敖 越，車立忱，吳佳寧，劉 派，宋如斌

（遼寧省沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110034）

沈陽市父母代雞場(chǎng)禽白血病帶毒情況調(diào)查分析

敖 越，車立忱，吳佳寧，劉 派，宋如斌

（遼寧省沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110034）

為掌握沈陽市肉種雞場(chǎng)禽白血病帶毒感染狀況，2014～2016年沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心共對(duì)65家規(guī)模禽場(chǎng)進(jìn)行了調(diào)查。采集不同日齡雞群的泄殖腔棉拭子5 395份、翅靜脈血液5 395份。分別進(jìn)行P27抗原和ALV-J抗體的酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)。從近三年的監(jiān)測(cè)結(jié)果看，J抗體平均陽性率為1 006/5 395（18.65%），感染情況較為嚴(yán)重。ALV-p27的平均陽性率為1 102/5 395（20.43%），帶毒情況不容忽視。通過監(jiān)測(cè)結(jié)果，建議種禽場(chǎng)管理者應(yīng)重視禽白血病監(jiān)測(cè)與凈化。

禽白血??；肉種雞；檢測(cè)；凈化

禽白血?。ˋvian leukosis）是由禽白血病/肉瘤病毒群中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的總稱。是制約養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要禽類傳染病，包括垂直傳播和水平傳播，其中以垂直傳播為主[1]。ALV感染雞后可以誘導(dǎo)機(jī)體形成多種形式的腫瘤病，并造成免疫抑制，導(dǎo)致雞只免疫失敗，從而引發(fā)其他動(dòng)物疫病，給我國養(yǎng)雞業(yè)帶來了重大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前主要通過定期對(duì)雞群進(jìn)行ALV血清學(xué)監(jiān)測(cè)，采取淘汰凈化的方法控制該病。為確實(shí)掌握沈陽市肉種雞場(chǎng)禽白血病帶毒或感染狀況，2014～2016年沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心共對(duì)65家規(guī)模禽場(chǎng)進(jìn)行了調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查情況報(bào)告如下。

1 監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)的選擇及樣品的采集

從2014年1月至2016年6月，在沈陽市所轄區(qū)縣選取規(guī)模雞場(chǎng)65家，每年對(duì)其存欄雞只進(jìn)行監(jiān)測(cè)，采集不同日齡雞群的泄殖腔棉拭子5 395份、翅靜脈血液5 395份。對(duì)采集同一只雞的泄殖腔棉拭子和血清，編號(hào)相對(duì)應(yīng)。血清采集后于-20℃冰箱保存待檢。

2 試驗(yàn)儀器及設(shè)備

低溫高速離心機(jī)（SIGMA）；全波長(zhǎng)彩色觸摸屏酶標(biāo)儀（TECAN）；恒溫培養(yǎng)箱（LAB）；96孔全自動(dòng)洗板機(jī)（TECAN）；超純水純化系統(tǒng)（MILLIPORE）；移液器（EPPENDORF）

3 監(jiān)測(cè)方法

血清及泄殖腔棉拭子采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)。

3.1 P27抗原檢測(cè) 將采集的泄殖腔棉拭子置滅菌0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）中，置-20℃凍融1次，恢復(fù)室溫后，劇烈震蕩1 min，擠出棉簽中的液體，棄棉簽。液體在4～8℃，以12 000 r/min離心1 min，取上清直接進(jìn)行檢測(cè)。禽白血病抗原ELISA檢測(cè)試劑盒購自哈爾濱動(dòng)物生物制品國家工程研究中心，操作方法按照試劑盒說明書進(jìn)行。測(cè)定并記錄各孔于450 nm的吸光值（OD450）。

3.2 ALV-J抗體檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中的ALV-J抗體，禽白血病病毒J亞群抗體檢測(cè)試劑盒購自IDEXX公司，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。測(cè)定并記錄各孔于650 nm的吸光值（OD650）。

表1 肉種雞群AL ELISA監(jiān)測(cè)結(jié)果Table1 The broiler breeder AL ELISA monitoring results

4 監(jiān)測(cè)結(jié)果與分析

4.1 肉種雞群ALV監(jiān)測(cè)結(jié)果 本次監(jiān)測(cè)用近三年的時(shí)間，抽檢了沈陽市所轄區(qū)縣規(guī)模肉種雞場(chǎng)65家，涉及到318個(gè)雞群，抽檢面寬，代表性強(qiáng)。監(jiān)測(cè)結(jié)果（表1）表明，沈陽市肉種雞存在ALV-J的感染，2014年ALV-J抗體陽性率281/1 741（16.14%），2015年ALV-J抗體陽性率357/1 815（19.70%），2016年ALV-J抗體陽性率368/1 839（20.01%），三年抗體平均陽性率為1 006/5 395（18.65%），每年ALV-J的感染情況有遞增趨勢(shì)，但幅度不大；ALV-p27的平均陽性率為1 102/5 395（20.43%），帶毒情況較為嚴(yán)重。

