何彥春，錢振波，李旭蓉，李 珊（張掖市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖 734000）

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甘肅省張掖市豬群中甲型H1N1流感的血清學(xué)調(diào)查

何彥春，錢振波，李旭蓉，李 珊
（張掖市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖 734000）

摘 要：為掌握張掖市豬群中的甲型H1N1流感感染情況，采用血凝和血凝抑制試驗(yàn)，對張掖市5個(gè)縣（區(qū)）的20個(gè)豬場進(jìn)行了甲型H1N1流感抗體檢測。共檢測500份血清樣品，檢出甲型H1N1流感抗體陽性205份，平均陽性率為41%。其中，陽性率最高的是臨澤縣，為48%；最低的是民樂縣，為31%。檢出的陽性血清最高效價(jià)為1:512，最低為1:8，平均為1:64。檢測結(jié)果表明，張掖市豬群中的甲型H1N1流感隱性感染情況比較普遍，應(yīng)引起相關(guān)部門及養(yǎng)殖業(yè)主的高度重視。

關(guān)鍵詞：豬；甲型H1N1流感；血清學(xué)；調(diào)查

甲型H1N1流感是最常見的豬傳染病之一。雖然其傳染性很高，但通常不會引發(fā)豬的死亡。其典型臨床特點(diǎn)為突發(fā)、流鼻涕、咳嗽、呼吸困難、發(fā)熱及迅速轉(zhuǎn)歸。目前，甲型H1N1流感病毒與其他病原體混合感染或繼發(fā)感染已成為制約豬場經(jīng)濟(jì)效益的主要原因之一。

為掌握張掖市規(guī)模豬場甲型H1N1流感的感染情況和流行態(tài)勢， 張掖市動物疫病預(yù)防控制中心于2015年11月對甘州區(qū)、臨澤縣、高臺縣、山丹縣、民樂縣5個(gè)縣（區(qū)）規(guī)?；B(yǎng)豬場的臨床健康豬群進(jìn)行了甲型H1N1流感的血清學(xué)抽樣檢測。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1被檢血清。2015年11月，在甘州區(qū)、臨澤縣、高臺縣、山丹縣、民樂縣各選擇4個(gè)規(guī)模豬場，每個(gè)豬場采集臨床檢查健康的，未經(jīng)H1N1流感免疫的血樣25份，共500份；無菌分離血清，編號備檢。

1.1.2檢測器材。96孔V型微量反應(yīng)板、100μL微量移液器、振蕩器、離心機(jī)、吸頭等。

1.1.31%雞紅細(xì)胞懸液制備。采集3只健康公雞的血液與等體積阿氏液混合，用PH 7.2的0.01 mol/L PBS液洗滌3次，每次均以1 000 r/min離心10 min，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)為1%的紅細(xì)胞懸液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4檢測試劑。甲型H1N1流感病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽性血清，由哈爾濱動物生物制品國家工程研究中心有限公司生產(chǎn)，批號為20150126。

1.2檢測方法

1.2.1血凝（HA）試驗(yàn)。按下列順序操作：在微量反應(yīng)板的1～12孔均加入0.025 mL PBS，換吸頭；吸取0.025 mL抗原加入第1孔，混勻，換吸頭；從第1孔吸取0.025 mL抗原液加入第2孔，混勻后吸取0.025 mL加入第3孔，換吸頭；如此對倍稀釋至第11孔，從第11孔吸取0.025 mL棄之，換吸頭；每孔再加入0.025 mL PBS；每孔均加入0.025 mL體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液；振蕩混勻，在室溫（20～25 ℃)下靜置15～30 min后，當(dāng)對照孔紅細(xì)胞呈明顯的鈕扣狀并沉于孔底時(shí)判定結(jié)果。將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位。

