陽成成，吳曉梅

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠肺纖維化的抑制作用

陽成成，吳曉梅

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院(哈爾濱 150086)，E-mail：344643928@qq.com

摘要：目的分析大鼠氣管內(nèi)注入博來霉素(BLMS)后，觀察不同時(shí)間點(diǎn)移入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的分化行為，分析細(xì)胞因子表達(dá)規(guī)律及其與病理變化的相關(guān)性，確定MSC移植治療實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠的最佳時(shí)間窗及標(biāo)準(zhǔn)，旨在為臨床上干細(xì)胞移植治療肺纖維化的時(shí)機(jī)提供可靠參考依據(jù)。方法體外分離和培養(yǎng)雄性Wistar大鼠的MSC。將60只雌性Wistar 大鼠隨機(jī)分為4組：A組為生理鹽水對(duì)照組，氣管內(nèi)注入PBS50 μL；B組為博來霉素模型組，向氣管內(nèi)注入BLMS 5 mg/kg；C組氣管內(nèi)注入BLMS后立即尾靜脈注射移植MSC 1×107/mL，200 μL；D組氣管內(nèi)注入BLMS 14 d后移植MSC 1×107/mL，200 μL。于實(shí)驗(yàn)7 d、14 d、28 d(D組于28 d)分別處死大鼠5只，取肺組織病理切片行HE及Masson染色，觀察肺部炎癥和纖維化情況及羥脯氨酸(HYP)含量測(cè)定；提取肺組織通過聚合酶鏈反應(yīng)( PCR ) 檢測(cè)雄性鼠的性別決定基因(SRY)；提取肺組織免疫組織化學(xué)法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)蛋白表達(dá)。結(jié)果病理切片觀察：B組第7天肺泡炎最明顯，28 d時(shí)肺纖維化最嚴(yán)重，與其他3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05或P<0．01)；C組、D組肺泡炎及肺纖維化程度均較B組顯著減輕(P<0．05)，但仍較A組嚴(yán)重(P<0．05或P<0．01)，其中D組較C組嚴(yán)重(P<0．05)。Y染色體性別決定區(qū)SRY基因的檢測(cè)：A組及B組檢測(cè)不到SRY基因，但C組和D組各時(shí)間點(diǎn)均能檢測(cè)到SRY基因。 HYP含量：B組第7天HYP含量開始升高，28 d達(dá)到最高峰，高于其他3組(P<0．05或P<0.01)，與A組相比各時(shí)間點(diǎn)HYP含量的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；C組與D組大鼠HYP含量均呈低水平升高趨勢(shì)，造模后7 d、14 d、28 d HYP含量均顯著低于B組(P<0.05)。TGF-β1：B組TGF-β1在14 d時(shí)表達(dá)最高，28 d時(shí)逐漸下降，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論氣管內(nèi)注入博來霉素可成功復(fù)制大鼠肺纖維化模型；MSC可減輕肺泡炎、肺纖維化的程度；MSC到達(dá)損傷肺后可能抑制TGF-β1的表達(dá)，從而抑制博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化的形成。

關(guān)鍵詞：特發(fā)性肺纖維化；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；博來霉素；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；抑制作用；大鼠

特發(fā)性肺纖維化(IPF)是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(IIP)中病理表現(xiàn)為普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)的一種類型，是一種進(jìn)展的、慢性纖維性肺間質(zhì)性疾病，主要發(fā)生在老年人和肺功能受限的人群中[1]。IPF的特點(diǎn)是進(jìn)行性呼吸困難和干咳，周邊或基底部網(wǎng)格狀和蜂窩狀為主的影像學(xué)表現(xiàn)和病理組織學(xué)結(jié)果為UIP模式。IPF目前的發(fā)病率為(6～14.6)/10萬，在我國(guó)尚無確切流行病學(xué)資料，但其年發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，男性的發(fā)病率和患病率高于女性(1.5∶1～1.7∶1)，且隨著年齡的增加更加顯著[2]。雖然目前IPF的病因仍然不明確，它的發(fā)病機(jī)制有可能與病毒、真菌、環(huán)境因素和有毒因子等有關(guān)系，病死率高，5年的生存率與惡性腫瘤相似。因此，IPF嚴(yán)重威脅著病人的健康與生命，給病人家庭和社會(huì)帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在IPF治療方法上，尚缺乏有效的治療方法，因此，切實(shí)有效的治療IPF的方法已成為目前研究重點(diǎn)和難點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過博來霉素(BLMS)制造大鼠肺纖維化模型，用體外培養(yǎng)和分離的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)在不同時(shí)間點(diǎn)移植入模型組中，觀察對(duì)肺纖維化的抑制作用。

