樂桂花福建省三明市第二醫(yī)院病理科，福建三明　366000

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P16與Ki67的表達(dá)在子宮頸病變?cè)\斷中的應(yīng)用

樂桂花
福建省三明市第二醫(yī)院病理科，福建三明366000

［摘要］目的探究P16與Ki67的表達(dá)在子宮頸病變?cè)\斷中的應(yīng)用。方法 采用回顧性分析的方法，選取2014年8月—2015年12月期間在該院婦科進(jìn)行治療的90例子宮頸病變患者作為該研究的對(duì)象，其中30例為低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）（包括CINI，扁平濕疣，尖銳濕疣），30例為高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）（CINII10例，CINIII20例）、30例子宮頸良性反應(yīng)性病變（包括不成熟鱗化，上皮萎縮，修復(fù)性上皮增生）患者，采用免疫組化SP法對(duì)這90例患者的P16以及Ki67表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果經(jīng)過HE染色分析，可以發(fā)現(xiàn)Ki67表達(dá)陽性細(xì)胞在宮頸鱗狀上皮中的位置分布與子宮頸上皮內(nèi)瘤變有著一定的相關(guān)性，LSIL多分布于下1/3的位置，CINII多分布于下1/3～2/3的位置，而CINIII多分布于＞2/3位置，子宮頸良性反應(yīng)性病變分布于下1/3的基底和副基底層；P16的表達(dá)水平在LSIL、HSIL、子宮頸良性反應(yīng)性病變中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021＜0.05）。且P16的表達(dá)水平與子宮頸上皮內(nèi)瘤變的級(jí)別呈現(xiàn)出正相關(guān)的關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.013＜0.05）。結(jié)論P(yáng)16與Ki67的表達(dá)可水平可用于子宮頸良性反應(yīng)性病變的甄別，還與子宮頸上皮內(nèi)瘤變的進(jìn)展聯(lián)系密切，對(duì)P16以及Ki67表達(dá)水平的聯(lián)合檢測(cè)能夠幫助子宮頸病變?cè)\斷，可以在臨床醫(yī)學(xué)中得以廣泛的推廣應(yīng)用。

［關(guān)鍵詞］P16；Ki67；子宮頸病變；診斷；應(yīng)用

作為臨床醫(yī)學(xué)中一種常見的婦科惡性腫瘤疾病，子宮頸癌嚴(yán)重威脅著人們的生命健康，且近年來呈現(xiàn)出逐年增多的趨勢(shì)，并向年輕化發(fā)展。目前，臨床醫(yī)學(xué)中對(duì)子宮頸癌的治療效果并不理想，因此，對(duì)育齡期婦女開展子宮頸病變組織活檢以及常規(guī)的病理學(xué)檢查顯得極為重要，能夠促進(jìn)早發(fā)現(xiàn)、早識(shí)別，輔助確診、預(yù)后判斷以及個(gè)體化的治療。Ki67及P16能夠提高子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的鑒別診斷，在臨床醫(yī)學(xué)中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。為了探究P16與Ki67的表達(dá)在子宮頸病變?cè)\斷中的應(yīng)用，選取2014年8月—2015年12月期間該院90例子宮頸病變患者進(jìn)行研究分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

此次研究選取該院收治的90例子宮頸病變患者，年齡在27～64歲之間，平均年齡為（41.4±3.2）歲，病程為3個(gè)月～4年，平均病程為（2.5±1.2）年，患者經(jīng)過標(biāo)本檢測(cè)分析，對(duì)其進(jìn)行編號(hào)，按照患者的病情類型對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的分組，其中子宮頸良性反應(yīng)性病變患者為30例，低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變?yōu)?0例，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變30例（10例為CINII級(jí)，20例為CINIII級(jí)），患者的標(biāo)本均采用10%的甲醛溶液進(jìn)行處理，并用石蠟進(jìn)行包埋。所有患者均符合子宮頸病變的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有患者來自該院門診和住院部，使用患者的各種資料時(shí)，均經(jīng)過患者的知情同意以及倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。其在年齡、病程、文化程度等方面的指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可進(jìn)行比較分析。

1.2 方法

首先，對(duì)這90例患者的標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片，厚度以3～4 um為宜，每一個(gè)標(biāo)本制作3張，分別進(jìn)行P16標(biāo)記、Ki67標(biāo)記以及HE染色對(duì)照。然后采用pH6.1的枸櫞酸鹽緩沖液修復(fù)患者的抗原，然后采用微波加熱。采用SP法對(duì)患者的切片樣本進(jìn)行診斷分析，并用DAB實(shí)施染色。已經(jīng)檢測(cè)的陽性片可作為對(duì)照。在進(jìn)行P16 與Ki67診斷時(shí)，要嚴(yán)格按照相關(guān)的規(guī)定，保障檢測(cè)結(jié)果的正確性。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

