蔣興華,吳亞云,程明亮

(貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院感染科，貴陽 550004)

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貴州苗族腌湯對急性肝衰竭大鼠腸道屏障功能保護作用的研究*

蔣興華,吳亞云△,程明亮

(貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院感染科，貴陽 550004)

[摘要]目的探討苗族腌湯對急性肝衰竭大鼠腸道屏障功能的保護作用，以期為肝衰竭患者提供有效的食療措施。方法雄性SD大鼠50只分為5組，正常對照組(A組)、急性肝衰竭模型組(B組)、雙歧桿菌三聯(lián)活菌組(C組)、腌湯高劑量組(D組)、腌湯低劑量組(E組)，每組10只。B組、C組、D組、E組大鼠用硫代乙酰胺(TAA)皮下2次注射，制備大鼠急性肝衰竭模型。C組、D組、E組大鼠在肝衰竭造模前和期間分別予雙歧桿菌三聯(lián)活菌、腌湯6 mL(高劑量)、腌湯1.5 mL(低劑量)灌胃。于第2次注射TAA后28 h抽取股動脈血分別檢測血清內毒素(ETX)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)；取肝組織及距回盲部3 cm回腸組織行病理學檢測。結果B組肝細胞索排列紊亂，肝小葉結構破壞，肝細胞呈灶狀壞死及大片壞死，壞死區(qū)大量炎性細胞浸潤；各干預組與B組肝臟病理學損傷程度相當。A組回腸黏膜形態(tài)完整，絨毛結構清晰，排列整齊；B組回腸黏膜結構紊亂，絨毛稀疏，上皮細胞不同程度脫落、缺失、壞死，固有層明顯充血，大量炎性細胞浸潤；各干預組腸黏膜損傷較B組輕。B組及各干預組大鼠血清ETX、D-Lac、DAO、ALT、AST水平均明顯高于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與B組比較，各干預組大鼠血清ETX、D-Lac、DAO、ALT、AST水平均不同程度降低，C組、D組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),E組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與C組比較，D組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，E組的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與D組比較，E組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論苗族腌湯能通過保護肝衰竭大鼠腸黏膜屏障，減少肝衰竭大鼠血清ETX的生成或釋放，減輕腸源性內毒素血癥(IETM)，似可防治由IETM導致的繼發(fā)性肝損傷，對肝衰竭有一定的食療作用。

[關鍵詞]大鼠;腌湯;急性肝衰竭;腸道屏障;腸源性內毒素血癥

肝臟在受到各種原發(fā)致病因素(如肝炎病毒、乙醇、藥物、毒物、脂肪堆積、自身免疫等)損傷后繼發(fā)的腸源性內毒素血癥(intestinal endotoxemia,IETM)與肝病發(fā)展和轉歸緊密相關及相互作用已被廣泛重視并證實[1]。實驗證明，在急性肝炎模型中切除大鼠結腸減少IETM，通過藥物抑制Kupffer細胞及應用抗內毒素(endotoxin，ETX)抗體可明顯減輕肝毒物所致的肝損傷[2]。多項研究表明，雙歧桿菌三聯(lián)活菌等微生態(tài)制劑可明顯降低血漿ETX水平，減輕IETM，抑制炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α等的釋放，減輕免疫反應對肝細胞的損傷，從而改善肝硬化、肝衰竭患者的臨床癥狀和肝功能[3-5]。本研究團隊在對貴州黔東南苗族地區(qū)初步調查了解到，當?shù)乩习傩斩鄶?shù)嗜酒，而其酒精性肝硬化發(fā)病者卻極少。進一步了解獲知，該地百姓在飲酒時喜歡用自制的腌(?n)湯泡菜下酒，酒后喜歡喝腌湯，平時也特別喜愛腌湯及腌湯泡菜，推測腌湯可能有保護酒精性肝損傷作用。本研究以貴州苗族腌湯與目前常用微生態(tài)制劑雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊預干預大鼠，使用硫代乙酰胺(TAA)制作大鼠肝衰竭模型，測定血清ETX、二胺氧化酶(Diamine oxidase，DAO)、D-乳酸[D(-)-lactate，D-Lac]、丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase，ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase，AST)，觀察腌湯對肝衰竭大鼠腸道屏障功能及肝功能有無保護作用。