1材料與方法

1.1材料①動(dòng)物購買，雄性Wistar大鼠60只，體重250 g左右，購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。②主要實(shí)驗(yàn)藥物和試劑，博來霉素(Bleomycin，BLM)系日本化藥株式會(huì)社產(chǎn)品；胎牛血清(美國(guó)Gibco公司)；胰酶(德國(guó)Sigma公司)；DMEM/F12(美國(guó)Gibco公司)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)免疫組化試劑盒(武漢博士德生物有限公司)；羥脯氨酸試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。③主要實(shí)驗(yàn)儀器，電子天平BL610、石蠟切片機(jī)、倒置相差顯微鏡、數(shù)顯電熱恒溫水溫箱HH.W21.600S、KR-180FA高速離心機(jī)、Olympus數(shù)碼相機(jī)、流式細(xì)胞儀、恒溫培養(yǎng)箱、紫外分光光度儀、動(dòng)物手術(shù)器械、紗布、注射器等。

1.2方法①骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)，將4周齡Wistar雄性鼠一只放至動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室操作臺(tái)上，用0.5 mL水合氯醛腹腔注射，用無菌手術(shù)刀將鼠股骨和脛骨的皮毛剝離，在股骨頭處剪斷，放入培養(yǎng)皿中；迅速回到細(xì)胞間，取出股骨后向脛骨頭剔除肌肉到關(guān)節(jié)處反向瓣，取出脛骨，放入另一培養(yǎng)皿中；左手用小鑷子夾住骨干，右手用小剪刀將干骺端剪斷，盡量多的保留干骺端；用5 mL 注射器沖洗骨髓直至骨髓變白；以1 000 r/min離心5 min；用吸管吸約5 mL含10%FBS的DMEM/F12到離心管中；血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)算細(xì)胞總數(shù)；按1×106個(gè)細(xì)胞/cm2接種到T25的塑料培養(yǎng)瓶；將培養(yǎng)瓶放入37.0 ℃、5%CO2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；72 h后去除未貼壁的造血細(xì)胞、全量換液，以后每隔(2～3) d換液1次。10 d～14 d，待貼壁細(xì)胞85%融合后需進(jìn)行消化傳代，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；待大部分細(xì)胞變圓懸浮后，加入10 mL含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液終止消化；用含10%FBS的DMEM/Fl2培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞；按1∶2傳代培養(yǎng)。以后各傳代過程如上，根據(jù)細(xì)胞密度調(diào)整細(xì)胞傳代時(shí)間及比例。

1.3動(dòng)物分組大鼠稱重后腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL /100 g)麻醉，銳性分離淺筋膜，用 1 mL注射器在兩個(gè)環(huán)狀軟骨之間刺入。氣管內(nèi)注入含博來霉素的生理鹽水(0.2～ 0.3) mL(5 mg /kg)，對(duì)照組氣管內(nèi)注入等體積生理鹽水，以大鼠長(zhǎng)軸為中心，立即旋轉(zhuǎn)大鼠，使藥液在肺內(nèi)分布均勻，縫合頸部皮膚，局部青霉素消毒防止感染。將(220～250) g雌性Wistar大鼠60只隨機(jī)分入以下各組，各組15只。生理鹽水對(duì)照組(A組)即刻氣管內(nèi)注入PBS溶液50 μL；BLMS模型組(B組)，即刻氣管內(nèi)注入博萊霉素5 mg/kg；MSC治療組(C組)，即刻氣管內(nèi)注入博萊霉素后立即尾靜脈注射移植MSC 1×107/mL，200 μL；MSC治療組(D組)，氣管內(nèi)注入BLMS14 d后移植MSC 1×107/mL，200 μL。

