，投喂360尾平均初重為(84.30±0.25) g的斜帶石斑魚10周。每種試驗(yàn)飼料設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)投喂20尾魚。結(jié)果表明：隨著飼料膽固醇含量的升高，增重率(WGR)、蛋白質(zhì)效率(PER)和飼料效率(FE)呈先上升后下降的趨勢。C0.5組WGR、PER和FE最高且顯著高于對照組(P<0.05)。各添加組全魚粗脂肪含量顯著高于對照組(P<0.05)，粗灰分含量顯著低于對照組(P<0.05)。肝臟總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量隨飼料膽固醇含量的升高而上升，肌肉TC和TG含量不受飼料膽固醇含量的顯著影響(P>0.05)。隨飼料膽固醇含量的上升，血清TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量先上升后趨于平穩(wěn)，血清HDL-C/LDL-C呈下降趨勢。C2.0組血清TG含量顯著高于對照組(P<0.05)，C2.5組血清HDL-C含量顯著高于對照組和C0.5、C1.5組(P<0.05)，C2.5組血清LDL-C含量顯著高于其他各組(P<0.05)，對照組血清HDL-C/LDL-C顯著高于各添加組(P<0.05)。隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚肝臟蘋果酸酶(ME)活性呈升高趨勢，C1.5、C2.0和C2.5組顯著高于其他組(P<0.05)；肝臟肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰ(CPTⅠ)活性先下降后趨于平穩(wěn)，對照組顯著高于其他組(P<0.05)；肝臟CYP7A1活性則先上升后趨于平穩(wěn)，以C2.5組活性最高，較對照組升幅達(dá)35.48%(P<0.05)。本試驗(yàn)中，以WGR和肝臟膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行折線模型分析得出，斜帶石斑魚對飼料中膽固醇的需要量分別為7.43和8.70 g/kg。

關(guān)鍵詞：斜帶石斑魚；膽固醇；生長性能；生化指標(biāo)；脂肪代謝

魚粉是配合飼料中的重要原料，含有豐富的膽固醇。近年來，隨著漁業(yè)資源的日益緊缺，魚粉被其他蛋白質(zhì)原料大量替代，導(dǎo)致部分配合飼料的膽固醇含量越來越低，而攝食低魚粉飼料魚類的生長性能會(huì)較攝食高魚粉的低下[1-4]。膽固醇是魚體重要的化學(xué)組成成分，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞膜流動(dòng)性，是腎上腺激素、性激素、維生素D和膽汁酸等生命物質(zhì)的重要前體[5-7]。膽固醇在人類健康領(lǐng)域已經(jīng)進(jìn)行了深入的研究，然而關(guān)于海水魚類對膽固醇需求的研究卻較少[6,8]。

研究者普遍認(rèn)為魚類飼料中不需要額外添加膽固醇[9]。在以動(dòng)物性蛋白質(zhì)原料為蛋白質(zhì)源的基礎(chǔ)飼料中添加膽固醇對大西洋鮭[6](SalmosalarL.)、雜交條紋鱸[7](Moronechrysops×M.saxatilis)和軍曹魚[10](Rachycentroncanadum)的生長無顯著影響。但國內(nèi)有學(xué)者報(bào)道，在以脫脂魚粉為蛋白質(zhì)源的飼料中添加膽固醇促進(jìn)了大菱鲆的生長[11]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在以植物蛋白質(zhì)為蛋白質(zhì)源的基礎(chǔ)飼料中添加1%的膽固醇能顯著促進(jìn)魚類的生長和攝食[12-15]。在大鼠上的試驗(yàn)證實(shí)，膽固醇會(huì)提升肝臟甘油三酯(triglyceride，TG)的蓄積，并且會(huì)造成脂肪酸β-氧化下降[16]。也有國外學(xué)者報(bào)道飼料中添加膽固醇會(huì)提高虹鱒肌肉粗脂肪含量并且可使魚體內(nèi)脂肪酸β-氧化下降[17]。目前為止，膽固醇對魚類脂肪代謝影響的相關(guān)研究還很少。

斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)是一種熱帶亞熱帶的底棲型魚類，是我國南方沿海地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖品種，但至今斜帶石斑魚養(yǎng)殖大部分依然使用飼料魚進(jìn)行投喂，高效健康的配合飼料還處在發(fā)展階段，關(guān)于膽固醇在斜帶石斑魚生長上的作用還尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)主要探究飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能、組織生化指標(biāo)和肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響，以期為斜帶石斑魚合理配合飼料的研制提供相關(guān)試驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)飼料

以酪蛋白(甘肅華羚實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司產(chǎn)品)、俄羅斯白魚粉和明膠(羅塞洛明膠有限公司產(chǎn)品)為主要蛋白質(zhì)源，并分別添加0(對照)、5、10、15、20和25 g/kg的膽固醇配制成6種等氮等能的試驗(yàn)飼料(表1)，分別用C0、C0.5、C1、C1.5、C2和C2.5進(jìn)行命名，對應(yīng)的試驗(yàn)飼料中膽固醇含量分別為2.6、7.5、12.7、17.2、22.2和27.2 g/kg。所有原料粉碎之后過40目篩，按配方比例放到V型立式混合機(jī)中混勻，將膽固醇均勻溶于魚油和玉米油后，再將混合油與其他各原料混合均勻，最后用F-26型雙螺桿擠條機(jī)常溫加工成沉性顆粒飼料(直徑為6.0 mm)，室內(nèi)常溫風(fēng)干至水分含量約13%左右后用密封保鮮袋分裝，于-20 ℃冰箱冷凍備用。

表1　試驗(yàn)飼料組成和營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目ItemsC0C0.5C1C1.5C2C2.5營養(yǎng)水平Nutrientlevels水分Moisture12.8813.3813.2612.9513.0913.36粗灰分Ash6.055.996.066.015.895.93粗蛋白質(zhì)Crudeprotein51.3750.9951.5551.6451.9351.34粗脂肪Crudelipid9.5510.1610.6811.1311.6712.18膽固醇Cholesterol0.260.751.271.722.222.72

1)每克維生素預(yù)混料含One gram vitamin premix contained the following：VA 29 070 IU，VD32 000 000 IU，VE 99 mg，VK35.0 mg，VB125.50 mg，VB225 mg，VB650 mg，VB120.1 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 61 mg，煙酸 nicotinic acid 101 mg，生物素 biotin 2.5 mg，肌醇 inositol 153.06 mg，葉酸 folic acid 6.25 mg，纖維素 cellulose 411.59 mg。

2)每克礦物質(zhì)預(yù)混料含One gram mineral premix contained the following：KIO40.03 mg，CoCl2·6H2O 4.07 mg，CuSO4·5H2O 19.84 mg，檸檬酸鐵 ferric citrate 13.71 mg，ZnSO4·7H2O 28.28 mg,MnSO4·7H2O 0.12 mg，MgSO4·H2O 12.43 mg,KCl 15.33 mg，Na2SeO32 mg，Ca(H2PO4)280 mg，沸石粉 zeolite powder 824.19 mg。

1.2試驗(yàn)用魚及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用斜帶石斑魚購于廣東湛江東海島東簡鎮(zhèn)后海村魚場，養(yǎng)殖試驗(yàn)在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)里進(jìn)行。魚苗運(yùn)回后在方形水泥池中投喂對照組飼料馴化2周。挑選體質(zhì)健康、平均體重為(84.30±0.25) g的斜帶石斑魚，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于室內(nèi)容積為1 m3的圓柱玻璃鋼桶(加水量約為900 L)內(nèi)。試驗(yàn)期間水溫26～30 ℃，鹽度25～28，pH 7.8～8.2，溶解氧濃度不低于5 mg/L。每日飽食投喂2次(08:00和17:00)，試驗(yàn)水為經(jīng)過沙濾、沉淀的海水，試驗(yàn)期間每日早晨換水1次，換水量為總體積60%～80%，試驗(yàn)周期為10周。