1材料與方法

1.1材料無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級雄性SD大鼠50只，體質量為220～250 g；動物來源：貴州醫(yī)科大學實驗動物中心；清潔級動物房，動物房使用許可證號：SYXK(黔)2002-0001；SPF級鼠飼料，飼料生產許可證號：SCXK(渝)2007-0006。雙歧桿菌三聯(lián)活菌腸溶膠囊(商品名：貝飛達，210 mg/粒；晉城海斯制藥；批準文號：國藥準字S19993065)。貴州苗族腌湯，取自貴州省黔東南苗族侗族自治州農戶家，通過細菌培養(yǎng)活菌計數(shù)，測得其總菌數(shù)為2.16×106cfu/mL,乳酸菌活菌數(shù)為1.68×106cfu/mL。TAA購自成都市科龍化工試劑廠。大鼠DAO試劑盒、D-Lac ELISA試劑盒購自上海新睿生物科技有限公司，大鼠ETX酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自上海生物化學研究所。

1.2方法

1.2.1分組、給藥及模型建立將50只雄性SD大鼠分成正常對照組(A組)、急性肝衰竭模型組(B組)、雙歧桿菌三聯(lián)活菌組(C組)、腌湯高劑量組(D組)、腌湯低劑量組(E組)，每組10只。適應性喂養(yǎng)3 d后，C組、D組、E組分別予雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊(生理鹽水配制，6 mL/只，10.5 mg/mL，每日1次)、腌湯高劑量(腌湯6 mL/只，每日1次)、腌湯低劑量[(腌湯1.5 mL+生理鹽水4.5 mL)/只，每日1次]灌胃，連續(xù)9 d；A組、B組則用同等容積的生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)9 d。參照Zimmermann等[6]的造模方法，于實驗第8天，除A組外，其他4組用TAA(生理鹽水配制)每次300 mg/kg皮下注射2次(0 h、24 h)造模，建立大鼠急性肝衰竭模型；A組用同等量的生理鹽水皮下注射。造模前各組大鼠禁食不禁水12 h，余時間大鼠均自由進食進水。并且通過預實驗、病理切片揭示此造模方法成功。

1.2.2標本收集于第2次注射TAA后28 h，用苯巴比妥鈉注射液50 mg/kg腹腔注射麻醉。ETX檢測標本：在無菌操作下，無熱原注射器抽取股動脈血1 mL注入無熱原抗凝管，2 000 r/min離心10 min后-80 ℃冰箱保存待測。DAO和D-Lac檢測標本：抽取股動脈血2 mL，2 000 r/min離心10 min后-80 ℃冰箱保存待測。上腹正中切口解剖大鼠，取一葉肝組織及距回盲部3 cm回腸組織5 cm分別放入10%甲醛溶液固定。處死實驗大鼠。

1.2.3檢測指標(1)ETX檢測：采用酶聯(lián)免疫法測定，本實驗中所有與血樣接觸的離心管、吸頭、稀釋用水等物品均予去熱原處理，嚴格按照試劑盒說明操作。(2)血清DAO及D-Lac：均通過分光光度法測血清DAO及D-Lac水平,嚴格按照試劑盒說明操作。(3)大鼠血清ALT及AST測定：采用Siemens Advia 1650全自動生化分析儀，由貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院生化科嚴格按試劑盒要求測定。(4)肝組織及腸組織病理學觀察：取10%甲醛溶液固定的肝組織及回腸組織，石蠟包埋、切片、蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下對其進行病理學形態(tài)觀察。

2結果

2.1大鼠一般情況觀察各組大鼠在收集標本處死前全部存活，無死亡。A組大鼠飲食、活動量均正常。B組和各干預組大鼠在TAA第1次注射后，多數(shù)出現(xiàn)毛蓬松，不光潔，飲食、活動量減少，精神萎靡、反應減退。第2次注射TAA后，上述癥狀進一步加重，多數(shù)大鼠出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、神志恍惚、嗜睡、對刺激反應差、黑便、尿黃等癥狀，部分大鼠出現(xiàn)口鼻、注射部位出血、昏睡表現(xiàn)。

表1　各組大鼠血清ETX、D-Lac、DAO檢測結果

*:P<0.01，與A組比較；△:P<0.01，與B組比較；▲:P<0.01，與C組比較；□：P<0.05，與D組比較；○：P<0.01，與D組比較。

表2　各組大鼠血清轉氨酶水平的比較±s)

