田陶然 張揚(yáng)根 黃鑫琪 李龍飚 張心曦 朱卓立口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 華西口腔醫(yī)院（四川大學(xué)） 成都 610041

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兩種鎳基口腔修復(fù)合金在漱口水中鎳離子析出的比較

田陶然 張揚(yáng)根 黃鑫琪 李龍飚 張心曦 朱卓立
口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 華西口腔醫(yī)院（四川大學(xué)） 成都 610041

［摘要］目的通過(guò)連續(xù)浸泡實(shí)驗(yàn)探究?jī)煞N鎳基口腔修復(fù)常用合金在漱口水中的鎳離子析出情況。方法將鎳基鑄造合金和鎳鉻烤瓷合金的標(biāo)準(zhǔn)試件逐級(jí)打磨后，放在分別由漱口水、蒸餾水和人工唾液配制的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組溶液中，連續(xù)恒溫（37±1）℃浸泡96 h后，使用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP-OES）測(cè)定溶液中析出的鎳離子的量。結(jié)果在沒(méi)有金屬浸泡的空白對(duì)照的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組溶液中鎳離子含量低于ICP-OES的檢出限。在對(duì)照組溶液及實(shí)驗(yàn)組溶液中浸泡后鎳基鑄造合金組測(cè)得的鎳離子析出均大于鎳鉻烤瓷合金組。兩種金屬試件在實(shí)驗(yàn)組溶液中的析出均大于在對(duì)照組溶液中的析出，差異明顯。結(jié)論漱口水對(duì)兩種鎳基合金中鎳離子的析出均有促進(jìn)作用，其中又以鎳基鑄造合金為甚。

［關(guān)鍵詞］漱口水；牙科合金；浸漬；鎳

鎳基合金由于良好的物理性能以及較低的價(jià)格，在口腔修復(fù)中的使用較為廣泛。但是鎳基合金在口腔環(huán)境中易于發(fā)生腐蝕，使得這種合金的使用飽受爭(zhēng)議［1-2］。腐蝕過(guò)程中產(chǎn)生的鎳離子與組織細(xì)胞直接接觸，其產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)在體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)中均可被發(fā)現(xiàn)，在口腔中主要表現(xiàn)為炎癥及過(guò)敏，其中過(guò)敏在女性患者中發(fā)生率可達(dá)10%～20%［3］。此外，在對(duì)鎳過(guò)敏患者的修復(fù)治療中如使用含鎳合金則會(huì)影響其牙周健康［4］。

研究［5-6］顯示，含氟以及低pH的液體環(huán)境會(huì)加速口內(nèi)修復(fù)體合金的腐蝕，金屬離子的析出為其主要表現(xiàn)之一。商品漱口水作為維持口腔衛(wèi)生的一種方式，被廣泛使用［7］。李施德林齒齦防護(hù)漱口水是商品漱口水中推廣較好的一個(gè)品種，適用人群廣泛，但其含氟及低pH的特性，可能對(duì)于鎳基合金產(chǎn)生不利的影響。但使用此種漱口水對(duì)于鎳基合金可產(chǎn)生多大影響，目前未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

現(xiàn)有對(duì)修復(fù)體合金口內(nèi)腐蝕研究所使用的溶液多為將標(biāo)準(zhǔn)人工唾液配制成不同氟濃度或pH的實(shí)驗(yàn)溶液［5］。但在配制的過(guò)程中，由于液體的添加，人工唾液中各成分的濃度已發(fā)生變化，直接導(dǎo)致了控制變量的改變，存在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏倚。本實(shí)驗(yàn)所選用的李施德林漱口水呈酸性，在鼓漱的過(guò)程中會(huì)刺激唾液分泌，故本研究使用等量蒸餾水和商品漱口水為變量，分別加入等量人工唾液配制為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組溶液，避免了其余控制變量的變化。實(shí)驗(yàn)方法上選擇鎳基鑄造合金、鎳鉻烤瓷合金制備的試件進(jìn)行定時(shí)浸泡，使用檢出限較高的電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（inductively coupled plasma optical emission spectrometer，ICP-OES）測(cè)定鎳離子的析出量，用以精確比較兩種鎳合金在特定液體環(huán)境中鎳離子的析出情況。