1.3樣品采集及分析方法

1.3.1樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束禁食24 h，取樣前桶內(nèi)試驗(yàn)魚用丁香酚麻醉后稱重、點(diǎn)數(shù)，每重復(fù)隨機(jī)取3尾魚，-20 ℃保存?zhèn)錅y魚體常規(guī)成分；每重復(fù)另隨機(jī)取3尾魚，分別測量體重和體長，計(jì)算肥滿度，然后分離內(nèi)臟團(tuán)并稱重后計(jì)算臟體比，從內(nèi)臟團(tuán)中剝離脂肪和肝臟并稱重后分別計(jì)算腹脂比和肝體比；每重復(fù)再隨機(jī)選取5尾魚，尾靜脈采血，將血樣放入離心管中，4 ℃靜置6 h后4 000×g、4 ℃離心15 min，收集血清并于-80 ℃保存?zhèn)錅y血清生化指標(biāo)；最后每重復(fù)再隨機(jī)取5尾魚，分離肝臟和肌肉，-80 ℃保存?zhèn)錅yTG、總膽固醇(total cholesterol,TC)含量。

1.3.2測定方法

試驗(yàn)飼料、全魚常規(guī)成分的測定參照AOAC(2006)[18]的方法進(jìn)行，水分含量采用105 ℃干燥法測定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測定，粗脂肪含量采用索式抽提法(抽提溶劑為石油醚)測定，粗灰分含量采用550 ℃馬福爐灼燒法測定。飼料中的膽固醇含量參照Yun等[12]的方法測定，具體操作如下：取飼料500 mg，以1∶9(質(zhì)量體積比)加入氯仿與甲醇的混合液(2∶1，體積比)提取脂肪，24 h后3 500 r/min離心5 min，取上清含脂肪溶液500 μL，用高純度氮?dú)獯蹈傻玫接椭恋?，? mL異丙醇(含100 g/L Triton X-100)溶解，將溶解后樣品使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。

斜帶石斑魚血清TG、TC、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)含量及堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,GOT)活性均用日立7020全自動(dòng)生化分析儀測定，肝臟、肌肉中的TC和TG含量分別按Folch等[19]和Fletcher[20]的方法進(jìn)行處理，測定方法參照Yun等[12]。

肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性測定：在2 mL預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中剪取1 g的肝臟，在冰水浴中制備肝臟勻漿液，4 ℃條件下3 000 r/min離心20 min，小心吸取上清液分裝并保存于-80 ℃?zhèn)錅y。肝臟蘋果酸酶(malic enzyme,ME)和肉堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ(carnitine palmitoyltrans-ferase Ⅰ，CPTⅠ)活性采用南京建成生物工程研究所生成的試劑盒測定，膽固醇7α-羥化酶(cholesterol 7α hydroxylase,CYP7A1)活性采用北京冬歌生物有限公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒測定，操作步驟均按說明書進(jìn)行。

1.4計(jì)算公式

增重率(weight gain rate,WGR,%)=100×

(Wf-Wi)/Wi；

蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER,%)=

100×(Wf-Wi)/FP；

飼料效率(feed efficiency,FE)=(Wf-Wi)/FC；

成活率(survival rate,SR,%)=100×Nf/Ni；

攝食率(feeding intake rate,FI,%)=100×FC/

[(Wf+Wi)/2]/D；

肥滿度(condition factor,CF,%)=100×W/L3；

臟體比(viscerasomatic index,VSI,%)=

100×Wm/W；

腹脂比(intraperitoneal fat,IPF,%)=

100×Wz/W；

肝體比(hepeto somatic index,HSI,%)=

100×Wg/W。

式中：Wi為平均初始體重(g)；Wf為平均終末體重(g)；FP為平均蛋白質(zhì)攝入量(g)；FC為平均飼料攝入量(g)；Ni為初始魚尾數(shù)(尾)；Nf為終末魚尾數(shù)(尾)；D為飼喂天數(shù)(d)；W為體重(g)；L為體長(cm)；Wm為內(nèi)臟團(tuán)重量(g)；Wz為腹腔脂肪重量(g)；Wg為肝臟重量(g)。