*:P<0.01，與A組比較；△:P<0.01，與B組比較；▲:P<0.01，與C組比較；□：P<0.05，與D組比較；○：P<0.01，與D組比較。

2.2大鼠肝臟病理組織學變化A組：肝被膜正常，肝細胞未見變性及壞死，肝組織小葉結構完整、清晰，以中央靜脈為中心，肝細胞索呈放射狀整齊排列，肝門管區(qū)結構正常，無炎性細胞浸潤。B組：肝被膜輕度凹凸不平，肝細胞索排列紊亂，肝小葉結構破壞，肝細胞呈灶狀壞死及大片壞死，壞死區(qū)大量炎性細胞浸潤。各干預組與B組肝臟病理學損傷程度相當，無法區(qū)別比較，見圖1。

2.3大鼠回腸黏膜組織形態(tài)學變化A組可見回腸黏膜形態(tài)完整，絨毛結構清晰，排列整齊；B組回腸黏膜結構紊亂，絨毛稀疏，上皮細胞不同程度脫落、缺失、壞死，固有層明顯充血，大量炎性細胞浸潤；各干預組腸黏膜損傷較B組輕，上皮細胞壞死、缺失、脫落、炎癥細胞浸潤較B組輕，見圖2。

2.4大鼠血清ETX、D-Lac、DAO比較B組及各干預組大鼠血清ETX、D-Lac、DAO水平均明顯高于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與B組比較，各干預組大鼠ETX、D-LAC、DAO水平均不同程度降低，C組、D組差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01),E組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與C組比較，D組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，E組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與D組比較，E組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

2.5大鼠血清轉氨酶水平比較B組及各干預組大鼠血清ALT、AST水平均明顯高于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與B組比較，各干預組大鼠轉氨酶水平均不同程度降低，C組、D組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，E組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與C組比較，D組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，E組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與D組比較，E組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

圖1　各組大鼠肝臟組織學變化(HE×400)

圖2　各組大鼠腸組織學變化(HE×200)

3討論

肝損害實驗動物和臨床肝病患者均存在不同程度的IETM，以重型肝炎(肝衰竭)最為明顯，國內報道急性、慢性肝炎、重型肝炎與肝硬化的IETM發(fā)生率分別為75%、79%、93.3%和84.3%[2，7]。各種原發(fā)致病因素(如肝炎病毒、乙醇、藥物、毒物、脂肪堆積、自身免疫等)通過相應的特異性發(fā)病機制引起“原發(fā)性肝損傷”(第1次打擊)，在此基礎上發(fā)生IETM，后者進一步促進ETX的吸收，IETM通過Kupffer細胞-中性粒細胞-炎性介質引起“繼發(fā)性肝損傷”(第2次打擊)[2]。IETM的中心環(huán)節(jié)是肝病時腸屏障功能受損，大量細菌和ETX經由門靜脈和淋巴系統(tǒng)直接侵入體循環(huán)，若能有效控制或改善腸屏障功能受損，則可減輕IETM，從而減輕肝臟的二次打擊，有利于肝功能恢復。

健康人的腸道屏障主要包括機械屏障、化學屏障、生物屏障和免疫屏障4部分[8]；任何一部分受損，均可導致腸道通透性增加，給IETM提供通道。腸道內微生物菌群構成一個對抗外來病原體的保護屏障——生物屏障，當這個微生態(tài)菌群的數(shù)量、穩(wěn)定性遭到破壞后，腸道定植抵抗力隨即降低，可導致腸道中潛在病原微生物(機會致病菌、條件致病菌)和過路菌的定植和入侵。

腸道細菌和ETX移位的發(fā)生可能與4個因素有關：(1)腸黏膜機械屏障受損，通透性增加；(2)腸道中固有菌群比例失調，生物屏障遭到破壞，且有侵襲性機會性致病菌過度生長；(3)機體全身和局部免疫功能下降；(4)腸黏膜受損導致消化液分泌減少，黏液分泌異常，化學屏障受損。因此，針對上述4個環(huán)節(jié)采取針對性措施，對防治腸道細菌及ETX移位可能有幫助。一般情況下，腸道菌群對其宿主的作用，以及腸道菌群彼此之間的相互作用均有著重要的生物學意義，宿主的許多生理功能、免疫功能的完善，以及生長、發(fā)育，都有賴于腸道菌群的輔助，腸道菌群之間的平衡是建立在相互拮抗又相互協(xié)同的基礎上的。腸道膜菌群與腸黏膜通過黏附結合形成的生物屏障，可使機體免受多種致病菌的侵襲。補充外源性益生菌增加腸道益生菌數(shù)量，可增強腸道黏膜的生物屏障功能。

