易潔

(長江大學醫(yī)學院，湖北 荊州 434023)

湯紹遷

(長江大學第二臨床醫(yī)學院 荊州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 荊州 434020)

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自體DC-CIK細胞聯(lián)合TACE術(shù)治療中晚期原發(fā)性肝癌的療效觀察

易潔

(長江大學醫(yī)學院，湖北 荊州 434023)

湯紹遷

(長江大學第二臨床醫(yī)學院 荊州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 荊州 434020)

[摘要]目的：觀察自體DC-CIK細胞聯(lián)合TACE術(shù)治療中晚期原發(fā)性肝癌的臨床療效。方法：中晚期原發(fā)性肝癌患者62例隨機分為研究組和對照組，其中研究組行TACE+DC-CIK治療，對照組行TACE治療，比較兩組患者的近期療效、生活質(zhì)量、AFP、安全性和生存率。結(jié)果：研究組的近期療效、生活質(zhì)量、治療后AFP下降率、安全性及生存率方面均優(yōu)于對照組。結(jié)論：TACE術(shù)聯(lián)合自體DC-CIK治療中晚期原發(fā)性肝癌明顯提高近期療效，改善患者生活質(zhì)量，顯著降低AFP水平，無明顯不良反應(yīng)，可以在臨床上推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]原發(fā)性肝癌；樹突狀細胞；細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞；經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞術(shù)

原發(fā)性肝癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC)是起源于肝細胞的惡性腫瘤，是全球最常見的惡性腫瘤之一，具有發(fā)病隱匿、惡性程度高、易轉(zhuǎn)移、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差等特點。在我國病死率僅次于肺癌和胃癌，每年死于肝癌人數(shù)約占全球肝癌死亡總?cè)藬?shù)的42%～45%[1]，嚴重威脅人類生命健康。經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞術(shù)(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)是目前醫(yī)學界公認的治療不能手術(shù)切除的中晚期肝癌的首選方法[2]。近年來，樹突狀細胞-細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(dentritic cell-cytokine-induced killer cells, DC-CIK)生物免疫治療已成為較成熟的腫瘤新療法。樹突狀細胞(dentritic cell, DC)是目前已知的功能最強的抗原遞呈細胞(antigen presenting cell, APC)[3]。細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(cytokine-induced killer cell, CIK)是一種體外增殖能力強、殺瘤活性高的廣譜抗瘤免疫活性細胞[4]。本研究采用自體DC-CIK細胞聯(lián)合TACE術(shù)治療中晚期原發(fā)性肝癌，取得了較好的臨床療效?，F(xiàn)報道如下。

1對象與方法

1.1對象

選取2014年1月至2015年3月在荊州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科、腫瘤科及介入科行TACE術(shù)的中晚期原發(fā)性肝癌患者共62例，其中男性患者41例，女性患者21例。年齡35～81歲。向所有患者告知相關(guān)細則，經(jīng)患者同意、簽署知情同意書并報醫(yī)院倫理委員會批準。納入標準：①有病理學或組織穿刺細胞學證實；②有相應(yīng)的影像學資料；③病灶達不到手術(shù)切除標準；④預(yù)計患者生存期>3個月。62例患者隨機分為兩組，研究組(TACE+DC-CIK治療)30例，其中男18例，女12例。平均年齡(58.13±11.53)歲。病理類型：巨塊型20例，結(jié)節(jié)型10例。BCLC分期：B期21例，C期9例。AFP陽性者16例，AFP陰性者14例。Child-Pugh分級：A級21例，B級9例。對照組(TACE治療)32例，其中男23例，女9例。平均年齡(55.56±9.46)歲。病理類型：巨塊型23例，結(jié)節(jié)型9例。BCLC分期：B期22例，C期10例。AFP陽性者17例，AFP陰性者15例。Child-Pugh分級：A級25例，B級7例。兩組患者臨床特點比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2DC-CIK細胞的分離、培養(yǎng)與輸注