1.4標(biāo)本采集與處理4組分別于造模后7 d、14 d、28 d各隨機(jī)處死5只。稱取小鼠體重，剖開腹腔，充分暴露腹主動(dòng)脈，經(jīng)腹主動(dòng)脈放血后處死；剪開胸腔，分離肺組織，從右主支氣管氣管插管，然后結(jié)扎近端，注入4%多聚甲醛，完全冷卻后加入固定液使肺復(fù)張，置于同樣固定液中浸泡右肺，石蠟包埋和連續(xù)性切片，切片厚度為4 μm，其中一部分進(jìn)行HE染色和Masson染色做組織診斷學(xué)用，另外一部分進(jìn)行免疫組化染色。

1.5動(dòng)物一般情況觀察Wistar大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)靈敏度、活動(dòng)情況、被毛(被毛是否光滑、有無光澤、有無脫毛)、皮膚(顏色、溫度、彈性等)、食欲、體重、死亡情況。

1.6病理組織學(xué)改變HE染色參照Szapiel等方法，觀察肺泡炎的程度。0級(jí)：無肺泡炎；Ⅰ級(jí)：輕度肺泡炎，鏡下可見到肺泡間隔是由于單核細(xì)胞浸潤(rùn)而增厚，但病變僅僅局限于局部和胸膜底部，所占面積少于全肺20%，肺泡結(jié)構(gòu)正常；Ⅱ級(jí)：中度肺泡炎，肺泡炎癥病變較廣泛，受累面積占全肺的20%～50%，胸膜基底部較重；Ⅲ級(jí)：彌漫性肺泡炎，病變范圍>50%，偶可見到肺泡腔內(nèi)有單核細(xì)胞及出血造成的實(shí)變。

1.7膠原纖維染色的定性分析參照Fulmer方法，用Masson染色將肺纖維化分5級(jí)：0級(jí)：正常肺組織；Ⅰ級(jí)：微小纖維化，肺泡間隔基本正常，局部有間質(zhì)纖維化，無肺泡的破壞及肺網(wǎng)架結(jié)構(gòu)的改變，肺膠原纖維與正常肺相比升高不小于10%；Ⅱ級(jí)：輕度纖維化，肺泡間隔為輕度增厚，部分區(qū)域有正常肺泡，全肺的膠原纖維與正常肺相比占10%～25%；Ⅲ級(jí)：中度纖維化，肺泡間隔中度增厚，正常肺泡少見，間質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞，全肺膠原纖維與正常肺相比升高至25%～40%；Ⅳ級(jí)：嚴(yán)重纖維化，所有的肺泡間隔均有不同程度增厚，但仍有可辨認(rèn)的肺泡結(jié)構(gòu)存在，許多修復(fù)部位失去正常間質(zhì)結(jié)構(gòu)，全肺膠原纖維與正常肺相比升高至40%以上。

1.8大鼠肺組織細(xì)胞來源檢測(cè)取(50～100) mg肺組織按照組織基因組DNA提取試劑盒方法，分別于C組7 d、14 d、28 d及D組28 d肺組織提取DNA，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增SRY基因。以2%瓊脂糖凝膠中電泳，凝膠成像系統(tǒng)攝像，以雌、雄Wistar大鼠為陰、陽性對(duì)照。合成SRY大鼠基因，上游引物：5’- tttagtgttcagccctacagcc-3’，下 游 引 物：5’-atgctgggattctgttgagcc-3’，擴(kuò) 增 長(zhǎng) 度為322bp； 內(nèi)參照：β 肌動(dòng)蛋白(β-actin ) 上游引物：5’-cacgatggaggggccggactcatc-3’，下游引物：5’-taaagacctctatgccaacacagt-3’，擴(kuò)增長(zhǎng)度為240 bp。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，52 ℃退 火30 s ，72 ℃退火3 0s，循環(huán)50次，72℃延伸7 min。