1　材料和方法

1.1材料

鎳基鑄造合金、鎳鉻烤瓷合金（上海醫(yī)療器械股份有限公司齒科材料廠）；牙科磷酸鹽鑄造包埋材料（洛陽(yáng)北苑特種烤瓷有限公司）；Bellavest SH烤瓷包埋料（BEGO公司，德國(guó)）；李施德林齒齦防護(hù)漱口水（強(qiáng)生公司，美國(guó)）；鎳基鑄造合金以鎳、鉻為主體材料，Pb≤0.02%，As≤0.01%，Be≤0.02%，Cd≤0.02%；鎳鉻烤瓷合金主要成分為：Ni 63.6%，Cr 22.9%，Mo 11.3%。

1.2方法

1.2.1溶液的制備人工唾液參考ISO/TR10271標(biāo)準(zhǔn)，其成分具體為：NaCl 0.4 g、KCl 0.4 g、CaCl2·2H2O 0.795 g、NaH2-PO4·2H2O 0.78 g、Na2S·2H2O 0.005 g、尿素1 g、蒸餾水1 000 mL，將配置成功后的人工唾液pH值調(diào)至6.80。由于漱口水呈酸性，以酸刺激狀態(tài)下動(dòng)態(tài)唾液總流率2.64 g·min-1為參考值，依據(jù)消費(fèi)者每次使用漱口水的時(shí)間和量，在每100 mL漱口水中添加6.60 g人工唾液制成實(shí)驗(yàn)組溶液，在每100 mL蒸餾水中添加6.60 g人工唾液制成對(duì)照組溶液。常溫下多次測(cè)量實(shí)驗(yàn)組溶液pH值后求得平均值為4.23。兩組溶液均高溫高壓滅菌后保存。

1.2.2試件的制備用鑄造蠟制備規(guī)格為10 mm× 10 mm×1 mm方蠟?zāi)?0個(gè)，鎳基鑄造合金、鎳鉻烤瓷合金常規(guī)包埋鑄造，形成合金試件共20件，每種金屬10件。按口腔金屬義齒加工工藝噴砂處理去除試件表面包埋料，將試件兩面依次經(jīng)300、400、600、800、1 000目金相砂紙及絨輪打磨拋光。所有試件置于去離子水中超聲清洗5 min，然后在無(wú)水乙醇中浸泡5 min，干燥備用，以上程序由同一人完成。

1.2.3商品漱口水浸泡將20個(gè)5 mL EP管高溫高壓滅菌后按每組10個(gè)分為實(shí)驗(yàn)、對(duì)照兩組。實(shí)驗(yàn)組EP管內(nèi)加入3 mL實(shí)驗(yàn)組溶液，對(duì)照組EP管內(nèi)加入3 mL對(duì)照組溶液。將每種金屬試件按每組5件隨機(jī)分成兩組，分別稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組。然后將干燥備用的金屬試件放置在相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組EP管內(nèi)，每個(gè)EP管內(nèi)放置1種金屬共1個(gè)試件。所有金屬試件的表面均充分暴露于液體環(huán)境中。用膠帶將EP管口密封。另設(shè)兩組每組5個(gè)高溫高壓滅菌后的5 mL EP管分別注入3 mL實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組溶液作為空白對(duì)照。將所有EP管放置于溫度為（37± 1）℃的恒溫水槽內(nèi)，浸泡96 h。

1.2.4離子析出的測(cè)定浸泡完畢后用塑料鑷子取出試件，封存溶液。用無(wú)水乙醇沖洗試件，干燥保存。將EP管內(nèi)的實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組溶液樣本送四川大學(xué)分析測(cè)試中心，使用ICP-OES（德國(guó)斯派克分析儀器公司，德國(guó)）定量測(cè)其溶液里的鎳離子濃度。