1.5統(tǒng)計(jì)分析

本試驗(yàn)所得到數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，并應(yīng)用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)組間差異顯著時(shí)，進(jìn)行Duncan氏多重比較分析，P<0.05表示差異顯著。

2結(jié)果

2.1飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

如表2所示，隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚的臟體比和肝體比有上升趨勢，但各組間差異不顯著(P>0.05)。飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚的肥滿度和腹脂率無顯著影響(P>0.05)。

表2　飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

2.2飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

如表3所示，飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚的成活率無顯著影響(P>0.05)，各組試驗(yàn)魚的成活率均在91.11%～100.00%。隨著飼料膽固醇含量的升高，增重率、蛋白質(zhì)效率和飼料效率呈先上升后下降的趨勢。C0.5組的增重率顯著高于其他各組(P<0.05)，C1.0和C1.5組的增重率顯著高于對照組并顯著低于C0.5組(P<0.05)，與其他2組無顯著差異(P>0.05)。蛋白質(zhì)效率與增重率的變化趨勢相似。C2.5組的蛋白質(zhì)效率和飼料效率最低。攝食率隨著飼料膽固醇含量的升高呈逐漸上升趨勢，但各組間差異并不顯著(P>0.05)。

飼料膽固醇含量(x)和斜帶石斑魚增重率(y)的關(guān)系如圖1所示，通過折線模型擬合后得到：y=4.559 2x+123.7(R2=1.000)和y=-0.822 8x+163.7(R2=0.920)。以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，當(dāng)飼料膽固醇含量為7.43 g/kg時(shí)，斜帶石斑魚的增重率達(dá)到最大值。

2.3飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚體成分的影響

如表4所示，各組全魚水分和粗蛋白質(zhì)含量差異不顯著(P>0.05)。對照組全魚粗脂肪含量顯著低于各添加組(P<0.05)，各添加組間無顯著差異(P>0.05)。對照組全魚粗灰分含量顯著高于各添加組(P<0.05)，各添加組間無顯著差異(P>0.05)。

表3　飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1　飼料膽固醇含量與斜帶石斑魚增重率

2.4飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚血清、肝臟和肌肉生化指標(biāo)的影響

如表5所示，隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚血清TG、TC、HDL-C和LDL-C含量均先上升后趨于平穩(wěn)。C2.0組血清TG含量顯著高于對照組(P<0.05)，但和其他組無顯著差異(P>0.05)。C2.5組血清HDL-C含量與C1.0和C2.0組無顯著差異(P>0.05)，但顯著高于對照組和C0.5、C1.5組(P<0.05)。C2.5組血清LDL-C含量顯著高于其他各組(P<0.05)，C1.0、C1.5和C2.0組血清LDL-C含量顯著低于C2.5組并顯著高于對照組(P<0.05)。對照組血清HDL-C/LDL-C顯著高于各添加組(P<0.05)，C0.5組血清HDL-C/LDL-C顯著低于對照組并顯著高于C2.5組(P<0.05)，與其他組差異不顯著(P>0.05)。各組血清AKP和GOT活性無顯著差異(P>0.05)。肝臟TC含量隨飼料膽固醇含量的升高而上升，C1.0、C1.5、C2.0和C2.5組顯著高于對照組(P<0.05)。肝臟TG含量隨飼料膽固醇含量的升高而上升，C1.5和C2.5組顯著高于對照組和C0.5組(P<0.05)。各組肌肉TG、TC含量無顯著差異(P>0.05)。

2.5飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

如表6所示，隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚肝臟ME活性呈升高趨勢，C1.5、C2.0和C2.5組顯著高于其他組(P<0.05)，其中C2.5組較對照組升高18.81%；肝臟CPTⅠ活性則先下降后趨于平穩(wěn)，對照組顯著高于其他組(P<0.05)。肝臟CYP7A1活性隨飼料膽固醇含量的升高先上升后趨于平穩(wěn)，C1.5、C2.0和C2.5組間無顯著差異(P>0.05)，以C2.5組活性最高，較對照組升幅達(dá)35.48%(P<0.05)。