1.9HYP檢測(cè)取各組大鼠右肺中上葉稱重(50 mg)，采用分光光度計(jì)560 nm波長(zhǎng)比色，記錄吸光度值，根據(jù)試劑盒所給公式計(jì)算待測(cè)標(biāo)本的HYP含量，確定肺組織纖維化程度。

1.10免疫組織化學(xué)法測(cè)定TGF-β1蛋白表達(dá)免疫組化檢測(cè)指標(biāo)的半定量分析，自動(dòng)計(jì)算其積分光密度(integrated optical density，IOD)值進(jìn)行半定量分析。

1.11統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件處理，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)方法使用方差分析等。

2結(jié)果

2.1細(xì)胞培養(yǎng)第1天即貼壁，第2天時(shí)貼壁細(xì)胞較多，第3天可以看到骨髓細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)出明顯的MSC克隆，為橢圓形、梭狀，似成纖維細(xì)胞樣。骨髓內(nèi)的造血干細(xì)胞等其他的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中為懸浮方式生長(zhǎng)，經(jīng)多次換液后造血干細(xì)胞及其他的細(xì)胞逐漸減少。約10 d后原代細(xì)胞85%融合，進(jìn)行傳代。傳代后細(xì)胞度過抑制期后迅速增長(zhǎng)，每傳1代需要(3～4)d，隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞形態(tài)呈均勻一致的長(zhǎng)梭形，排列成旋渦狀或放射狀 。

2.2大鼠術(shù)后觀察A組大鼠術(shù)后蘇醒很快，蘇醒后僅有短暫活力下降，恢復(fù)術(shù)前的活力快，進(jìn)食好，體重逐漸增長(zhǎng)；B組大鼠術(shù)后蘇醒較慢，不愛活動(dòng)，進(jìn)食較少，皮毛凌亂、無光澤，唇及爪發(fā)紺，可以聽到大鼠的喘息聲，體重明顯減輕；C組大鼠術(shù)后蘇醒較慢，術(shù)后4 d～5 d內(nèi)活力較差，進(jìn)食較少，體重不增長(zhǎng)，第5天后大鼠一般情況逐漸好轉(zhuǎn)，體重逐漸增長(zhǎng)。D組大鼠術(shù)后蘇醒更慢，于術(shù)后7 d、8 d活力仍差，進(jìn)食少，體重不增長(zhǎng)，第8天后小鼠一般情況才逐漸好轉(zhuǎn)，體重逐漸增長(zhǎng)。

2.3肺組織HE染色、Masson染色A組光鏡下可見肺泡間隔無增厚，無水腫、炎癥及纖維化表現(xiàn)，肺泡腔沒有縮小，且無明顯滲出。B組灌注博來霉素后的7 d內(nèi)表現(xiàn)為急性炎癥，肺泡的間隔增厚，肺泡腔及間隔內(nèi)炎癥細(xì)胞聚集；第14天炎性細(xì)胞滲出明顯減輕，肺泡間隔增厚，而成纖維細(xì)胞增多，肺組織以纖維化改變?yōu)橹?。?8天肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔明顯縮小，肺間質(zhì)被膠原纖維和成纖維細(xì)胞替代，纖維化明顯。C組：于7 d肺組織的充血明顯減輕，點(diǎn)狀出血明顯減少，14 d和28 d雙肺顏色發(fā)暗，表面較粗糙，體積縮小不明顯。各時(shí)間點(diǎn)肺泡炎與肺纖維化評(píng)分與B組比較均顯著減輕(P<0．05)，仍較A組嚴(yán)重(P<0．05)。D組：28 d時(shí)雙肺顏色暗，表面粗糙，體積縮小不明顯。肺泡炎較B組減輕，肺纖維化評(píng)分較B組減少，但均較A組、C組嚴(yán)重。各組肺泡炎及肺纖維化評(píng)分結(jié)果見表1、表2。

表1　各組肺泡炎程度比較(±s)　分

表2　各組纖維化程度比較(±s)　分

2.4Y染色體性別決定區(qū)SRY基因檢測(cè)A組及B組檢測(cè)不到SRY基因，但C組和D組各時(shí)間點(diǎn)均能檢測(cè)到SRY基因。

