許元元，曹小利，程　莉，周萬(wàn)青，張之烽，沈　瀚

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尿培養(yǎng)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的耐藥特點(diǎn)及對(duì)磷霉素的敏感性分析

許元元1，曹小利2，程莉2，周萬(wàn)青2，張之烽2，沈瀚2

[摘要]目的：分析尿培養(yǎng)產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌的耐藥特點(diǎn)，了解磷霉素對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的體外抗菌活性，并與其他種抗菌藥物進(jìn)行比較。方法：從菌株庫(kù)復(fù)蘇2010-2014年尿培養(yǎng)大腸埃希菌821株，使用ESBLs的表型確認(rèn)實(shí)驗(yàn)篩選產(chǎn)ESBLs菌株，用K-B法測(cè)定磷霉素等15種抗菌藥物對(duì)其的體外抗菌活性。結(jié)果：821株大腸埃希菌中465株產(chǎn)ESBLs，對(duì)亞胺培南敏感性較高(91.4%)，其次是磷霉素(88.0%)，然而對(duì)左氧氟沙星、青霉素類和頭孢菌素類抗生素的敏感性較差。結(jié)論：碳青霉烯類抗生素依然是敏感率最高的藥物，磷霉素對(duì)尿培養(yǎng)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌有良好的體外抗菌活性，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]大腸埃希菌；超廣譜β內(nèi)酰胺酶；耐藥性；磷霉素

尿路感染是常見(jiàn)的感染性疾病，大腸埃希菌是引起尿路感染最常見(jiàn)的致病菌[1]。近年來(lái)，隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的大腸埃希菌檢出率不斷升高，往往導(dǎo)致青霉素類、單環(huán)類和第二、三代頭孢菌素等藥物的治療無(wú)效。因此，如何選用細(xì)菌耐藥率低、療效好、不良反應(yīng)少的抗生素是治療尿路感染的挑戰(zhàn)性課題。目前，臨床多使用酶抑制劑復(fù)合制劑和碳青霉烯類抗生素給予經(jīng)驗(yàn)性治療，而碳青霉烯耐藥菌的頻繁出現(xiàn)，導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥性更加嚴(yán)重。國(guó)內(nèi)外專家開(kāi)始審視傳統(tǒng)抗菌藥物作為多重耐藥菌感染備用治療手段的可能性，其中磷霉素備受關(guān)注。近幾年國(guó)內(nèi)外報(bào)道[2-4]指出磷霉素對(duì)產(chǎn)ESBLs的革蘭陰性菌具有良好的體外抗菌活性。本研究對(duì)臨床尿液標(biāo)本中分離的465株產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌進(jìn)行了藥物敏感性(藥敏)試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果作一報(bào)道。

1材料與方法

1.1菌株來(lái)源從南京鼓樓醫(yī)院菌株庫(kù)復(fù)蘇2010-2014年臨床尿液標(biāo)本非重復(fù)分離的大腸埃希菌821株，其中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌465株。

1.2儀器及試劑ATB半自動(dòng)微生物鑒定儀，Vitek 2 compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀及其配套GN鑒定卡和GN13藥敏卡(法國(guó)生物梅里埃公司)。藥敏紙片為Oxoid公司產(chǎn)品，包括氨芐西林/舒巴坦、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢他啶/棒酸、頭孢噻肟、頭孢噻肟/棒酸)、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢哌酮/舒巴坦、亞胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、哌拉西林、頭孢吡肟、左氧氟沙星、替卡西林/克拉維酸、氨曲南。磷霉素藥敏紙片(FOS 200 μg/葡萄糖-6-磷酸50 μg)購(gòu)于杭州微生物試劑有限公司。MH瓊脂平板(法國(guó)生物梅里埃公司)。

1.3菌種鑒定所有菌株用ATB半自動(dòng)微生物鑒定儀、Vitek 2 compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀及其配套的革蘭陰性(GN)鑒定卡進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

1.4ESBLs的表型確認(rèn)實(shí)驗(yàn)采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)雙紙片法測(cè)定[5]。對(duì)5年來(lái)復(fù)蘇的細(xì)菌同時(shí)測(cè)定頭孢他啶、頭孢他啶/棒酸、頭孢噻肟、頭孢噻肟/棒酸紙片的抑菌環(huán)大小，任意一組含酶抑制劑復(fù)合制劑的抑菌環(huán)直徑大于單藥者5 mm以上，即確證該菌產(chǎn)ESBLs。

1.5藥敏試驗(yàn)用K-B法測(cè)定15種抗菌藥物對(duì)465株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的抑菌環(huán)直徑。根據(jù)2014年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判讀。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922。

2結(jié)果

2.1ESBLs的檢出情況本院菌株庫(kù)中821株大腸埃希菌自2010-2014年的株數(shù)分別是181株、35株、314株、158株、133株，經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)ESBLs的菌株有465株(56.6%)，按年度分布分別是91(50.3%)株、23(65.7%)株、159(50.6%)株、107(67.7%)株、85(63.9%)株。

