張　肖，朱同華，沈國榮

(江蘇省蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院　215200)

·臨床研究·

痰標(biāo)本分析前涂片鏡檢的臨床價(jià)值分析

張肖，朱同華，沈國榮

(江蘇省蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院215200)

摘要:目的對634例痰標(biāo)本進(jìn)行分析前涂片革蘭染色鏡檢的結(jié)果與其培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行比較，了解痰培養(yǎng)標(biāo)本分析前涂片鏡檢的臨床價(jià)值。方法收集634例痰標(biāo)本，肉眼觀察痰標(biāo)本分析前的性狀、顏色等，然后進(jìn)行涂片、革蘭染色、鏡檢，根據(jù)涂片鏡檢結(jié)果，將痰標(biāo)本分為A、B、C 三大類。同時(shí)對上述痰培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)鑒定，分析比較鏡檢結(jié)果與細(xì)菌檢出率的關(guān)系。結(jié)果634例痰培養(yǎng)標(biāo)本中，涂片結(jié)果合格標(biāo)本495例，占78.08%；不合格標(biāo)本139例，占21.92%。共檢出457株細(xì)菌。在495例涂片結(jié)果合格的標(biāo)本中，檢出408株細(xì)菌，細(xì)菌檢出率為82.42%，合格痰培養(yǎng)標(biāo)本涂片結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果的符合率為71.72%。在139例涂片結(jié)果不合格的標(biāo)本中，檢出49株細(xì)菌，檢出率為35.25%。肉眼觀察痰培養(yǎng)標(biāo)本分析前的性狀，黏性、血性和膿性痰的合格率和細(xì)菌檢出率明顯高于水樣或泡沫樣痰；在不同顏色痰標(biāo)本中，無色痰的合格率和細(xì)菌檢出率低于其他顏色的痰標(biāo)本。結(jié)論痰培養(yǎng)標(biāo)本分析前做涂片革蘭染色鏡檢可以篩除不合格的痰標(biāo)本，提高痰培養(yǎng)的細(xì)菌檢出率，對檢驗(yàn)結(jié)果的正確與否具有重要價(jià)值。

關(guān)鍵詞:分析前；痰涂片；痰顏色；痰性狀；痰培養(yǎng)

急、慢性下呼吸道感染、社區(qū)獲得性感染及醫(yī)院獲得性感染是臨床各科室住院患者呼吸系統(tǒng)感染的常見病，因此對痰液進(jìn)行培養(yǎng)及藥物敏感度試驗(yàn)具有重要臨床意義。痰標(biāo)本留取質(zhì)量直接關(guān)系到細(xì)菌培養(yǎng)的準(zhǔn)確性，痰培養(yǎng)前做涂片鏡檢評(píng)價(jià)其質(zhì)量，是保證標(biāo)本高質(zhì)量的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，只有符合標(biāo)準(zhǔn)的痰標(biāo)本才能進(jìn)一步培養(yǎng)鑒定。如何把好痰標(biāo)本質(zhì)量關(guān)是培養(yǎng)前的重要問題。在臨床工作中收集的痰標(biāo)本很多是不合格的，結(jié)果會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)不出細(xì)菌或即使培養(yǎng)出細(xì)菌也是口腔或咽部的正常菌群，這會(huì)導(dǎo)致臨床誤診及抗菌藥物濫用。本研究對634例痰標(biāo)本在分析前進(jìn)行涂片、染色鏡檢，根據(jù)上皮細(xì)胞及白細(xì)胞數(shù)量，對痰標(biāo)本的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，加強(qiáng)細(xì)菌培養(yǎng)的質(zhì)量控制，并與分離培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行對比分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源選取2015年1月1日至8月20日來本院住院患者的634例痰培養(yǎng)標(biāo)本。

1.2儀器與試劑血平板、巧克力平板、中國藍(lán)平板和沙保羅平板，快速革蘭染色液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。Siemens MicroScan WalkAway96plus全自動(dòng)微生物鑒定儀及法國生物梅里埃公司API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)，細(xì)菌藥敏紙片為英國Oxoid公司產(chǎn)品。

1.3方法

1.3.1涂片染色鏡檢用無菌棉簽挑取膿性、血性、黏性痰液制成薄而均勻的涂片，自然干燥后革蘭染色鏡檢。低倍鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目，依據(jù)《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》第2版[1]，按照A、B、C三分類的標(biāo)準(zhǔn)對痰標(biāo)本進(jìn)行分類，A、B為合格，適合做培養(yǎng)，C為不合格，不適合做培養(yǎng)。