2.5HYP檢測(cè)肺組織纖維化程度B組注BLM后7 d，HYP含量開始升高，28 d達(dá)到最高峰，高于其他3組，與A組相比各時(shí)間點(diǎn)HYP含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。C組與D組大鼠HYP含量均呈低水平升高趨勢(shì)，造模后7 d、14 d、28 dHYP含量均顯著低于B組(P<0.05)。與形態(tài)學(xué)肺纖維化觀察結(jié)果相一致(見表3)。

表3　大鼠肺組織HYP含量比較(±s)　μg/g

2.6大鼠肺組織中TGF-β1大鼠肺組織TGF-β1蛋白表達(dá)在胞漿呈黃色或棕黃色顆粒，主要定位于肺泡巨噬細(xì)胞胞漿中，以細(xì)胞胞漿、胞膜、細(xì)胞外基質(zhì)染為棕色為陽性；每張切片選取5個(gè)視野，計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)/高倍視野(見表4)。博萊霉素處理大鼠的肺組織TGF-β1表達(dá)明顯、范圍廣，特別是在第14天時(shí)肺泡腔和間質(zhì)中出現(xiàn)大量的TGF-β1強(qiáng)陽性的肺泡巨噬細(xì)胞，肺組織中TGF-β1陽性的肺泡巨噬細(xì)胞，可以單個(gè)或成群肺泡巨噬細(xì)胞出現(xiàn)。

表4　各組TGF-β1表達(dá)陽性巨噬細(xì)胞數(shù)

3討論

在間質(zhì)性肺疾病中，以IPF最為常見，預(yù)后極差，從最初確診到死亡的平均時(shí)間是(3～5)年。盡管過去數(shù)十年在IPF發(fā)病機(jī)制研究取得了很大進(jìn)展，但其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。過去認(rèn)為IPF是一種慢性的炎癥反應(yīng)，因而解釋了最初使用皮質(zhì)類固醇激素治療的原因。目前糖皮質(zhì)激素為治療IPF的經(jīng)典藥物，但是僅有10%～30%的IPF病人對(duì)糖皮質(zhì)激素治療有一定的療效[3]，而且沒有完全或持續(xù)緩解者，因此有學(xué)者不推薦單獨(dú)使用糖皮質(zhì)激素治療IPF病人。且糖皮質(zhì)激素副反應(yīng)大，臨床應(yīng)用受限。近年來，隨著對(duì)本病發(fā)病機(jī)制和病理生理變化的研究以及分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，干細(xì)胞的研究引起了人們的極大關(guān)注，其中研究最多的是MSC。在體外特定的條件下，MSC 可以定向誘導(dǎo)分化為骨、軟骨、脂肪、心肌、神經(jīng)、皮膚上皮、肝臟、胰島B 細(xì)胞等多種類型細(xì)胞[4]，被認(rèn)為是組織工程領(lǐng)域的理想種子細(xì)胞來源。本實(shí)驗(yàn)研究的是MCS對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化的治療機(jī)制。文獻(xiàn)上報(bào)道的構(gòu)建肺纖維化模型的方法有多種，如應(yīng)用博來霉素、百草枯、放射線、高濃度氧等，博萊霉素氣管內(nèi)給藥因存在方法可靠、操作簡(jiǎn)單、制模時(shí)間短等[5]優(yōu)點(diǎn)，且博萊霉素致纖維化動(dòng)物模型與人類IPF的病理學(xué)改變相似，所以用博萊霉素復(fù)制肺纖維化動(dòng)物模型是目前普遍采用的方法[6]。本實(shí)驗(yàn)表明：灌注博來霉素后7 d內(nèi)表現(xiàn)為急性炎癥，肺泡間隔明顯增厚，肺泡腔及間隔內(nèi)炎癥細(xì)胞聚集；于第14天時(shí)炎性細(xì)胞滲出減輕，成纖維細(xì)胞增多，肺組織以纖維化改變?yōu)橹?。于?8天肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔明顯縮小，纖維化明顯。說明大鼠肺纖維化模型造模成功。