4.2 ALV抗原抗體之間相關(guān)性的調(diào)查 監(jiān)測(cè)結(jié)果（表2）表明，ALV感染種禽后表現(xiàn)的三種抗原抗體類型中：抗原陽性、抗體陰性（V+A-）的情況所占的比例較高，為951/5 395（17.63%）；抗原陰性、抗體陽性（V-A+）的情況次之，為855/5 395（15.85%）；抗原抗體均為陽性（V+A+）的所占比例最少，為151/5 395（2.80%）。另外從不同生長(zhǎng)階段的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，產(chǎn)蛋期 ALV-J的感染（19.55%、23.76%）和帶毒（21.32%、20.61%）情況較生長(zhǎng)期（2.82%、10.15%）嚴(yán)重。

表2 肉種雞ALV感染的類型及其比例Table2 The broiler breeder ALV infection type and proportion

5 分析和討論

從近三年的監(jiān)測(cè)結(jié)果看，沈陽市肉種雞存在ALV-J的感染，J抗體平均陽性率為1 006/5 395（18.65%），感染情況較為嚴(yán)重。ALV-p27的平均陽性率為1 102/5 395（20.43%），帶毒情況不容忽視，是主要的傳染源。由于ELISA抗原檢測(cè)無法區(qū)分外源性和內(nèi)源性病毒，從而使得ELISA檢測(cè)可能存在假陽性，應(yīng)需進(jìn)一步做病毒的分離鑒定。V+A-的雞并非是由于免疫耐受而不產(chǎn)生抗體，或是由于內(nèi)源性病毒性因素干擾而不產(chǎn)生外原性病毒的抗體，或是由于其他因素使其產(chǎn)生抗體速度較緩；V-A+的雞已經(jīng)感染了外源性的ALV。V+A-的雞對(duì)病毒產(chǎn)生免疫耐受或產(chǎn)生的抗體滴度極低，成為主要的傳染源；V+ A+的雞體內(nèi)雖然有抗體，但也同樣帶毒。在生產(chǎn)上，大多種禽場(chǎng)的管理者對(duì)禽白血病的重視程度不夠，很少在場(chǎng)內(nèi)開展凈化工作。由于禽白血病在臨床上反應(yīng)出來的是腫瘤性疾病，基本沒有治療價(jià)值，淘汰率較高。通過監(jiān)測(cè)結(jié)果，建議種禽場(chǎng)管理者重視禽白血病監(jiān)測(cè)與凈化的問題。

主要從三個(gè)方面著手：首先，防控禽白血病必須從源頭抓起，確保從沒有外源性ALV感染的育種公司購入種源，同時(shí)進(jìn)行本種群凈化，控制垂直傳播，建立無白血病的種雞群是防治本病的最有效的措施[3]。其次，控制水平傳播，禽白血病的水平傳播主要發(fā)生在孵化期間和出雛后的15 d內(nèi)，控制的關(guān)鍵是孵化和生產(chǎn)兩個(gè)環(huán)節(jié)。最后，控制醫(yī)源性傳播，嚴(yán)格防止使用外源性ALV污染的疫苗。

[1]Y.M.Saif.禽病學(xué)（第十二版）[M].蘇敬良，高福，譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012，599-639.

[2]王洪進(jìn)，張青禪，趙冬敏，等.我國近10年雞白血病流行病學(xué)報(bào)道與研究分析[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（2）：292-296.

[3]崔治中.種雞場(chǎng)禽白血病防控和凈化技術(shù)方案[J].中國家禽，2015，37（23）：1-7.

Investigation and analysis of the broiler breeder in Shenyang city of avian leukosis virus infection status

Ao Yue,Che Lichen,Wu Jianing,Liu Pai,Song Rubin
(Shenyang animal disease prevention and control center，Liaoning Shenyang 110034)

In order to master the broiler breeder in Shenyang city of avian leukosis virus infection status,a total of 65 scale poultry farms were investigated by Shenyang animal disease prevention and control center from 2014 to 2016.We collected different day old chickens cloacal swab 5 395 copies,5 395 copies of the wing vein blood.The enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)was used to detect the P27 antigen and ALV-J antibody respectively.From nearly three years of monitoring results,the average positive rate of J antibody was 1 006/5 395(18.65%), andtheinfection wasmoreserious.TheaveragepositiverateofALV-p27was1102/5 395 (20.43%),which can not be ignored.Through our monitoring results,suggestions for poultry farm managers should pay attention to monitoring and purification of avian leukosis.

Avian leukemia;Broiler breeder;Detection;Purification

S858.31

：A

：1672-9692(2016)09-0038-03

2016-07-28

敖越（1972-），女，本科，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病檢測(cè)與防控工作。