DAO是人類和哺乳動物小腸黏膜上層絨毛中具有高度活性的細胞內酶[9]，在組胺和多種多胺代謝中起作用，是腸黏膜成熟和完整性的標志，其活性能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度[10]。 D-Lac是細菌代謝和裂解的產物，腸道多種細菌均可產生,在正常情況下，極少存在于血液中，當腸黏膜通透性異常升高時，腸道細菌產生的大量D-Lac透過腸黏膜進入循環(huán)，肝臟不能代謝D-Lac，檢測其外周血水平即可反映腸黏膜通透性變化和損害程度[11-12]。DAO和D-Lac是反映腸道屏障功能的敏感指標。

近年來，微生態(tài)制劑在治療腸道屏障功能障礙方面表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢，該類藥物主要通過有效調整腸道菌群失調，抑制G-桿菌過度繁殖，恢復腸道微生態(tài)環(huán)境，促進腸黏膜生長，調節(jié)腸道免疫，從而明顯降低血清ETX水平。由于微生態(tài)制劑能促進有益菌的生長，抑制腐敗菌的繁殖，降低腸道pH，促進氨從腸道中排除，降低血氨的量，對肝衰竭患者肝性腦病的發(fā)生亦有一定的防治作用[13-14]。本研究選用的雙歧桿菌三聯(lián)活菌，屬于微生態(tài)制劑中的益生菌，是雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、腸球菌三聯(lián)活菌制劑，多項研究證實能明顯改善肝衰竭患者IETM[15-16]，本研究結果同相關文獻報道。貴州苗族腌湯是貴州黔東南苗族采用傳統(tǒng)方式制作的一種富有地方風味和民族特色的原生態(tài)膳食用湯，歷史悠久。腌，貴州黃平縣方言讀為ǎn。腌湯因其腌制的方法特殊，腌制時間較長(有些家庭的腌湯長達百年之久)，含有豐富的微生物菌群，其亞硝酸鹽含量(5.577 mg/kg)也遠低于一般泡菜的國家衛(wèi)生標準(20 mg/kg)。有學者對貴州苗族腌湯中的微生物區(qū)系研究，發(fā)現(xiàn)其微生物菌群以乳酸菌含量最高，且多數(shù)乳酸菌能產抑制大腸桿菌等病原菌的物質如乳酸菌素。有研究對自然發(fā)酵的腌湯理化指標和微生物活菌數(shù)測定結果顯示：發(fā)酵成熟的腌湯pH為3.2,總酸為1.0%,可溶性固形物含量為5%,總糖為2.6%,蛋白質為0.1%,總菌數(shù)為2.6×106cfu/mL,乳酸菌活菌數(shù)為2.0×106cfu/mL。

微生態(tài)制劑減少腸道ETX的移位，若聯(lián)合其他針對肝衰竭病因的治療(如乙型肝炎患者抗HBV治療、丙型肝炎患者抗HCV治療等)，能夠避免“二次打擊”和打斷肝-腸軸病理變化的惡性循環(huán)。臨床上，慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化患者發(fā)展為肝衰竭的過程多數(shù)是緩慢的、漸進的；肝硬化、慢性肝衰竭患者加重為慢加急性肝衰竭也是逐漸發(fā)展的，如何有效控制病情發(fā)展一直是臨床一大難題。臨床常用微生態(tài)制劑如雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊等屬于藥物，一般只有當患者病情重并發(fā)腹瀉、消化不良、腹膜炎、肝衰竭等情況方可使用，其主要治療現(xiàn)病，而慢性肝病患者的ETX移位和肝損傷持續(xù)存在，并且當感染已經出現(xiàn)時往往需要使用抗菌藥物，微生態(tài)制劑中的微生物也難免被殺死，微生態(tài)制劑的作用有限。所以如果找到一種食物——該食物有微生態(tài)藥物類似的前述減輕IETM作用，又簡單易得，價格便宜，口感佳，有開胃消食的作用，又避免藥物的不良反應和臨床用藥的尷尬，將是肝病患者的福音。