骨髓來源干細(xì)胞療法是生物學(xué)發(fā)展最為迅速的領(lǐng)域之一。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是由中胚層發(fā)育的早期細(xì)胞，有著較強(qiáng)的自我增殖能力和多向分化潛能，因此為許多復(fù)雜疾病的治療帶來了曙光。按發(fā)生學(xué)來源可將干細(xì)胞分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。近年來，越來越多的證據(jù)表明成體干細(xì)胞具有較強(qiáng)的多系分化潛能，大量的研究顯示成體干細(xì)胞可以向包括肺組織在內(nèi)的多種非造血細(xì)胞類型分化[7]。作為成體干細(xì)胞的一種，MSC在研究和應(yīng)用方面具有以下優(yōu)點(diǎn)：①可自體移植避免了免疫排斥；②在正常情況下處于靜止?fàn)顟B(tài)，只有在病理情況下才顯示出一定的自我更新潛能，因此癌變的可能性較小；③由于分化潛能比較局限，更容易被誘導(dǎo)向特定的組織細(xì)胞分裂，可以直接用于體內(nèi)組織的原位修復(fù)；④某種類型的成體干細(xì)胞有向同種組織的損傷部位遷移的趨勢(shì)，這有助于臨床應(yīng)用干細(xì)胞來進(jìn)行疾病替代治療時(shí)的定位；⑤分離和使用成體干細(xì)胞不存在倫理學(xué)問題[8]。至今為止，MSC的分離、培養(yǎng)方法比較常用的是貼壁細(xì)胞分離法、密度梯度離心法、流式細(xì)胞分選法、免疫磁珠分離法等。本實(shí)驗(yàn)所采取的是全骨髓貼壁細(xì)胞分離法，這個(gè)方法操作比較簡(jiǎn)單、快速、容易掌握、不易污染，比較符合細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，可經(jīng)過多次傳代以獲得足夠量細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)。收集第4代MSC細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過3次傳代后可以獲得足夠的細(xì)胞數(shù)量；另外第4代細(xì)胞很好地保持了其分化特性，符合實(shí)驗(yàn)要求。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1最初是從血小板中分離出來的一種細(xì)胞因子，因其能促進(jìn)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)而得名。它是由多種細(xì)胞分泌的具有多重生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子。TGF-β1是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積促進(jìn)劑，其作用于多個(gè)環(huán)節(jié)，刺激各種細(xì)胞外基質(zhì)成分合成和沉積，在減少基質(zhì)降解酶及增加降解抑制劑合成的同時(shí)，還是一個(gè)強(qiáng)大的細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)劑，促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞增殖，在肺纖維化發(fā)展中起關(guān)鍵作用，是目前研究最多的纖維化促發(fā)因子[9]。早期通過趨化炎癥細(xì)胞參與肺損傷和炎癥反應(yīng)，而后主要是促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)形成和抑制其酶解作用，促進(jìn)纖維蛋白原向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)影響其他纖維化細(xì)胞因子，導(dǎo)致纖維化發(fā)生[10]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，博來霉素灌注后第7天可見肺泡腔和間質(zhì)中出現(xiàn)較多的TGF-β1強(qiáng)陽性的肺泡巨噬細(xì)胞，第14天時(shí)肺泡腔和間質(zhì)TGF-β1陽性的肺泡巨噬細(xì)胞達(dá)到高峰，于第28天肺組織中TGF-β1陽性的肺泡巨噬細(xì)胞比第7天及第14天減少。與B組比較，C組、D兩組肺組織中TGF-β1陽性的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

外源性MSC的確能移植到損傷肺組織中，并具有減輕肺泡炎、肺纖維化的作用。MSC在體外培養(yǎng)即能分泌TGF-β1，且該細(xì)胞因子有抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用，而當(dāng)MSC進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后，由于微環(huán)境的改變，TGF-β1的表達(dá)可能會(huì)有改變，因此其在這個(gè)修復(fù)過程中的作用需進(jìn)一步研究。

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(本文編輯王雅潔)

中圖分類號(hào)：R551.3R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.10.011

文章編號(hào)：1672-1349(2016)10-1091-04

(收稿日期：2016-03-03)