采集研究組患者靜脈血約70～80mL，應(yīng)用血細胞分離機分離出單個核細胞，用PBS緩沖液懸浮細胞，離心、去上清，加入BPS混勻，離心(1500轉(zhuǎn)/min，5min)，反復(fù)洗滌3次，除去血小板和分離介質(zhì)；將調(diào)整好的細胞液轉(zhuǎn)至培養(yǎng)瓶后立即放至37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h，培養(yǎng)2h后可見兩種不同方式生長的細胞：貼壁生長和懸浮生長。貼壁生長的是DC細胞，懸浮生長的是CIK細胞。將懸浮細胞收集至新的培養(yǎng)瓶，剩下的就是DC細胞；DC細胞培養(yǎng)瓶中加入10%自體血漿、重組人白介素-4(interleukin4, IL-4)400U/mL、重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)800U/mL在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第3、5天更換補充淋巴細胞培養(yǎng)基，第4天加入特異性腫瘤抗原負載，第5天加入腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)500U/mL，誘導(dǎo)DC成熟，第7天收集DC細胞(細胞數(shù)目須達1.0×109個，細胞活性達90%以上)；CIK細胞培養(yǎng)瓶中補加淋巴細胞培養(yǎng)基、10%自體血漿，調(diào)整細胞濃度至(1.5～2.0)×106個/mL后加入重組人干擾素γ(interferon gamma, IFN-γ)1000U/mL，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后加入白細胞介素-1α(interleukin- 1α, IL-1α)100U/mL、白細胞介素-2(interleukin-2, IL-2)1000U/mL、抗人CD3單抗50ng/mL繼續(xù)培養(yǎng)，第3、5天更換補充淋巴細胞培養(yǎng)基并加入10%自體血漿(第7天CIK細胞數(shù)目須達1.0×109個，細胞活性達90%以上)；第7天將收集的DC細胞加入到CIK細胞培養(yǎng)液中按1∶10的比例共培養(yǎng)，共培養(yǎng)7d左右，至細胞總數(shù)目達1.0×1010個，細胞活性達90%以上時，培育成熟，收集培養(yǎng)12～14d后成熟的DC-CIK細胞。回輸前48h取樣進行無菌檢測(細菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素等)，檢測合格后，離心、洗滌收集的DC-CIK細胞，并加入5%人血白蛋白，充分混勻，分3次靜脈回輸，為保持細胞活性每次回輸在1h內(nèi)滴完。

1.3治療方案

所有入組病例均接受TACE治療，對照組術(shù)中化療藥物主要為順鉑、奧沙利鉑注射液、5-氟尿嘧啶、表阿霉素、絲裂霉素等，栓塞劑為超液態(tài)碘化油，碘化油和化療藥物混合成乳劑一次給藥行腫瘤血管栓塞，最后根據(jù)腫瘤栓塞情況給予適量明膠海綿栓塞。2次TACE治療間隔時間為1個月。判定完全緩解或部分緩解后1周內(nèi)開始行DC-CIK治療的30例患者為研究組，根據(jù)病人情況，臨床癥狀控制后治療間隔時間可改為2個月，術(shù)后常規(guī)護肝、抗病毒、中藥抗腫瘤、對癥支持治療等；研究組TACE治療同對照組，并在兩次介入治療間歇期行DC-CIK細胞治療1次，一般1～2個月1次，1個療程分3次靜脈回輸(第12、14、16天)?；剌斍?0～30min常規(guī)給予25mg鹽酸異丙嗪肌肉注射，并注意有無絮狀物，上下輕輕倒轉(zhuǎn)3次，以使DC-CIK細胞充分混勻。回輸過程中密切觀察患者生命體征，回輸結(jié)束后用100mL生理鹽水沖管，保證細胞液足量輸入。所有病例均進行隨訪，隨訪時間6～12個月。

1.4療效評定標準

①近期療效：按WHO實體瘤的近期療效標準，分完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)、進展(PD)4級，總有效率(ORR)以(CR+PR)計算，疾病控制率(DCR)以(CR+PR+SD)計算。②生活質(zhì)量：根據(jù)KPS評分標準評價治療前后患者體力狀態(tài)變化。治療后較治療前提高10分以上者為改善，下降10分以上者為惡化，提高或下降10分(含)內(nèi)為穩(wěn)定，有效率=[(改善病例+穩(wěn)定病例)/總病例]×100%。③AFP水平：在治療前1周及治療后4周分別抽取患者外周血，行AFP檢測，統(tǒng)計經(jīng)治療后AFP值較前下降幅度超過50%或在50%以內(nèi)的患者，對比兩組患者治療前后AFP值下降情況。④不良反應(yīng)：密切觀察DC-CIK細胞回輸過程中及回輸后2～3h內(nèi)患者是否出現(xiàn)過敏、寒戰(zhàn)、發(fā)熱、出皮疹等。⑤生存率：62例患者經(jīng)治療后均隨訪12個月，觀察6個月及12個月生存率。

1.5統(tǒng)計學分析

采用SPSS16.0軟件統(tǒng)計分析處理，計數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1近期療效比較

半年后，研究組、對照組的ORR分別為60.0%(17/30)、28.1%(9/32)，研究組ORR明顯高于對照組(χ2=5.180，P=0.022)；研究組、對照組的DCR分別為90.0%(27/30)、71.9%(23/32)，經(jīng)比較兩組間無明顯差異(χ2=3.259，P=0.071)。見表1。

表1　兩組近期療效的比較

2.2治療前后生活質(zhì)量比較

研究組KPS評分的有效率為93.3%，對照組為68.8%，兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2　兩組治療前后KPS評分的比較

2.3治療前后外周血中AFP變化

治療前研究組、對照組AFP陽性率分別為53.3%(16/30)、53.1%(17/32)，治療前兩組間無明顯差異(P>0.05)；治療后研究組、對照組AFP均下降，下降率分別為87.5%(14/16)、52.9%(9/17)，研究組較對照組下降率高(P<0.05)。見表3。