1.3.2分離培養(yǎng)將痰標(biāo)本中加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。處理后接種于血平板、巧克力平板、中國藍(lán)平板和沙保羅平板，置5%～10%CO2環(huán)境中，35 ℃培養(yǎng)18～24 h，細(xì)菌培養(yǎng)陽性用Siemens MicroScan WalkAway96plus全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行鑒定和藥物敏感試驗(yàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，配對資料比較采用配對χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1痰培養(yǎng)標(biāo)本的合格率見表1、2。收集634例痰培養(yǎng)標(biāo)本，依據(jù)痰標(biāo)本A、B、C三分類標(biāo)準(zhǔn)，合格的痰培養(yǎng)標(biāo)本495例，合格率為78.08%，包括A類260例，占總數(shù)的41.01%，B類235例，占總數(shù)的37.07%，不合格的C類139例，占總數(shù)的21.92%。痰培養(yǎng)標(biāo)本涂片前對其狀和顏色進(jìn)行肉眼觀察，水或泡沫樣痰標(biāo)本的合格率明顯低于其他性狀痰標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。無色的痰標(biāo)本合格率也同樣低于其他顏色的痰標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2痰培養(yǎng)標(biāo)本的細(xì)菌檢出率

2.2.1A、B、C三分類痰標(biāo)本細(xì)菌檢出率見表3。634例痰培養(yǎng)標(biāo)本有457例標(biāo)本檢出有細(xì)菌(排除草綠色鏈球菌、奈瑟菌等口腔正常菌群)，陽性檢出率為72.08%，合格標(biāo)本檢出率為82.42%(408/495)，不合格標(biāo)本檢出率為35.25%(49/139)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表1　　634例不同性狀痰培養(yǎng)標(biāo)本合格率比較

表2　　不同顏色痰標(biāo)本合格率比較

2.2.2不同性狀痰標(biāo)本細(xì)菌檢出結(jié)果見表4。痰標(biāo)本的性狀可分為4種，包括水或泡沫樣、血性、黏液樣、膿性。水或泡沫樣痰標(biāo)本細(xì)菌檢出率顯著低于其他性狀的痰標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3　　A、B、C三分類痰標(biāo)本細(xì)菌檢出率

2.2.3不同顏色痰標(biāo)本細(xì)菌檢出結(jié)果見表5。痰液的顏色可分為無色、白色、淡黃色、黃色、黃綠色、鐵銹色、紅色等，無色痰標(biāo)本細(xì)菌檢出率低于其他顏色的痰標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.4495例合格痰標(biāo)本涂片和培養(yǎng)結(jié)果比較見表6。495例合格痰標(biāo)本涂片結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.5不同痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果在A、B、C分類中的分布見表7。

表4　　不同性狀痰標(biāo)本細(xì)菌檢出結(jié)果[n(%)]

表5　　不同顏色痰標(biāo)本細(xì)菌檢出結(jié)果[n(%)]

表6　　495例合格痰標(biāo)本涂片和培養(yǎng)結(jié)果比較[n(%)]

注：(+)表示陽性，(-)表示陰性。

表7　　不同痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果在A、B、C分類中的

注：(+)表示陽性，(-)表示陰性。

3討論

在微生物實(shí)驗(yàn)室工作中發(fā)現(xiàn)，造成痰標(biāo)本合格與否的原因主要有以下幾個(gè)方面：(1)臨床醫(yī)護(hù)人員對痰標(biāo)本采集不重視，患者留取痰液不規(guī)范，醫(yī)護(hù)人員沒有給予患者指導(dǎo)，收集的標(biāo)本沒能采集新鮮和深咳的痰液；(2)患者采集痰液后沒能及時(shí)送檢或檢驗(yàn)人員沒有立即處理接種標(biāo)本，以及痰液受到口咽處正常細(xì)菌的污染；(3)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員自身的問題，在痰涂片與培養(yǎng)時(shí)沒有挑取膿性、黏性或血性的部分，涂片厚薄程度不當(dāng)?shù)?。因此痰?biāo)本在培養(yǎng)前先做涂片檢查是下呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查的必要環(huán)節(jié)之一。不合格痰培養(yǎng)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果誤導(dǎo)了臨床，拖延了治療時(shí)間，造成醫(yī)療浪費(fèi)。本院2015年1～8月所收集的634例痰標(biāo)本合格率為78.08%，其合格率稍高于楊小琴[2]的報(bào)道。

在痰標(biāo)本處理之前，要對標(biāo)本進(jìn)行肉眼觀察。表1結(jié)果顯示，不同性狀的痰標(biāo)本其合格率差異很大，血性、膿性痰標(biāo)本合格率超過95.0%，而水樣或泡沫樣痰的合格率較低，為29.8%。由此可以看出,在鏡檢前肉眼觀察并篩選痰標(biāo)本過程，要特別注意水樣或泡沫樣的標(biāo)本，應(yīng)根據(jù)鏡檢結(jié)果決定是否重新留置標(biāo)本。表2結(jié)果顯示，不同顏色痰標(biāo)本合格率也是不盡相同，黃綠色痰標(biāo)本合格率最高,為100.0%，而無色痰合格率低，為30.72%。表3結(jié)果顯示，A類和B類標(biāo)本的檢出率相對較高，是由于A類和B類標(biāo)本中膿性標(biāo)本較多，而C類標(biāo)本以水樣或泡沫樣標(biāo)本為主，所以檢出率較低。