1.2.2血凝抑制（HI）試驗(yàn)。按下列順序操作：根據(jù)HA試驗(yàn)結(jié)果配制四個(gè)血凝單位的的抗原；在微量反應(yīng)板的1～11孔加入0.025 mL PBS，第12孔加入0.05 mL PBS；吸取0.025 mL血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸0.025 mL于第2孔；依次對倍稀釋至第10孔，從第10孔吸取0.025 mL棄去；在1～11孔均加入含4個(gè)血凝單位的抗原0.025 mL，室溫（20～25 ℃）靜置30 min；每孔加入0.025 mL體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，室溫（20～25℃）靜置20～40 min，當(dāng)對照孔紅細(xì)胞呈顯鈕扣狀并沉于孔底時(shí)判定結(jié)果。以完全抑制4個(gè)血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)判為該血清的HI抗體效價(jià)，HI效價(jià)大于或等于1:8判定為抗體陽性。

2　結(jié)果與分析

共對5縣（區(qū)）20個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場采送的500份血清進(jìn)行了甲型H1N1流感抗體檢測，檢出陽性樣品205份，陽性率為41%。檢出的陽性血清最高效價(jià)為1:512，最低為1:8，平均為1:64。各縣（區(qū)）抗體檢測結(jié)果見表1。

表1　5縣（區(qū)）甲型H1N1流感抗體結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

3　小結(jié)與討論

2005年，宋建國[1]用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對甘肅省14 個(gè)市（州）的42 個(gè)豬場進(jìn)行了流感血清抗體檢測。共檢測394份豬血清，在11個(gè)市（州）的豬群中檢出H1N1抗體，平均陽性率為35.8%，陽性率最高為64.8%，最低為3.03%。其中健康豬的陽性率為26.87%，混合感染其他病的豬陽性率為54.95%。 2014年，劉青青[2]對甘肅省14市州36個(gè)規(guī)模和個(gè)體養(yǎng)豬場采送的2 203份血清進(jìn)行了H1N1流感感染抗體檢測，在13個(gè)市（州）檢出陽性665份，平均陽性率為30.9%，最高為59.21%，最低為6.43%。其中健康豬的陽性率為23.06%，混合感染其它病的豬陽性率為44.1%。從本次檢測結(jié)果看，張掖市5縣（區(qū)）送檢的臨床健康豬血清樣品均檢出陽性，陽性率從31%至48%不等，平均陽性率為41%，比以上兩次報(bào)道的檢測結(jié)果明顯升高。這表明甲型H1N1流感在張掖市部分規(guī)模豬場的感染率相當(dāng)較高，且大部分處于隱性感染狀態(tài)，應(yīng)引起廣大養(yǎng)殖戶的足夠重視。

為防控甲型H1N1流感，規(guī)?；B(yǎng)豬場要大力推廣標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)管理技術(shù)，采取全進(jìn)全出、自繁自養(yǎng)、程序化免疫、定期消毒、病死豬無害化處理等防疫措施，提高豬群抗病能力，防止豬感染甲型H1N1流感，避免隱形感染轉(zhuǎn)為顯性感染。養(yǎng)豬場工作人員應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)，注意個(gè)人衛(wèi)生，防止人畜共患。

參考文獻(xiàn)：

[1] 宋建國，康文彪，趙春玲，等.甘肅省豬流感抗體的血清學(xué)調(diào)查[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（9）：113-114.

[2] 劉青青. 甘肅豬流感血清學(xué)統(tǒng)計(jì)分析研究[J].國外畜牧學(xué)：豬與禽，2014，34（10）：56-57.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Serological Survey of Infl uenza A H1N1 in Swine Herds in Zhangye City of Gansu Province

He Yanchun，Qian Zhenbo，Li Xurong，Li Shan
（Zhangye Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangye，Gansu 734000）

Abstract：In order to grasp the infection situation of infl uenza A H1N1 in swine herds in Zhangye City，hemagglutination tests and hemagglutination inhibition tests were used to detect the infection antibodies of infl uenza A H1N1 in twenty pig farms from fi ve counties/districts of Zhangye City. 500 swine serum samples were tested，and 205 samples were positive with the average positive rate of 41%. The highest positive rate was 48% in Linze County，and the lowest positive rate was 31% in Minle County. The highest titer of the positive sera was 1:512，the lowest titer was 1:8，and the average titer was 1:64. The results showed that the invisible infection of infl uenza A H1N1 in swine herds was common in Zhangye City，and more attention should be paid by the relevant departments and farmers .

Key words：swine；infl uenza A H1N1；serological；survey

中圖分類號：S851.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1005-944X（2016）05-0017-02

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.006