1.2.5掃描電子顯微鏡觀察所有金屬試件編號(hào)，在浸泡前后均使用掃描電子顯微鏡（FEI公司，荷蘭）放大2 000、10 000倍觀察表面形貌，加速電壓20 kV。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)浸泡前后溶液里相關(guān)金屬離子濃度的變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。對(duì)于實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組與空白對(duì)照組的對(duì)比以及對(duì)于實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的對(duì)比均采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)P＜0.05。

2　結(jié)果

96 h的恒溫浸泡之后，在所有10個(gè)未加入金屬試件的實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組空白對(duì)照溶液中析出的鎳離子均低于ICP-OES檢出限。在對(duì)照組溶液浸泡后鎳基鑄造合金組測(cè)得的鎳離子析出大于鎳鉻烤瓷合金組（P＜0.05）。在加入了漱口水的實(shí)驗(yàn)組溶液中鎳基鑄造合金測(cè)得的鎳離子析出大于鎳鉻烤瓷合金（P＜0.01）。兩種金屬試件在實(shí)驗(yàn)組溶液中的析出均大于在對(duì)照組溶液中的析出，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

掃描電子顯微鏡觀察參見(jiàn)圖1、2。

圖1　浸泡實(shí)驗(yàn)前后鎳鉻烤瓷合金掃描電子顯微鏡圖片F(xiàn)ig1　The scanning results of Ni-Cr porcelain fused to metal as-received and after the immersion test

鎳鉻烤瓷合金浸泡前，金屬表面打磨痕跡連續(xù)，見(jiàn)一些小圓孔可能為鑄造缺陷。對(duì)照組溶液浸泡后鎳鉻烤瓷合金表面無(wú)明確腐蝕表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)組溶液浸泡后，2 000倍下金屬表面與對(duì)照組無(wú)明顯區(qū)別，10 000倍下相較對(duì)照組顯得略微粗糙、凹凸不平，有一些可疑的腐蝕點(diǎn)。圖3中，可見(jiàn)浸泡前鎳基鑄造合金試件在2 000、10 000倍下打磨痕跡連續(xù)。對(duì)照組溶液浸泡后表面未見(jiàn)明顯變化。實(shí)驗(yàn)組溶液浸泡后，2 000倍下可見(jiàn)金屬表面均勻散在凹坑，表面粗糙。10 000倍下可見(jiàn)打磨痕跡斷續(xù)，有淺的凹坑，出現(xiàn)明顯的腐蝕點(diǎn)隙。

圖2　浸泡實(shí)驗(yàn)前后鎳基鑄造合金掃描電子顯微鏡圖片F(xiàn)ig2　The scanning results of nickel casting alloy as-received and after the immersion test

3　討論

鎳是機(jī)體生命活動(dòng)所必需的微量元素，其生物學(xué)作用極為廣泛［8］。鎳離子本身的細(xì)胞毒性作用可對(duì)鄰近組織甚至非鄰近組織造成不同程度的損傷及改變。鎳離子可通過(guò)修復(fù)體表面的菌斑而蓄積，達(dá)到較高濃度后可造成鄰近組織的增生或炎癥；鎳基合金修復(fù)體在腐蝕過(guò)程中釋放的鎳離子可引發(fā)過(guò)敏已基本達(dá)成共識(shí)。研究［9-11］顯示，鎳基合金修復(fù)體可導(dǎo)致紅斑、灼燒感、囊泡形成及味覺(jué)改變；此外，雖然沒(méi)有報(bào)道將口腔修復(fù)用鎳基合金和癌癥聯(lián)系起來(lái)，但是多種含Ni物質(zhì)被認(rèn)定為致癌物質(zhì)。因此，避免鎳基合金修復(fù)體發(fā)生腐蝕對(duì)于患者有一定臨床價(jià)值。

