林　城，梁坤鈴，葉景聯(lián)

(1.廣東省東莞市石排醫(yī)院檢驗(yàn)科　523327；2.廣東省東莞市石碣醫(yī)院檢驗(yàn)科　523290)

·臨床研究·

兩種方法對(duì)乙型病毒性肝炎血清標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果分析

林城1，梁坤鈴2，葉景聯(lián)2

(1.廣東省東莞市石排醫(yī)院檢驗(yàn)科523327；2.廣東省東莞市石碣醫(yī)院檢驗(yàn)科523290)

摘要:目的比較乙型病毒性肝炎(以下簡(jiǎn)稱乙肝)兩對(duì)半(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 、抗-HBc)定量與定性檢測(cè)的差異及臨床意義。方法采用化學(xué)發(fā)光法(CLIA)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)197份臨床標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，并進(jìn)行對(duì)比分析。另對(duì)2 344份臨床標(biāo)本進(jìn)行CLIA檢測(cè)結(jié)果分析。結(jié)果兩種方法檢測(cè)結(jié)果經(jīng)配對(duì)χ2檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2 344份臨床標(biāo)本中抗-HBs≥10 mU/mL有1 264例，>100 mU/mL有843例，占抗-HBs>10 mU/mL比例為66.59%。結(jié)論定性的ELISA成本低廉，操作簡(jiǎn)單，基本可以滿足臨床的預(yù)防性篩查，而定量CLIA具有靈敏、特異、定量等優(yōu)點(diǎn)，有利于指導(dǎo)臨床對(duì)HBV感染治療方案的選擇、療效監(jiān)測(cè)及為保證機(jī)體有足夠抵抗HBV感染能力作出判定。

關(guān)鍵詞:乙肝兩對(duì)半；定量；定性

乙型肝炎病毒(HBV)是一種危害人類健康的常見病毒，能誘發(fā)肝臟疾病，從而對(duì)感染者及其家庭造成不良影響。乙型病毒性肝炎(以下簡(jiǎn)稱乙肝)的預(yù)防、診斷與治療等很大程度依賴乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)，目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法為ELISA，該方法成本低廉能滿足一般臨床需求；而化學(xué)發(fā)光法(CLIA)靈敏度較高可預(yù)防漏檢，且定量測(cè)定能早期診斷乙肝，并為臨床提供動(dòng)態(tài)的數(shù)據(jù)，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。本研究采用CLIA與ELISA兩種方法同時(shí)檢測(cè)197份臨床標(biāo)本，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，另外也分析了CLIA檢測(cè)的2 344份臨床標(biāo)本結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源隨機(jī)抽取來(lái)自東莞市石排醫(yī)院門診與住院部197份共乙肝兩對(duì)半測(cè)定的標(biāo)本，同時(shí)采用CLIA和ELISA分別做定量和定性測(cè)定。另選取2015年1～10月來(lái)東莞市石排醫(yī)院門診與住院部進(jìn)行CLIA定量檢測(cè)的標(biāo)本2 344份。所有標(biāo)本均采集靜脈血，與當(dāng)天分離血清進(jìn)行檢測(cè)。

1.2儀器與試劑采用鄭州安圖Lumo CLIA化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀；定性ELISA采用THERMO MULTISKAN熱電 MK3酶標(biāo)儀。均用e-Lisa全自動(dòng)加樣儀、深圳匯松PW-960全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc定量檢測(cè)試劑盒；中山生物工程有限公司生產(chǎn)的ELISA定性試劑盒。

1.3方法HBV血清學(xué)標(biāo)志物定量檢測(cè)采用CLIA，定性檢測(cè)采用ELISA，兩種方法均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書要求執(zhí)行，各自配以質(zhì)控品和臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

1.4判定方法ELISA定性結(jié)果參照試劑說(shuō)明書中的判定方法，CLIA檢測(cè)的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果：HBsAg>0.05 U/mL判為陽(yáng)性，反之為陰性；抗-HBs≥10 mU/mL判為陽(yáng)性，反之為陰性；HBeAg、抗-HBe和抗-HBc參照試劑說(shuō)明書中的判定方法。

1.5表述方法以1、2、3、4、5分別代表乙肝兩對(duì)半中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 、抗-HBc，并以陽(yáng)性項(xiàng)目的序號(hào)為該模式的代碼，如檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陰性、抗-HBs陽(yáng)性、HBeAg陰性、抗-HBe陽(yáng)性、抗-HBc陽(yáng)性，則該模式代碼為“2、4、5”，依此類推。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩種方法的結(jié)果用配對(duì)以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1乙肝兩對(duì)半5項(xiàng)采用兩種方法檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果比對(duì)見表1。采用CLIA與ELISA對(duì)197例臨床標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，兩種方法的結(jié)果經(jīng)配對(duì)χ2檢驗(yàn)，HBsAgχ2=0.50,P>0.05；抗-HBsχ2=2.25,P>0.05；HBeAgχ2=0.00,P>0.05；抗-HBeχ2=0.50,P>0.05；抗-HBcχ2=1.33,P>0.05，5項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩種方法的符合率最低都超過(guò)95%。

表1　　乙肝兩對(duì)半5項(xiàng)采用兩種方法檢測(cè)的陽(yáng)性

2.2CLIA檢測(cè)2 344份標(biāo)本定量檢測(cè)結(jié)果的模式及抗-HBs>100 mU/mL的構(gòu)成見表2。

表2　　2 344份抗-HBs>100 mU/mL檢測(cè)結(jié)果的

注：1代表HBsAg，2代表抗-HBs，3代表HBeAg，4代表抗-HBe，5代表抗-HBc；-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