TAA皮下注射是一種經典的制作動物肝衰竭模型的方法[17]。本實驗采用TAA皮下注射造模，模型組肝組織病理結果示肝細胞索排列紊亂，肝小葉結構破壞，肝細胞呈灶狀壞死及大片壞死，壞死區(qū)大量炎性細胞浸潤，血清ETX水平明顯上升，提示造模成功。本研究顯示，雙歧桿菌三聯(lián)活菌及腌湯均可降低肝衰竭大鼠血清ETX、D-Lac、DAO活性，減輕腸組織病理學損傷，說明二者對肝衰竭大鼠腸屏障功能具有一定的保護作用。雙歧桿菌三聯(lián)活菌組及腌湯高劑量組在降低血清ETX、D-Lac、DAO活性上均與模型組差異有統(tǒng)計學意義，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示腌湯和藥用的微生態(tài)制劑一樣可通過減少ETX的生成或釋放，緩解IETM，從而對肝臟損傷起到一定的防治作用。然而腌湯低劑量組與模型組相比對降低大鼠血清ETX、D-Lac、DAO活性差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；腌湯低劑量組與腌湯高劑量組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示微生態(tài)制劑對腸黏膜屏障功能的保護在一定范圍與劑量呈正相關，腌湯低劑量組效果沒有腌湯高劑量組好。各干預組與模型組相比，肝臟病理學改變無明顯差異，本文認為原因為：一方面微生態(tài)制劑使用時間短，作用有限；另一方面，微生態(tài)制劑主要減輕IETM對肝臟的二次打擊，對原發(fā)性肝損傷無明顯作用，而短期內IETM對肝臟的二次打擊造成的肝損傷病理學改變有限,原發(fā)性肝損傷已經造成足夠嚴重的肝臟病理學改變。但雙歧桿菌三聯(lián)活菌組及腌湯高劑量組與模型組相比，AST、ALT差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明微生態(tài)制劑對肝功能有保護作用。

血清氨基轉移酶簡稱轉氨酶,是一組催化氨基酸與α-酮酸之間的氨基轉移反應的酶類，用于肝功能檢查主要是ALT和AST。ALT主要分布在肝臟，其次是骨骼肌、腎臟、心肌等組織中；AST主要分布在心肌，其次是肝臟、骨骼肌和腎臟等組織中。在肝細胞中，ALT主要存在于非線粒體中，而大約80%的AST存在于線粒體內。ALT與AST均為非特異性細胞內功能酶，正常時血清的含量很低，當肝細胞受損時，血清ALT與AST的酶活性升高，在中等度肝細胞損傷時，ALT漏出率遠大于AST，因此ALT測定反映肝細胞損傷的靈敏度較AST為高。但在嚴重肝細胞損傷時，線粒體膜亦損傷，可導致線粒體內AST的釋放，血清中AST/ALT比值升高。嚴重肝細胞損傷如肝衰竭時，可出現(xiàn)“酶膽分離”現(xiàn)象，即膽紅素升高，而轉氨酶反而降低，這是因為大量肝細胞壞死ALT、AST釋放完后沒有新的ALT、AST釋放，經過一定時間代謝后血漿將其之前釋放的清除，完全清除需要經過一定半衰期(一般為5個半衰期)。ALT與AST的血漿半衰期不同文獻報道結果不同，戚仁鐸[18]報道ALT與AST的血漿半衰期分別為151.2 h和48 h,萬學紅等[19]報道分別為47 h和17 h，陸張兵[20]報道為75.8 h和57.6 h。本研究在第1次給予TAA后52 h、第2次給予TAA后28 h采集標本檢測，按報道的ALT最短半衰期(47 h)只經過1個半衰期，AST最短半衰期(17 h)只經過3個半衰期，均未達到一般藥物、毒物經過5個半衰期清除的常規(guī)時間，且本研究大鼠轉氨酶的對比研究均是在同時制作模型、同時采集標本等相同條件下進行，只要轉氨酶還未完全恢復，轉氨酶半衰期對觀察對比無影響。本研究顯示，雙歧桿菌三聯(lián)活菌及腌湯均可降低肝衰竭大鼠血清ALT、AST活性，表明二者對肝衰竭大鼠肝功能具有一定的保護作用。雙歧桿菌三聯(lián)活菌組及腌湯高劑量組在降低血清ALT、AST活性上均與模型組差異有統(tǒng)計學意義，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示腌湯和藥用的微生態(tài)制劑一樣可通過減少ETX的生成或釋放，緩解IETM，從而對肝臟損傷起到一定的防治作用。然而腌湯低劑量組與模型組相比對降低大鼠血清ALT、AST活性差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；腌湯低劑量組與腌湯高劑量組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示微生態(tài)制劑對肝功能的保護在一定范圍與劑量呈正相關，腌湯低劑量組效果沒有腌湯高劑量組好，與腌湯對腸黏膜屏障功能的保護作用結果相似。