口腔中金屬材料腐蝕主要為電化學(xué)腐蝕［12］。當(dāng)氫離子在陰極發(fā)生還原反應(yīng)時(shí)，陽(yáng)極金屬溶解產(chǎn)生電子，從而促進(jìn)電化學(xué)腐蝕的進(jìn)展。故當(dāng)口腔內(nèi)pH降低時(shí)，口內(nèi)修復(fù)體金屬去極化加強(qiáng)，更易發(fā)生腐蝕而析出離子［13］。Mutlu-Sagesen等［14］發(fā)現(xiàn)幾種常用烤瓷合金的離子析出與溶液pH有相關(guān)性。本研究中測(cè)得漱口水pH值為4.23，遠(yuǎn)低于正常唾液平均pH值6.8，故金屬在其中更易產(chǎn)生離子的析出。

除低pH以外，氟化物也能增加鎳離子的析出量。本研究選用的兩種合金均以鉻為主要成分之一，鉻能在合金表面形成一層致密、穩(wěn)定且能與基體結(jié)合緊密的氧化鉻薄膜，使金屬鈍化［15］，在腐蝕過(guò)程中能阻止鎳的析出。但鹵素陰離子可通過(guò)破壞金屬表面鈍化膜的方式加速合金元素的釋放。有研究表明，在含氟0.05%人工唾液中浸泡后，鈷鉻合金和純鈦表面粗糙度較浸泡前有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Knutson等［16］發(fā)現(xiàn)，暴露于含氟的液體環(huán)境對(duì)于多種正畸微種植體是不利的。在離體實(shí)驗(yàn)中有觀察到在酸性人工唾液中加入氟化物確實(shí)增加了合金的鎳離子析出。因此，可以認(rèn)為漱口水中0.022%的氟化鈉有促進(jìn)鎳離子析出的作用。

無(wú)論在對(duì)照組溶液還是含有漱口水的實(shí)驗(yàn)組溶液中，鎳基鑄造合金的鎳離子析出均大于鎳鉻烤瓷合金。且在實(shí)驗(yàn)組溶液中，鎳基鑄造合金的鎳離子析出幾乎是鎳鉻烤瓷合金的16倍，其最大的原因可能是因?yàn)楹笳吆休^高含量的鉬。鉬能不斷地快速修補(bǔ)破壞的鈍化膜，從而提高了金屬的耐腐蝕性，降低了鎳鉻烤瓷合金中鎳的析出。

離子析出的結(jié)果從掃描電子顯微鏡圖像中可得到驗(yàn)證。在對(duì)照組溶液中浸泡后的兩種金屬表面形貌和浸泡實(shí)驗(yàn)前無(wú)明顯區(qū)別，但經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)組溶液浸泡的金屬，其表面形貌均產(chǎn)生了不同程度的變化。其中，鎳基鑄造合金試件經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)組溶液浸泡后，表面產(chǎn)生了明顯的腐蝕孔隙。結(jié)合離子析出結(jié)果可認(rèn)為，含有此種漱口水的溶液環(huán)境對(duì)兩種鎳基合金的腐蝕均有促進(jìn)作用，其中又以鎳基鑄造合金為甚。

現(xiàn)實(shí)中漱口水為間斷性使用，而本實(shí)驗(yàn)使用的是連續(xù)浸泡的方法。有文獻(xiàn)報(bào)道，在動(dòng)態(tài)pH值變化的體外實(shí)驗(yàn)中，兩種含鎳合金在酸性人工唾液浸泡后的鎳離子析出均顯著大于正常人工唾液浸泡的析出，且兩種合金酸性加氟人工唾液浸泡的析出量均大于不加氟的酸性人工唾液浸泡組，TILITE P合金在pH值為4的人工唾液中的鎳離子析出量可達(dá)正常pH人工唾液析出量的800倍左右。此外，在實(shí)際使用中，鼓漱的漱口水會(huì)對(duì)修復(fù)體表面產(chǎn)生沖擊，并影響齦溝液中鎳離子的濃度，可能會(huì)進(jìn)一步影響鎳離子的析出。但是，漱口水作為口腔保健用品，每天與口內(nèi)修復(fù)體接觸時(shí)間不超過(guò)2 min，無(wú)法確定這種動(dòng)態(tài)變化的實(shí)際意義。有研究表明，使用含鎳金屬制作修復(fù)冠的患者口腔唾液鎳離子的質(zhì)量濃度在戴冠1周后有增加，但6個(gè)月后可恢復(fù)到戴冠前的水平。故在實(shí)際情況中使用漱口水對(duì)鎳離子的析出有多大影響還有待更長(zhǎng)時(shí)間深入的研究。

