董博宇，杜守穎，李鵬躍，陸　洋，趙夢迪，楊　柳，譚　寧

北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100102

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*通信作者

痰熱清與喜炎平注射液霧化吸入給藥對大鼠呼吸系統(tǒng)粘膜刺激性研究

董博宇，杜守穎，李鵬躍，陸洋*，趙夢迪，楊柳，譚寧

北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100102

[摘要]目的以大鼠為模型，研究霧化吸入痰熱清與喜炎平注射液后，動物的行為及呼吸道各組織形態(tài)學結構的變化。方法SD雄性大鼠20只，隨機平均分成5組(生理鹽水組，痰熱清高、低濃度組，喜炎平高、低濃度組)，各組連續(xù)給藥7 d，每次給藥后觀察大鼠的行為活動變化。于第8天取口腔黏膜、鼻中隔粘膜、氣管、左肺，制備石蠟切片，HE染色，觀察形態(tài)學結構變化。結果兩個高濃度組大鼠的鼻腔、眼部出血次數(shù)多于生理鹽水組和對應的低濃度組(P<0.05)，且兩個低濃度組大鼠的鼻腔出血次數(shù)多于生理鹽水組(P<0.05)。給藥組大鼠肺部有輕微水腫，顏色加深。切片觀察可見給藥組較對照組病變明顯，且高濃度組比低濃度組更嚴重。結論兩種中藥注射液霧化吸入給藥后，在大鼠整體行為活動和病理切片方面均顯示出顯著的刺激性。

[關鍵詞]中藥注射液；粘膜刺激性；霧化吸入；HE染色切片

0引言

霧化吸入給藥是指藥物以特殊裝置給藥，經(jīng)呼吸道腔道、粘膜等發(fā)揮全身或局部作用的一種給藥方式。藥物吸入后，經(jīng)過口腔、鼻腔、氣管及支氣管到達肺部，藥物霧化后，粒徑0.5～5 μm的藥物粒子能有效吸入并沉積在肺部[1]。同時，藥液也會在呼吸道的各個部位沉積，從而達到治療效果。痰熱清注射液主要由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花、連翹提取精制而成，有清熱化痰、解毒的功效[2]，用于風溫肺熱病痰熱阻肺證、急性支氣管炎等病證，是復方中藥注射液的代表品種。喜炎平注射液為穿心蓮內(nèi)酯磺化物[3]，有清熱解毒、止咳止痢的功效，用于支氣管炎、扁桃體炎及細菌性痢疾等疾病，是單成分中藥注射液的代表。近年來，應用這兩種中藥注射液霧化吸入給藥治療呼吸道感染在臨床屢見不鮮，尤其在一些基層醫(yī)院或診所。有報道，痰熱清和喜炎平注射液通過霧化吸入給藥治療小兒皰疹性咽峽炎、小兒支氣管炎及肺炎等疾病與普通治療方法相比均取得較好的臨床療效[4-9]。但是注射液霧化吸入是不符合用藥規(guī)范的行為，而且此給藥方式并沒有得到系統(tǒng)的安全性評價。故筆者在臨床用藥的基礎上，以大鼠為模型，對兩組中藥注射液霧化吸入給藥的呼吸道刺激性進行初步研究。根據(jù)本實驗室前期對粘膜刺激性的研究[10-11]，本文主要通過病理切片來研究中藥注射液霧化吸入給藥時呼吸道粘膜的刺激性。

1材料

1.1動物SPF級SD雄性大鼠，體重250～300 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號：SDXK(京)2012-0001。

1.2儀器與試藥LEICA300型脫水機(德國)，LEICA EG1150H型包埋機(德國)，LEICA HI1210型展片機(德國)，LEICA RM2255型切片機(德國)，LEICA HI1220型烤片機(德國)，OLYMPUS CX21型顯微鏡(日本)，易創(chuàng)顯微圖像處理軟件-MIE V2.0(山東易創(chuàng)電子有限公司)，403M型壓縮空氣式霧化器(上海魚躍醫(yī)療設備有限公司)，手術剪、眼科鑷等。

痰熱清注射液(上海凱寶藥業(yè)股份有限公司，國藥準字Z20030054，批號：1411317)，喜炎平注射液(江西青峰藥業(yè)有限公司，國藥準字Z20026249，批號：2014111403)，0.9%氯化鈉水溶液(生理鹽水)(北京化工廠，批號：20130606)，10%中性福爾馬林固定液(北京博奧拓科技有限公司)；HE染料(北京斯百匯生物科技有限責任公司)，石蠟(上海鼎杰生物科技有限公司)；其余試劑均為分析純。