表3　兩組治療前后AFP變化

2.4DC-CIK細胞治療的安全性分析

30例患者經(jīng)過DC-CIK細胞治療后，3例患者出現(xiàn)一過性的發(fā)熱(T<38.5℃)，均自行退熱，無寒戰(zhàn)、高熱及皮疹等。所有患者細胞治療前1月及結(jié)束細胞治療后1月監(jiān)測血象、生化等檢查，均未出現(xiàn)骨髓抑制及肝腎功能的損害。

2.5生存率的隨訪情況

62例患者經(jīng)治療后均隨訪12個月。研究組6個月、12個月生存率分別為96.7%(29/30)、80.0%(24/30)，對照組6個月、12個月生存率分別為81.2%(26/32)、56.2%(18/32)。兩組6個月生存率比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.674，P=0.055)；兩組12個月生存率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=3.997，P=0.046)。

3討論

PHC由于起病隱匿、臨床表現(xiàn)缺乏特異性、惡性程度高、易發(fā)生轉(zhuǎn)移等原因，患者發(fā)現(xiàn)時大多已屬中晚期，失去了手術(shù)根治或肝移植的機會，需要非手術(shù)治療。TACE因能明顯增加局部藥物濃度、全身副反應(yīng)小、可以數(shù)種藥物聯(lián)合應(yīng)用等優(yōu)點，目前廣泛用于治療不能手術(shù)切除的中晚期肝癌。但因其還存在有許多的缺點及難點而影響療效，它不能使癌變的組織完全壞死，腫瘤周圍側(cè)支血供建立較快，殘存癌細胞會具有或者產(chǎn)生更強的增殖及侵襲能力[5]。同時，有研究表明，肝癌患者在免疫應(yīng)答和啟動免疫應(yīng)答方面都存在著缺陷[6]，TACE術(shù)會使患者的免疫功能進一步下降，這些均會加重肝癌局部復(fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移。

近年來，細胞免疫治療成為繼手術(shù)、放療、化療、分子靶向治療等之后的一種新興的治療方法，在腫瘤治療中發(fā)揮著越來越重要的作用。DC細胞可有效地誘導(dǎo)靜止T細胞增殖和應(yīng)答，促進細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)和輔助性T淋巴細胞的生成，啟動并參與免疫應(yīng)答[7]。同時還是CD8(+)CTL和CD4(+)T細胞介導(dǎo)的原發(fā)性和繼發(fā)性免疫反應(yīng)的最強的激發(fā)者，可有效地抑制腫瘤逃逸[8]。CIK細胞則是一群主要由CD3(+)CD56(+)、CD3(+)CD56(-)、CD3(-)CD56(+)細胞組成的異質(zhì)細胞，其中主要以CD3(+)CD56(+)細胞發(fā)揮非特異性的抗腫瘤效應(yīng)。兼有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤的特點[9]，是一種體外增殖能力強、殺瘤活性高的廣譜抗瘤免疫活性細胞[4]。在殺傷腫瘤細胞、調(diào)節(jié)機體免疫功能方面有一定的效果，能一定程度上降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。研究表明將具有強大腫瘤抗原遞呈能力的DC細胞和具有高效殺傷活性的CIK細胞聯(lián)合應(yīng)用治療惡性腫瘤，可發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。

本研究發(fā)現(xiàn)TACE聯(lián)合DC-CIK細胞治療可明顯提高近期療效，改善患者生活質(zhì)量，大部分患者自覺癥狀改善，食欲增加，睡眠質(zhì)量改善，體力有所增加，并顯著降低AFP水平，延長患者生存期。同時DC-CIK細胞治療安全性好，無明顯不良反應(yīng)。研究組30例患者經(jīng)過DC-CIK細胞治療后僅3例患者出現(xiàn)一過性的發(fā)熱(T<38.5℃)，均自行退熱，考慮為栓塞后腫瘤壞死吸收熱。這些結(jié)果與劉麗[10]、程小珍[11]、郭偉偉等[12]的研究結(jié)果相一致?？梢灶A(yù)見，隨著DC-CIK細胞治療技術(shù)的不斷改進和完善，有望成為今后中晚期原發(fā)性肝癌的首選治療方法。

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[編輯]何勇

[收稿日期]2016-02-03

[作者簡介]易潔(1988-)，女，碩士生，主要從事消化道腫瘤綜合治療研究工作；通信作者：湯紹遷，jz-tsq@163.com。

[中圖分類號]R735.7

[文獻標志碼]A

[文章編號]1673-1409(2016)18-0008-04

[引著格式]易潔，湯紹遷.自體DC-CIK細胞聯(lián)合TACE術(shù)治療中晚期原發(fā)性肝癌的療效觀察[J].長江大學學報(自科版) ,2016,13(18):8～11.