表4結(jié)果顯示，水樣或泡沫樣痰細(xì)菌檢出率相對較低，而膿性痰檢出率最高，其次是血性痰。這一結(jié)果表明膿性或血性痰細(xì)菌感染的概率相對較大，提示當(dāng)檢驗(yàn)人員在工作中遇到膿性或血性痰時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察鏡下細(xì)菌形態(tài)和培養(yǎng)結(jié)果，避免漏檢情況發(fā)生。表5結(jié)果顯示，經(jīng)過痰標(biāo)本顏色不同區(qū)分的細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果有明顯差異，這與國外Johnson等[3]報(bào)道的結(jié)果基本一致。淡黃色、黃色、黃綠色和鐵銹色痰細(xì)菌的檢出率相對較高。無色痰其細(xì)菌檢出率很低。所以根據(jù)顏色對痰標(biāo)本進(jìn)行初篩，判斷是否繼續(xù)培養(yǎng)或重新留置標(biāo)本是非常必要的。表6結(jié)果顯示，495例痰標(biāo)本中涂片與培養(yǎng)結(jié)果符合率達(dá)到71.72%，與國內(nèi)學(xué)者陳險(xiǎn)峰等[4]報(bào)道在368例合格痰標(biāo)本中涂片與培養(yǎng)結(jié)果的符合率為71.19%結(jié)果基本一致，由此證實(shí)了痰涂片檢查對細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果具有預(yù)先判斷的輔助價(jià)值。表7結(jié)果顯示，涂片呈陽性培養(yǎng)未見相應(yīng)細(xì)菌的情況，并不能排除感染的可能性，可能是患者長期應(yīng)用抗菌藥物的治療及L型菌、厭氧菌和苛養(yǎng)菌等不常見致病菌感染，痰標(biāo)本中苛養(yǎng)菌不能在普通培養(yǎng)基上生長或是其他生長緩慢的細(xì)菌所致，也有可能是痰標(biāo)本不及時(shí)送檢導(dǎo)致細(xì)菌裂解死亡。一般而言，鏡檢能看到細(xì)菌，且在合適的培養(yǎng)條件下都應(yīng)該能培養(yǎng)出來。但表7中出現(xiàn)涂片未見細(xì)菌而培養(yǎng)檢出細(xì)菌的情況，這種情況的發(fā)生可能是涂片太薄，沒有挑取膿性或黏性痰標(biāo)本，也有可能是不動(dòng)桿菌屬，其形態(tài)易與奈瑟菌混淆，還有可能是檢驗(yàn)人員自身的業(yè)務(wù)能力問題導(dǎo)致誤檢，這些都是造成涂片陰性而培養(yǎng)陽性的重要原因[5]。

總之，痰標(biāo)本涂片染色鏡檢是快速診斷下呼吸道感染性疾病中最簡便且經(jīng)濟(jì)的方法之一，其出結(jié)果速度快，能在早期為患者治療和診斷提供重要依據(jù)。檢驗(yàn)人員肉眼觀察痰標(biāo)本性狀和顏色可對細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果具有預(yù)先判斷的輔助價(jià)值。痰涂片染色可篩選出合格的痰標(biāo)本，提高痰培養(yǎng)細(xì)菌檢出率[6]。痰標(biāo)本留取送檢后，檢驗(yàn)人員根據(jù)涂片染色結(jié)果和細(xì)菌形態(tài)及排列初步判斷細(xì)菌種類，從而有助于協(xié)助臨床在早期診療過程中選擇合適的抗菌藥物，具有指導(dǎo)作用[7]。另外對于檢驗(yàn)人員而言，其痰標(biāo)本涂片鏡檢在鑒定細(xì)菌時(shí)，應(yīng)將涂片與培養(yǎng)結(jié)果結(jié)合，判斷二者是否一致，這樣才有助于提高痰標(biāo)本細(xì)菌檢出的準(zhǔn)確性。

綜上所述，痰標(biāo)本革蘭染色涂片鏡檢是非常重要的。

參考文獻(xiàn)

[1]周庭銀，倪語星．臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作[M]．2版． 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2010：263.

[2]楊小琴．痰涂片檢查與細(xì)菌培養(yǎng)的一致性分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(14)：1476-1477.

[3]Johnson AL，Hampson DF，Hampson NB． Sputumcolor:potential implications for clinical practice[J].Respir Care，2008，53(4):450-454．

[4]陳險(xiǎn)峰，周庭銀．痰標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢的臨床意義[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28(6)：499-502.

[5]Ehara N，F(xiàn)ukushima K，Kakeya H，et al． A novel method for rapid detection of Streptococcus pneumoniae antigen in sputum and its application in adult respiratory tract infections [J]．J Med Microbiol，2008，57(7)：820-826.

[6]楊朵，辛續(xù)麗，馬東媛，等．痰培養(yǎng)標(biāo)本合格性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)的比較[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，27(9)：773-775.

[7]Raghavendran K，Wang J，Belber C，et al.Predictive value of aputum Gram stain for the determination of appropriate antibiotic therapy in ventilator associate pneumonia[J]．Trauma，2007，62(6)：1377-1382.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.048

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)11-1559-03

(收稿日期：2016-01-24修回日期：2016-03-13)