2.2尿培養(yǎng)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的耐藥特點(diǎn)465株產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌對(duì)臨床常用的15種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌對(duì)亞胺培南敏感性較高(91.4%)，其次為磷霉素(88.0%)；而對(duì)青霉素類和頭孢菌素類及左氧氟沙星的敏感性較差，耐藥率>60%。

2.3磷霉素耐藥情況5年中所檢測(cè)出的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)磷霉素的耐藥率相對(duì)較穩(wěn)定，其耐藥率在10%左右，結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

本研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌檢出率達(dá)56.6%，與胡付品等[6]報(bào)道相符。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)喹諾酮類，頭孢二、三代抗生素，氨曲南等藥物的耐藥率較高，這與以往的文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致。也表明用于治療尿路感染的臨床藥物在不斷減少，迫切需要開(kāi)發(fā)新的藥物及重新評(píng)估現(xiàn)有的藥物以緩解臨床治療的困境。

表1465株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)磷霉素等15種抗菌藥物的敏感性分析

表22010-2014年我院尿培養(yǎng)中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)磷霉素的耐藥率

磷霉素是1969年從鏈霉菌中分離得到的一種磷酸衍生物，具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，能夠不可逆地抑制二磷酸尿嘧啶-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶活性，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁合成的第一步被阻斷，引起細(xì)菌裂解死亡[8]。國(guó)內(nèi)專家研究指出磷霉素主要以原型經(jīng)腎臟排泄，故尿中藥物濃度較高，維持有效濃度時(shí)間長(zhǎng)，因此可作為泌尿感染的選擇藥物之一。多家臨床報(bào)告磷霉素治療尿路感染取得好的效果，不良反應(yīng)為較輕微的腹瀉[9-10]。磷霉素由于對(duì)耐藥菌仍然具有很好的抗菌活性、無(wú)交叉耐藥性以及與其他抗菌藥物聯(lián)用時(shí)可呈現(xiàn)顯著的協(xié)同作用的特性[11]，越來(lái)越受到關(guān)注。本研究發(fā)現(xiàn)，我院2010-2014年產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌對(duì)磷霉素的耐藥率在10%左右，且連續(xù)5年來(lái)的體外抗菌活性相對(duì)較穩(wěn)定，這與國(guó)內(nèi)外研究[10，12]結(jié)果接近，提示磷霉素治療產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌泌尿系感染具有一定療效。

綜上所述，產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌已成為尿路感染的主要致病菌，碳青霉烯類抗生素依然是首選藥物，同時(shí)考慮到磷霉素的藥理學(xué)等特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)，臨床醫(yī)生在治療尿路感染時(shí)應(yīng)考慮使用磷霉素代替碳青霉烯類藥物，以減緩多重耐藥菌的進(jìn)一步發(fā)展。

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(本文編輯劉璐)

The resistant characteristics and sensitivity analysis of ESBLs Escherichia coli produced by urine culture

XU Yuan-yuan1,CAO Xiao-li2,CHENG Li2,ZHOU Wan-qing2,ZHANG Zhi-feng2,SHEN Han2

(1.DepartmentofMedicalLaboratory,GeneralHospitalofWanbeiCoal-ElectricGroup,SuzhouAnhui234011;2.DepartmentofMedicalLaboratory,TheAffiliatedDrumTowerHospitalofNanjingUniversityMedicalSchool,NanjingJiangsu210008,China)

[Abstract]Objective:To analyze the resistant characteristics of ESBLs Escherichia coli produced by urine culture,investigate its antibacterial activity in vitro and compare with other antibacterial drugs.Methods:A total of 821 strains were cultured from the strain library,the ESBLs Escherichia coli produced by urine culture were screened according to the phenotype of ESBLs,the antibacterial activities in vitro of 15 antimicrobial agents,including fosfomycin,were detected by K-B method.Results:Among the 821 Escherichia coli strains,the sensitivities of the 465 ESBLs Escherichia coli strains produced by urine culture to imipenem were high(91.4%),following by fosfomycin(88.0%),the sensitivities of which to levofloxacin,penicillin and cephalosporin were low.Conclusions:The sensitivity of carbapenem is the highest drug,the antibacterial activity in vitro of fosfomycin to ESBLs Escherichia coli produced by urine culture is good,which has certain clinical value.

[Key words]Escherichia coli;extended spectrum beta-lactamases;resistance;fosfomycin

[文章編號(hào)]1000-2200(2016)03-0380-03·檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)·

[收稿日期]2015-09-05

[作者簡(jiǎn)介]許元元(1984-)，女，主管技師.

[中圖法分類號(hào)]R 378.21

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.03.033

[作者單位] 1.皖北煤電集團(tuán)總醫(yī)院 檢驗(yàn)科，安徽 宿州 234011；2.南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 南京 210008