2方法

2.1動物分組及給藥SD大鼠共20只，隨機分為5組，每組4只，分別為生理鹽水組、痰熱清低濃度組(痰熱清注射液∶生理鹽水為1∶10)、痰熱清高濃度組(痰熱清注射液∶生理鹽水為1∶1)、喜炎平低濃度組(喜炎平注射液∶生理鹽水為1∶10)、喜炎平高濃度組(喜炎平注射液∶生理鹽水為1∶1)。每12 h給藥1次，每次霧化給藥20 min，連續(xù)給藥7 d。

2.2觀察動物行為變化每次霧化結束后，觀察大鼠鼻腔、眼部是否出血和水腫，以及動物給藥過程中的依順性。其次，觀察大鼠精神狀態(tài)，口鼻有無異常分泌物，以及是否出現(xiàn)嘔吐、窒息等局部刺激反應。

2.3大鼠呼吸道情況與切片的制備給藥后第8天，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動脈放血處死大鼠。解剖各組大鼠，觀察其口腔黏膜、鼻中隔粘膜、氣管及肺部有無充血、出血、感染及明顯泡沫樣炎性滲出液等，并觀察肺臟的形狀、色澤、位置及有無積水等。取下口腔黏膜、鼻中隔、氣管和左肺，置于10%中性福爾馬林固定液中保存。進行石蠟切片的制備，并HE染色。觀察各組器官形態(tài)學結構的變化。

3結果

3.1大鼠行為學觀察結果各組大鼠給藥初期順應性均較差，有抵抗情緒，且給藥后精神興奮；給藥中后期各組大鼠抵抗減弱，順應性良好。痰熱清高濃度組在給藥后期鼻腔出現(xiàn)粉色泡沫狀分泌物，其余各組未見異常。各組均無嘔吐、窒息等情況出現(xiàn)。各組大鼠鼻腔與眼部出血次數(shù)見表1。

表1　各組大鼠鼻腔與眼部出血次數(shù)比較

注：*與生理鹽水組比較，P<0.05；#與相應低濃度組比較，P<0.05

由表1可見，各給藥組的鼻腔出血次數(shù)多于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且高濃度給藥組的鼻腔出血次數(shù)多于低濃度組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩個低濃度組的眼部出血次數(shù)與生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；兩個高濃度組的眼部出血次數(shù)多于生理鹽水組與相應的低濃度組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3.2大鼠呼吸道情況觀察結果解剖觀察結果顯示，生理鹽水組的氣管、鼻粘膜無充血、出血及感染，未見明顯泡沫樣炎性滲出液；口腔黏膜光滑，無顆粒、斑塊和潰瘍，色澤淡紅并富有彈性；肺部形狀、體積及顏色正常，無積水或水腫，無出血、瘀血等現(xiàn)象。其余各組有不同程度的損傷。見表2。

3.3大鼠病理切片觀察結果

3.3.1肺部切片結果見圖1。圖1顯示，生理鹽水組肺泡壁薄而完整，無出血現(xiàn)象，肺泡大小適中、均勻，且肺泡及其支氣管中很干凈，無分泌物存在。兩個低濃度組的肺泡壁明顯增厚，且肺泡大小不均一，某些部位肺泡結構不明顯，其中痰熱清低濃度組的支氣管中有少量分泌物。痰熱清高濃度組肺泡壁增厚更加明顯，大片區(qū)域無肺泡結構，支氣管中有大量分泌物，炎癥明顯；喜炎平高濃度組出血較為嚴重，肺泡中有大量紅細胞及分泌物。高濃度的損傷程度明顯高于低濃度組。

3.3.2氣管切片結果見圖2。

表2　各組大鼠解剖觀察結果

圖1　肺泡切片圖

圖2　氣管切片圖

圖2顯示，生理鹽水組氣管結構清晰，上皮細胞排列整齊，柱狀纖毛整齊而完整，分泌細胞大小適中，內(nèi)有少量分泌物。給藥組氣管纖毛和上皮細胞部分脫落，高濃度組比低濃度組損傷嚴重。痰熱清低濃度組有輕微出血現(xiàn)象，分泌細胞中分泌物較多；痰熱清高濃度組除分泌細胞中有較多分泌物外，氣管內(nèi)也有分泌物存在，損傷更為明顯。喜炎平低濃度組纖毛幾乎全部脫落；高濃度組氣管內(nèi)有紅細胞，說明有出血的情況。