P16的陽性表達(dá)主要集中在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)部位，且呈現(xiàn)出棕黃色的顆粒形態(tài)。P16陽性為上皮彌漫連續(xù)性表達(dá)（鱗狀上皮基底和副基底細(xì)胞連續(xù)性表達(dá)，表層細(xì)胞有或沒有表達(dá)；整個(gè)腺體表達(dá)這兩種情況），沒有表達(dá)、鱗狀上皮或腺體局灶性表達(dá)為陰性。Ki67則主要位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)棕黃色顆粒形態(tài)表示為陽性，采用的計(jì)數(shù)方式，陽性細(xì)胞＜10%而且分布在基底層和副基底層為-，陽性細(xì)胞數(shù)在11%～30%之間為+，31%～50%則為++，高于50%則為+++。Ki67的陽性表達(dá)，+表示低表達(dá)，++/+++則表示高表達(dá)［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

該次研究用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所用的計(jì)數(shù)資料用（n，%）來表示，進(jìn)行X2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 P16在不同子宮頸病變患者中的表達(dá)

經(jīng)過檢測(cè)分析，30例子宮頸良性反應(yīng)性病變患者的P16表達(dá)全部呈現(xiàn)為陰性，且在不同的子宮頸上皮內(nèi)瘤變等級(jí)中的陽性表達(dá)分別為40%、90%、100%，不同級(jí)別差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且P16的表達(dá)情況與上皮內(nèi)瘤變級(jí)別呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系。見表1。

表1 P16在不同子宮頸病變患者中的表達(dá)［n（%）］

2.2 Ki67在不同子宮頸病變患者中的表達(dá)及位置分布

Ki67在LSIL中呈現(xiàn)陰性的有2例，呈現(xiàn)+陽性的為14例，++為6例，+++為8例，總陽性率為28例，占93.3%；CINII10例均呈現(xiàn)陽性，陽性率為100%，且+為5例，++為3例，+++為2例；CINIII20例均呈現(xiàn)陽性，陽性率為100%，其中+為12例，++為4例，+++為4例.不同子宮頸上皮內(nèi)瘤變級(jí)別中陽性表達(dá)差異比較明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Ki67表達(dá)陽性細(xì)胞在LSIL中有23例位于下1/3，5例位于下1/3～2/3，2例位于＞2/3位置；在CINII中有1例位于下1/3，8例位于下1/3～2/3，1例位于＞2/3位置；在CINIII中3例位于下1/3～2/3，17例位于＞2/3位置，而30例子宮頸良性反應(yīng)性病變患者中有28例表達(dá)在下1/3的基底和副基底層，其位置分布與子宮頸上皮內(nèi)瘤變有著一定的相關(guān)性。見表2、表3。

表2 Ki67在不同子宮頸病變患者中的表達(dá)［n（%）］

表3 Ki67在不同子宮頸病變患者中的位置分布［n（%）］

3 討論

隨著我國社會(huì)主義現(xiàn)代化建設(shè)的不斷發(fā)展，我國的醫(yī)療衛(wèi)生水平得到了極大的提升。宮頸癌作為一種嚴(yán)重的婦女癌疾病，威脅著患者的生命安全，且經(jīng)過異型增長(zhǎng)，可發(fā)展成為原位癌，使患者的病情出現(xiàn)惡化。宮頸癌疾病受多種基因表達(dá)的影響，目前臨床醫(yī)學(xué)中對(duì)子宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)行深入研究，并取得了一定的研究成果，P16、Ki67的表達(dá)與子宮頸上皮內(nèi)瘤變有著密切的相關(guān)性。P16能夠直接參與人體的細(xì)胞調(diào)控，有效控制細(xì)胞的分裂、增殖，可以將其作為一種抗癌基因，它位于染色體部位，能夠?qū)Π┘?xì)胞進(jìn)行抑制，降低癌細(xì)胞的擴(kuò)散；而Ki67則能夠?qū)?xì)胞的增值程度進(jìn)行有效反映，在臨床醫(yī)學(xué)中，用于檢驗(yàn)各種惡性腫瘤，有一定的應(yīng)用價(jià)值。