臨床肝病治療中發(fā)現(xiàn)，采用特異性治療方法針對病因治療(如乙型肝炎患者抗乙型肝炎病毒，酒精性肝病患者戒酒、低脂飲食及控制體質量等)，對于肝炎肝損傷、肝纖維化、脂肪肝等一般肝病患者可以起到良好療效，而對于肝硬化、肝衰竭患者，目前沒有特效治療方法，病死率高。本研究課題研究的苗族腌湯因其特殊的腌臭之味及富含以乳酸菌為主的微生態(tài)菌群[18-19]，能刺激患者恢復食欲和幫助消化。本研究證實，腌湯可以保護急性肝衰竭大鼠腸道屏障功能及肝功能，而對于慢性肝病患者長期食用是否可減輕IETM的發(fā)生，從而延緩或減輕肝衰竭發(fā)生，目前尚無人體試驗數(shù)據(jù)，而且該食物中尚含有少量亞硝酸鹽等有害成分，長期食用毒副作用問題尚需探討，其確切療效有待進一步研究。

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The ǎn soup of Miao nationality in Guizhou province improving intestinal barrier function in the acute liver failure rats*

Jiang Xinghua,Wu Yayun△,Cheng Mingliang

(Department of Infectious Diseases,Affiliated Hospital of Guizhou Medical University,Guiyang,Guizhou 550004,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the protective effect of ǎn soup of Miao nationality on the intestinal barrier function in rats with acute liver failure,in order to provide effective diet measures for hepatic failure patients.MethodsA total of 50 male SD rats were randomly assigned to five groups:control group(group A),acute liver failure model group(group B),Bifidobacterium triple probiotics group(group C),high-dose ǎn soup group(group D) and low-dose ǎn soup group(E),10 cases in each group.The last four groups were subjected to the acute liver failure model by hypodermic injection with thioacetamide twice.In addition,the last three groups were respectively intragastrically perfused with Bifidobacterium triple probiotics,6 mL of ǎn soup and 1.5 mL of ǎn soup before and during building the acute liver failure model.28 hours after the second injection,femoral arterial blood to was drew to test serum endotoxin(ETX),diamine oxidase(DAO),D(-)-lactate(D-lac),alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase(AST).At the same time,hepatic tissue and ileal tissue within 3 cm away from the ileocecal region were collected to do pathological examination.ResultsPathological examination results showed that hepatic cord in hepar arranged mussily,hepatic lobules structure disordered,hepatocyte focal necrosis or with large necrotic areas in which a large number of inflammatory cell infiltration in the acute liver failure model group.The pathology damage of liver in the other groups was almost in the same extent.The ileum mucosa in the group A was morphologically intact with clear structure of villi and lined up,while that of group B was disorder with sparse villi,epithelial cells in different degree of loss,missing and necrosis,lamina propria obviously hyperemia and there were large amount of inflammatory cellular infiltration.Intestinal mucosa injury in the other intervention groups was lighter than that in the group B.In particular,levels of serum ETX,D-Lac,DAO,ALT and AST in the group B and other intervention groups were significantly higher than that in the group A(P<0.01).Compared to the group B,levels of serum ETX,D-lac,DAO,ALT and AST in other intervention groups were decreased to various degrees,and there was significant difference between group B,group C and group D(P<0.01),and there was no significant difference between group B and group E (P>0.05).However,there was no significant difference between group C and group D (P>0.05),when obvious difference was observed between group C and group E(P<0.05).There was significant difference between group E and roup D (P<0.05).ConclusionResults demonstrated that ǎn soup protected intestinal barrier function of acute liver failure rats by reducing the production and release of serum endotoxin content in liver failure rats,lowering intestinal endotoxemia (IETM),which seems to prevent subsequent liver injury caused by IETM and have certain dietotherapy effect on liver failure.

[Key words]rats;ǎn soup;acute liver failure;intestinal barrier;intestinal endotoxemia

doi:·論著·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.003

* 基金項目：國家自然科學基金資助項目(81460642)。

作者簡介：蔣興華(1981-),主治醫(yī)師，碩士，主要從事肝纖維化研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail:gzwu56861@163.com。

[中圖分類號]R459.3

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)11-1448-05

(收稿日期：2015-11-08修回日期：2016-01-11)