飼料膽固醇含量(x)與斜帶石斑魚肝臟CYP7A1活性(y)的關(guān)系如圖2所示，經(jīng)折線模型擬合得到：y=21.571x+352.710(R2=1.000)和y=4.374 1x+502.24(R2=0.834)。以肝臟CYP7A1活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，斜帶石斑魚對飼料中膽固醇的需要量為8.70 g/kg。

表4　飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚體成分的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表5　飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚血清、肝臟和肌肉生化指標(biāo)影響

3討論

3.1飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

表6　飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

圖2　飼料膽固醇含量與斜帶石斑魚肝臟CYP7A1活性關(guān)系的折線模型分析

在以植物蛋白質(zhì)源為主的基礎(chǔ)飼料中添加膽固醇可以促進(jìn)大菱鲆[12]、牙鲆[14]和虹鱒[15]的攝食，研究者推測膽固醇在飼料以植物蛋白質(zhì)源作為主要蛋白源時(shí)可能具有誘食作用，但具體作用機(jī)理還未確定。本研究中，隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚的攝食率有升高的趨勢，并且在投喂過程也觀察到添加膽固醇的組試驗(yàn)魚的攝食比對照組要快，但在各組間并無顯著差異，這個(gè)結(jié)果與Zhu等[11]的結(jié)果一致。

3.2飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚體成分和組織生化指標(biāo)的影響

飼料中添加膽固醇可以促進(jìn)大菱鲆膽汁酸的分泌和脂肪的沉積[12]，可提高牙鲆腸道脂肪酶活性和脂肪表觀消化率[28]。在本試驗(yàn)中，飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚全魚粗脂肪含量影響顯著，這與大菱鲆[11-12]和牙鲆[28]的研究結(jié)果相似，對照組全魚粗脂肪含量顯著低于其他組，表明飼料中適量的膽固醇可促進(jìn)斜帶石斑魚對脂肪的吸收，增加脂肪的儲(chǔ)存。但是飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚全魚水分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響，相同研究結(jié)果還出現(xiàn)在大西洋鮭[6]、大菱鲆[11-12]、牙鲆[28]上。本試驗(yàn)中，對照組斜帶石斑魚全魚粗灰分含量顯著高于其他各組，這與大菱鲆[11-12]和牙鲆[28]的結(jié)果有差異，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

有研究表明，膽固醇能夠顯著提高大鼠肝臟中TG和TC的含量[16]。同樣地，在本試驗(yàn)中，斜帶石斑魚肝臟中TG含量隨飼料膽固醇含量的升高而上升，表明膽固醇促進(jìn)了斜帶石斑魚肝臟中TG的合成。類似的研究在雜交條紋鱸[7]上也曾被報(bào)道過。肝臟TG含量是反映脂肪沉積的一個(gè)重要指標(biāo)，肝臟TG含量上升可能會(huì)引起脂肪肝，從而干擾肝臟的脂肪代謝。肝臟也是合成膽固醇的主要場所，是肝外組織膽固醇的主要來源。本試驗(yàn)中，隨著飼料膽固醇含量的上升，斜帶石斑魚肝臟TC含量逐漸升高，這與在大菱鲆[11-12]上的研究結(jié)果相同，表明飼料中膽固醇促進(jìn)了膽固醇在斜帶石斑魚肝臟中的沉積。肝臟TG和TC含量的升高都可能會(huì)造成肝臟脂肪代謝紊亂，從而影響魚類的生理代謝，這也可能是飼喂高含量膽固醇飼料組斜帶石斑魚生長性能下降的原因之一。