該研究，對(duì)P16、Ki67表達(dá)進(jìn)行了深入分析，發(fā)現(xiàn)Ki67表達(dá)與子宮頸良性反應(yīng)性病變、LSIL、HSIL有著明顯的差異（P＜0.05）。子宮頸良性反應(yīng)性病變的陽性率為6.7%，LSIL的陽性率達(dá)到93.3%，CINII與CINIII陽性率達(dá)到了100%；且Ki67在其病變的位置分布不同：子宮頸良性反應(yīng)性病變主要在上皮基底層和副基底層、LSIL主要在下1/3、CINII主要在下1/3～2/3、CINIII子主要在＞2/3。P16基因在子宮頸良性反應(yīng)性病變中呈陰性表達(dá)，而且P16基因表達(dá)與不同級(jí)別子宮頸上皮內(nèi)瘤變之間也有著明顯差異，級(jí)別越高，P16的表達(dá)就越強(qiáng)，呈現(xiàn)出正相關(guān)的關(guān)系。以往醫(yī)學(xué)研究的結(jié)論在以往的文獻(xiàn)報(bào)道中，P16在人類其他組織惡性疾病中呈現(xiàn)低表達(dá)的現(xiàn)象，僅為55.3%，有學(xué)者認(rèn)為，P16會(huì)隨著CIN級(jí)別的升高而出現(xiàn)表達(dá)增加的現(xiàn)象，系高危型HPV感染引起了宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)P16抑癌基因表達(dá)負(fù)反饋調(diào)節(jié)失控所致，提示細(xì)胞周期出現(xiàn)嚴(yán)重紊亂，癌前病變的幾率在增加。因此，對(duì)P16與CIN準(zhǔn)確分型關(guān)系的檢測(cè)對(duì)宮頸癌的早期預(yù)警與防治有著重要的臨床意義。該研究中還充分采用了免疫組化技術(shù)分析了不同類型CIN宮頸活檢組織中的P16以及Ki67的表達(dá)情況，這為宮頸癌前病變的早期預(yù)警提供了比較可靠的輔助診斷依據(jù)。另外，該研究中通過涂3%冰醋酸方法也能夠提升對(duì)患者宮頸病變?nèi)〔牡臏?zhǔn)確性，進(jìn)而保證診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性與有效性，確保對(duì)患者采取合適的方法進(jìn)行治療。

綜上所述，P16與Ki67的表達(dá)水平可用于子宮頸良性反應(yīng)性病變的甄別，還與子宮頸上皮內(nèi)瘤變的級(jí)別有著密切的聯(lián)系，可以作為臨床醫(yī)學(xué)中可靠的診斷依據(jù)，有利于對(duì)子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者早發(fā)現(xiàn)、早治療，值得參考借鑒。

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Application of the Expression of P16 and Ki67 in Diagnosis of Cervical Lesions

LE Gui-hua
Department of Pathology，the Second Hospital of sanming city，sanming Fujian Province，366000 China

［Abstract］Objective To discuss the application of the expression of P16 and Ki67 in diagnosis of cervical lesions. Methods90 cases of patients with cervical lesions treated in the department of gynaecology of our hospital from August 2014 to December 2015 were selected as the research object by the retrospective analysis method，among them，30 cases were lowgrade squamous intraepithelial lesion（including CINI，condyloma，condyloma acuminatum），30 cases were high-grade squamous intraepithelial lesion（10 cases were CINII，20 cases were CINIII），30 cases were benign reactive lesions of cervix（including immature squamous metaplasia，epithelial atrophy，reparative epithelial hyperplasia），the expression of P16 and Ki67 of the 90 cases of patients was detected and analyzed by SP immunohistochemical technique. Results The HE staining analysis discovered that the location distribution of Ki67 expression positive cells in the cervical squamous epithelium had a certain correlation with the cervical intraepithelial neoplasia，LSIL was more distributed in the location of lower 1/3，CINII was more distributed in the location of lower1/3～2/3，but CINIII was more distributed in the location＞2/3，the benign reactive lesions of cervix was distributed in the base of lower 1/3 and parabasal layer，the difference of the expression of P16 in the LSIL，HSIL and benign reactive lesions of cervix reached 0.021 with statistical significance，and the expression level of P16 had a positive correlation with cervical intraepithelial neoplasia levels and the difference value was 0.013 with statistical significance. Conclusion The expression levels of P16 and Ki67 can be used to discriminate the benign reactive lesions of cervix and have a close correlation with the evaluation of the cervical intraepithelial neoplasia，the combined detection of the expression levels of P16 and Ki67 contributes to the diagnosis of cervical lesions，which can be widely promoted and applied in the clinical medicine.

［Key words］P16；Ki67；Cervical lesion；Diagnosis；Application

［中圖分類號(hào)］R737.33

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1674-0742（2016）04（a）-0046-04

［作者簡(jiǎn)介］樂桂花（1976.6-），女，福建沙縣人，本科，主治醫(yī)師，主要從事病理診斷工作。

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.10.046

收稿日期：（2016-01-03）