本研究使用以酸刺激狀態(tài)下動(dòng)態(tài)唾液總流率為參考配制變量嚴(yán)格控制的實(shí)驗(yàn)溶液，并使用檢出限較高的ICP-OES進(jìn)行析出離子的測(cè)定，探尋了一種牙科金屬材料浸泡實(shí)驗(yàn)的方法。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，在實(shí)驗(yàn)組混合溶液中，析出鎳離子濃度均有不同程度升高，尤其是鎳基鑄造合金，經(jīng)過(guò)浸泡實(shí)驗(yàn)后，其在含有漱口水的實(shí)驗(yàn)組溶液中鎳離子濃度已是其對(duì)照組溶液鎳離子濃度的30倍左右。掃描電鏡觀察到的結(jié)果和離子析出的結(jié)果一致。其差異可能由鎳鉻烤瓷合金中含有的鉬造成。但是引入酸刺激增加唾液流速來(lái)配制實(shí)驗(yàn)溶液的新方法與傳統(tǒng)方法是否有差異，實(shí)際生活中此類(lèi)漱口水的使用對(duì)口內(nèi)含鎳合金修復(fù)體鎳離子的析出究竟有多大影響還有待進(jìn)一步探究。

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（本文編輯駱筱秋）

Comparative study on nickel release of two dental nickel alloys in mouth wash

Tian Taoran，Zhang Yanggen，Huang Xinqi，Li Longbiao，Zhang Xinxi，Zhu Zhuoli.（State Key Laboratory of Oral Diseases，West China Hospital of Stomatology，Sichuan University，Chengdu 610041，China）

This study was supported by the Science Foudation of Sichuan Medical Association（S15061）.

［Abstract］ObjectiveThis study aims to investigate the release of nickel from two nickel alloy specimens for dental prosthesis in a commercial mouth wash through a constant immersion experiment.Methods Standard samples were casted from two different alloys and ground to achieve the same roughness.For our experimental group，one-half of the samples are immersed in a solution composed of artificial saliva and commercial mouthwash.For our control group，the other half of the samples are placed in a solution containing artificial saliva and distilled water.This procedure is performed at （37± 1） °C for 96 h.The amount of Ni ion released after the 96 h immersion test and the changes in the surfaces of the alloys asreceived and upon immersion are then determined by using an inductively coupled plasma optical emission spectrometer （ICP-OES） and a scanning electron microscope.Results The amount of released Ni ion is below the minimum detection limit of ICP-OES in the blank solution without the alloys.More ions are released from the Ni-casted alloy than from the Ni-Cr porcelain fused to a metal in the experimental group and the control group.The ions released from each alloy are also significantly different in the two solutions.Conclusion The tested commercial mouthwash accelerates the release of Ni ion from the two nickel alloys.This phenomenon is more significant in the nickel-casted alloy than in the other alloy type.

［Key words］mouth wash；dental alloy；immersion；nickel

［收稿日期］2015-12-01；［修回日期］2016-02-13

［基金項(xiàng)目］四川省醫(yī)學(xué)會(huì)科研課題（S15061）

［作者簡(jiǎn)介］田陶然，碩士，Email：tiantrcd@163.com

［通信作者］朱卓立，講師，博士，Email：zzl7505@126.com

［中圖分類(lèi)號(hào)］R 783

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［doi］ 10.7518/gjkq.2016.03.006