血液生化指標(biāo)的變化能客觀地反映魚類的健康狀況，血清中過高的TG和TC含量有可能對動(dòng)物體產(chǎn)生危害[29-30]。本試驗(yàn)中，隨著飼料膽固醇含量的升高，血清中TG、HDL-C和LDL-C的含量都呈現(xiàn)升高的趨勢，類似結(jié)果Zhu等[11]、Yun等[12]和陳京華等[28]曾報(bào)道過，表明血清中的TG、HDL-C和LDL-C含量與飼料中膽固醇含量呈正相關(guān)。TG作為魚類的能源物質(zhì)，參與能量的釋放和儲(chǔ)存，血清中TG含量升高表明肝臟中脂肪的分解能力下降[31]。HDL-C/LDL-C能夠反映魚體內(nèi)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)狀況，同時(shí)也是反映動(dòng)脈粥脈硬化程度的指標(biāo)[12]。本試驗(yàn)中，隨飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚血清HDL-C/LDL-C呈下降趨勢，這與在大菱鲆[11-12]上的研究結(jié)果相同，表明隨著飼料膽固醇含量的升高，魚體中可能積累了更多的膽固醇[11]。

3.3飼料膽固醇含量對斜帶石斑魚肝臟脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

CYP7A1是肝臟中膽固醇合成膽汁酸過程的關(guān)鍵酶[32]。而膽汁酸具有親水性和親油性，能有效乳化脂肪和增強(qiáng)消化道脂肪合成酶的活性，促進(jìn)脂肪的吸收，并且提高機(jī)體脂肪的沉積[33]。在本研究中，隨飼料膽固醇含量的升高，肝臟CYP7A1活性先上升后趨于平穩(wěn)，這與Zhu等[11]和Yun等[12]的研究結(jié)果相似，表明膽固醇促進(jìn)了斜帶石斑魚肝臟膽汁酸合成能力。以肝臟CYP7A1活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得出斜帶石斑魚對飼料中膽固醇的需要量為8.70 g/kg，這一需要量高于以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)的需要量(7.43 g/kg)，可見，肝臟CYP7A1活性與生理穩(wěn)態(tài)的密切相關(guān)，且維持正常生理功能對膽固醇的需要量高于正常生長對膽固醇的需要量。

在哺乳動(dòng)物的試驗(yàn)中已被證實(shí)膽固醇會(huì)影響動(dòng)物機(jī)體的脂肪酸代謝[34-35]。ME在肝臟脂肪酸合成中提供煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)，是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶。本研究結(jié)果顯示，隨著飼料膽固醇含量的升高，斜帶石斑魚肝臟ME活性有升高的趨勢，這表明膽固醇可能增強(qiáng)了肝臟脂肪酸合成，肝臟TG含量的升高可能與此有關(guān)。對大鼠進(jìn)行的試驗(yàn)表明攝食膽固醇會(huì)降低大鼠肝臟ME的活性[16]，大鼠與斜帶石斑魚結(jié)果的差異可能與它們體內(nèi)脂肪酸代謝機(jī)制不同有關(guān)[36-37]。

肝臟是魚類脂肪酸β-氧化的主要場所，是魚體調(diào)節(jié)脂肪蓄積的重要器官[38]。CPTⅠ是線粒體中進(jìn)行脂肪酸β-氧化分解功能的關(guān)鍵酶，對脂肪的分解具有重要的調(diào)控功能。CPTⅠ在線粒體外膜內(nèi)側(cè)催化脂酰輔酶A轉(zhuǎn)化為脂酰肉堿，運(yùn)送到達(dá)線粒體基質(zhì)進(jìn)行β-氧化[33]。當(dāng)CPTⅠ活性下降時(shí)，脂肪酸分解水平可能也會(huì)下降。有研究表明，膽固醇會(huì)降低大鼠肝臟肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT)活性，并且降低CPTⅠ和CPTⅡ的表達(dá)量[16]。國外也有學(xué)者報(bào)道，添加1%的膽固醇會(huì)降低虹鱒體內(nèi)脂肪酸β-氧化分解[17]。本研究中，各添加組試驗(yàn)魚肝臟CPTⅠ活性均顯著低于對照組，表明膽固醇降低了斜帶石斑魚肝臟脂肪酸分解能力。肝臟脂肪酸β-氧化活力降低是脂肪酸轉(zhuǎn)化為TG和膽固醇酯的重要原因[39]，肝臟TG含量的升高可能也與此有關(guān)。

4結(jié)論

① 以增重率和肝臟CYP7A1活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過折線回歸模型得出斜帶石斑魚對飼料中膽固醇的需要量分別為7.43和8.70 g/kg。