3討論

本研究結(jié)果顯示，CLIA與ELISA對(duì)乙肝兩對(duì)半5項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目的符合率都達(dá)95%以上，與文獻(xiàn)[1-3]報(bào)道一致。經(jīng)配對(duì)χ2檢驗(yàn)，5項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，由此說(shuō)明兩種方法都能滿足對(duì)乙肝兩對(duì)半5項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)要求。因此在日常工作中，若對(duì)人群進(jìn)行預(yù)防性篩查，選用成本較低廉、操作簡(jiǎn)單、適合大批量測(cè)定的ELISA即可。

定性ELISA靈敏度不如CLIA，易造成漏檢，且只能提供“陰”或“陽(yáng)”的結(jié)果，無(wú)法達(dá)到HBV感染動(dòng)態(tài)觀察和反映感染者體內(nèi)各檢測(cè)項(xiàng)目具體濃度的目的。而CLIA是在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的基礎(chǔ)上與免疫反應(yīng)相結(jié)合建立的新技術(shù)。它不僅具有免疫反應(yīng)的特異性，而且具有化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高靈敏度，能較準(zhǔn)確地提供各HBV標(biāo)志物的濃度變化，間接反映體內(nèi)HBV復(fù)制的活躍程度，是評(píng)價(jià)HBV感染后病情轉(zhuǎn)歸的重要依據(jù)，也是抗病毒治療的療效考核指標(biāo)之一[4]。我國(guó)乙肝感染者數(shù)量龐大，其中存在一定數(shù)量的低濃度感染者和感染早期的帶毒者，可能會(huì)由于試驗(yàn)方法的低靈敏度而漏檢，造成HBV通過(guò)手術(shù)、輸血和母嬰傳播等途徑傳播，因此低濃度HbsAg的出現(xiàn)可作為乙肝的早期診斷。本文對(duì)比的197份標(biāo)本中有2份HBsAg低濃度標(biāo)本，ELISA檢測(cè)為陰性，CLIA為陽(yáng)性，濃度為0.25～0.40 U/mL，CLIA靈敏度較高，可及時(shí)檢測(cè)出低濃度HBsAg，縮短窗口期，及早發(fā)現(xiàn)HBV感染，為判斷病情提供依據(jù)[5-6]。

HBV感染引起的肝炎是我國(guó)最突出的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，兒童青少年的乙肝免疫預(yù)防更是國(guó)家的重點(diǎn)項(xiàng)目之一。隨著國(guó)家乙肝疫苗的免費(fèi)接種推行，絕大多數(shù)新生兒自出生時(shí)就開始接種乙肝疫苗，但由于機(jī)體的免疫差異，盡管接種了乙肝疫苗，也不一定能產(chǎn)生可以抵抗HBV入侵的“中和”抗體?？?HBs的存在提示機(jī)體對(duì)HBV感染有免疫力，其持續(xù)存在意味著HBV的清除和乙肝的恢復(fù)，是唯一指示乙肝疫苗免疫效果的血清學(xué)標(biāo)志物，滴度越高免疫力越強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間也越長(zhǎng)。關(guān)于抗-HBs與保護(hù)力的關(guān)系，世界標(biāo)準(zhǔn)未完全統(tǒng)一。目前普遍認(rèn)為，普通人群抗-HBs≥10 mU/mL有保護(hù)作用，但機(jī)體對(duì)HBV的免疫力較弱，荷蘭、比利時(shí)和瑞士等建議抗-HBs在10～100 mU/mL時(shí)需加強(qiáng)免疫[7]。高危人群，如HBV感染者家屬和醫(yī)務(wù)工作者，抗-HBs>100 mU/mL，才具有足夠的保護(hù)作用[8]。肝移植、血液透析及免疫抑制等患者定期檢測(cè)抗-HBs濃度，每次檢測(cè)值抗-HBs>100 mU/mL為宜[9]。因此通過(guò)測(cè)定抗-HBs的濃度變化，可對(duì)機(jī)體免疫狀況進(jìn)行評(píng)估，為注射乙肝疫苗提供指導(dǎo)。本研究結(jié)果中抗-HBs≥10 mU/mL有1 264例，占53.92%(1 264/2 344)，其中抗-HBs>100 mU/mL有843例，占抗-HBs≥10 mU/mL的 66.59%，由此表明有40%以上的受檢者抗-HBs濃度為10～100 mU/mL，對(duì)HBV病毒抵抗力較弱，需要加強(qiáng)疫苗接種，而且疫苗的效果因人而異?？?HBs濃度可能逐年下降，甚至消失，故有必要定期監(jiān)測(cè)抗-HBs濃度，保證機(jī)體有足夠抵抗HBV感染的能力[10]。

HBV是專一的嗜肝病毒，它是威脅人類健康最為嚴(yán)重的傳染病之一，乙肝感染慢性化與肝硬化、肝癌的果因關(guān)系密切，所以對(duì)于乙肝的防治，需要不斷提高試驗(yàn)的檢測(cè)靈敏度和篩查能力，以免漏檢，同時(shí)應(yīng)對(duì)乙肝疫苗的效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)，故定量測(cè)定乙肝標(biāo)志物濃度，可為臨床提供更準(zhǔn)確的依據(jù)，也讓患者對(duì)病情更清楚了解，從而提高治療的信心，同時(shí)也增加對(duì)醫(yī)生信任感，從而改善醫(yī)患關(guān)系，促進(jìn)疾病治療。

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△通訊作者,E-mail：107306723@qq.com。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.052

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)11-1566-03

(收稿日期：2016-01-12修回日期：2016-03-26)