3.3.3口腔切片結果見圖3。

圖3　口腔黏膜切片圖

圖3顯示，生理鹽水組口腔黏膜鱗狀上皮層次界限清晰，基底層細胞排列整齊，無明顯病變。給藥組鱗狀上皮均有不同程度增厚，其中角化層(最外層)顏色變淺，增厚明顯。低濃度的兩組角化層增厚不如高濃度明顯，且高濃度組角化層凹凸不平，基底層細胞不整齊且有溝壑，損傷非常明顯。

3.3.4鼻中隔切片結果見圖4。

圖4　鼻黏膜切片圖

由圖4可見，生理鹽水組鼻中隔粘膜上皮細胞排列整齊，柱狀纖毛完好無損。兩個低濃度組基本表現(xiàn)為纖毛脫落，其中痰熱清低濃度組偶見上皮細胞脫落。而兩個高濃度組上皮細胞脫落明顯，下層分泌細胞也有較多分泌物，可見損傷程度顯著高于低濃度組與生理鹽水組。

4討論

近年來，肺部給藥方式在臨床上應用越來越廣泛，其中西藥用于霧化吸入居多，而中藥沒有霧化吸入劑型，故臨床常直接采用中藥注射劑霧化給藥。本實驗通過對霧化后大鼠行為狀態(tài)與呼吸道粘膜切片的觀察，初步評價痰熱清與喜炎平注射液霧化吸入給藥后的呼吸道及肺泡黏膜刺激性。

通過對大鼠模型行為特征的觀察，發(fā)現(xiàn)給藥組大鼠鼻腔與眼部出血嚴重，且高濃度組出血更明顯。解剖結果顯示，高濃度組(濃度即為常見報道的臨床使用濃度)大鼠的肺部有紅色斑塊、氣管周圍有瘀血等，均說明霧化吸入兩種注射液后，對大鼠的呼吸道器官造成損害。肺部、氣管、口腔黏膜及鼻中隔粘膜的切片觀察顯示，各組大鼠相應組織均受到損傷，且高濃度組的損傷程度高于低濃度組。

綜上所述，無論是復方代表(痰熱清)或單個成分代表(喜炎平)，中藥注射液霧化吸入給藥后，對大鼠的呼吸道器官均可能造成不同程度的損傷。本研究顯示，兩種注射液用于霧化吸入給藥均存在一定刺激性，臨床應用風險較大。吸入療法作為中醫(yī)的傳統(tǒng)治療方法，開發(fā)新型吸入給藥劑型，必須系統(tǒng)研究處方對呼吸道和肺泡的急慢性刺激，不宜將中藥注射劑直接霧化吸入使用。

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Study on the irritation of tanreqing and xiyanping injection by way of aerosol inhalation on respiratory mucosa of rats

DONG Bo-yu,DU Shou-ying,LI Peng-yue,LU Yan*,ZHAO Meng-di,YANG Liu,TAN Ning

(School of Chinese Pharmacy,Beijing University of TCM,Beijing 100102,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the changes in behavior and morphology structure of respiratory tract of rats after aerosol inhalation of tanreqing and xiyanping injection.MethodsTwenty male adult SD rats were randomly divided into 5 groups (normal saline group,high and low concentration of tanreqing groups,high and low concentration of xiyanping groups).The behavior of rats was observed after aerosol inhalation.The rats were put to death,and the mouth mucosa,nasal septum mucosa,trachea and left lung were taken to produce pathological sections at 8th day after administration.ResultsThe frequency of nasal and ocular bleeding of the high concentration groups in rats was higher than those of normal saline group and the low concentration groups (P<0.05),and the frequency of the low concentration groups was higher than that of normal saline group (P<0.05).The pulmonary edema,with slight color burn,was observed in the rats of medication groups.Sliced observation showed that lesions in medication groups were more obvious than those of normal saline group,and lesions in high concentration groups were more serious than those of low concentration groups.ConclusionAerosol inhalation administration of tanreqing and xiyanping is irritating in the overall behavior activity and pathological sections of rats.

Key words：Traditional Chinese medicine injection;Mucosa irritation;Aerosol inhalation;HE stained slice

收稿日期：2015-08-11

基金項目：國家自然基金(81473363)；北京市科技新星計劃(xx2015A048)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201604004