② 飼料中添加膽固醇可提升魚體脂肪沉積，提高肝臟TC和TG含量及ME活性，但降低肝臟CPTⅠ活性。

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*Correspinding author, professor, E-mail: dongxiaohui2003@163.com

(責(zé)任編輯菅景穎)

Effects of Dietary Cholesterol Content on Growth Performance, Tissue Biochemical Indices and Liver Lipid Metabolism Related Enzyme Activities of Orange-Spotted Grouper (Epinepheluscoioides)

ZHANG Wucai1DONG Xiaohui1*TAN Beiping1ZHANG Shuang1CHI Shuyan1YANG Qihui1LIU Hongyu1CHEN Xiaoru2

(1. Laboratory of Aquatic Animal Nutrition and Feed, College of Fisheries, Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088, China; 2. Tongwei Co., Ltd., Chengdu 610041, China)

Abstract:A feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary cholesterol content on growth performance, tissue biochemical indices and liver lipid metabolism related enzyme activities of orange-spotted grouper (Epinephelus coioides). Taking casein as main protein source, six isoenergetic and isonitrogenous diets were formulated with the cholesterol adding levels of 0 (control group), 5, 10, 15, 20 and 25 g/kg, named as C0,C0.5,C1,C1.5,C2 and C2.5, and the measured values of cholesterol content in those diets were 2.6, 7.5, 12.7, 17.2, 22.2 and 27.2 g/kg, respectively, and then fed to 360 orange-spotted grouper with initial average body weight of (84.30±0.25) g for 10 weeks. Each diet was randomly assigned to three replicates with 20 fishes in each replicate. The results showed as follows: weight gain rate (WGR), protein efficiency ratio (PER) and feed efficiency (FE) were firstly increased and then decreased with the dietary cholesterol content increasing. The WGR, PER and FE of the C0.5 group were the highest and significantly higher than those of the control group (P<0.05). The whole body crude lipid content of adding groups was significantly higher than that of the control group (P<0.05), whereas the ash content of supplementation groups was significantly lower than that of the control group (P<0.05). The total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) contents in liver were increased with the dietary cholesterol content increasing, but the muscle TC and TG contents were not affected by dietary cholesterol content (P>0.05). With dietary cholesterol content increasing, serum TC, TG, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) contents were firstly increased and changed to be steady, and the HDL-C/LDL-C had a down trend. The serum TG content of the C2.0 group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), the serum HDL-C content of the C2.5 group was significantly higher than that of the C0.5 and C1.5 groups, control group (P<0.05), the serum LDL-C content of the C2.5 group was significantly higher than that of the other groups (P<0.05), and the HDL-C/LDL-C of control group was significantly higher than that of the adding groups (P<0.05). With the dietary cholesterol content increasing, the activity of malic enzyme (ME) in liver was increased, and that of C1.5, C2.0 and C2.5 group was significantly higher than that of the other groups (P<0.05); the activity of carnitine acyltransferase Ⅰ(CPTⅠ) in liver had a downtrend and then to be stable, and that of control group was significantly higher than that of the other groups (P<0.05); the activity of cholesterol 7α hydroxylase (CYP7A1) had a uptrend and then to be stable, and that of the C0.5 group was the highest and increased by 35.48% than that of the control group (P<0.05). In this experiment, base on the WGR and liver CYP7A1 activity as evaluation indices, the cholesterol requirement for the orange-spotted grouper determined by broken-line model analysis is 7.43 and 8.70 g/kg diet, respectively.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(6)：1945-1955]

Key words:orange-spotted grouper; cholesterol; growth performance; biochemical indices; lipid metabolism

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.06.038

收稿日期：2015-12-23

基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201003020)；廣東省教育廳科技創(chuàng)新基金(2013KJCX0096)

作者簡介：張武財(cái)(1992—)，男，廣東汕尾人，碩士研究生，從事水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料方向研究。E-mail: 1life41dream@sina.com *通信作者：董曉慧，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: dongxiaohui2003@163.com

中圖分類號(hào)：S963.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)06-1945-11