馬小華 石國民 喻 容 石 燕 向延根

292株血培養(yǎng)陽性病原菌分布及耐藥性分析

馬小華 石國民 喻 容 石 燕 向延根

目的 分析血培養(yǎng)陽性病原菌分布及耐藥性特點(diǎn)，為指導(dǎo)臨床制定治療方案提供依據(jù)。方法 收集血培養(yǎng)采用BACTEC 9120全自動血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)，陽性者用MicroScan walkAway 96 SI進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏。結(jié)果 所有血培養(yǎng)共檢出38種292株病原菌，革蘭氏陰性菌占141株（48.0%），革蘭氏陽性菌占142株(49.0%)，真菌9株（3.0%）。革蘭氏陰性菌中排行前兩位的是大腸埃希菌(44.7%)、肺炎克雷伯菌(22.0%)。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶檢出率分別為54.0%和25.8%，對氨芐西林和哌拉西林的耐藥性分別為92.1%、96.8%和87.3%、71.0%。革蘭氏陽性菌中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRCNS)和耐甲氧西林金葡萄球菌(MRSA)分別占48.6%和19.7%，兩種細(xì)菌對青霉素耐藥率達(dá)92.0%以上，尚未發(fā)現(xiàn)對利奈唑胺、萬古霉素和替考拉寧耐藥現(xiàn)象。結(jié)論 本次分離的細(xì)菌對藥物均有不同程度的耐藥，臨床醫(yī)師要根據(jù)不同細(xì)菌合理選擇抗菌藥物。

血培養(yǎng)；病原菌；抗菌藥物

Blood culture; Pathogens; Antimicrobial susceptibility

血流感染（BSIs）是疾病的發(fā)生率和病死率的主要原因之一。據(jù)粗略估算美國每年大約有250 000患者發(fā)生血流感染，血流感染致死率在美國排第10位[1]。近年來，隨著各種侵入性診療操作的出現(xiàn)[2]，抗菌藥物及激素類藥物的廣泛運(yùn)用，血流感染及細(xì)菌耐藥性亦隨之增加[3-4]。及時(shí)了解血流感染患者病原微生物分布及耐藥情況，為臨床提供合理的、有針對性的抗菌藥物具有重要的指導(dǎo)意義。本研究就2014年10月～2015年10月全院血培養(yǎng)陽性樣本進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，以期了解本院病原菌種類分布及耐藥狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年10月～2015年10月就診于本院急診及住院懷疑血流感染的患者，剔除同一患者相同部位的相同菌株。

1.2 儀器與試劑 BACTEC 9120全自動血培養(yǎng)儀及配套血培養(yǎng)購于美國BD公司，MicroScan walkAway 96 SI自動鑒定系統(tǒng)及配套試劑和藥敏購于德國西門子公司。培養(yǎng)箱購于上海力申公司；生物安全柜購于上海瑞仰公司；抗菌藥敏紙片有英國OXOID公司提供。血瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、顯色板購于凱林公司；MH藥敏培養(yǎng)基購于博賽生物技術(shù)有限公司。

1.3 質(zhì)控菌株 大腸埃希菌（ATCC 25922）、肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）、銅綠假單胞菌（ATCC 27853）、金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、糞腸球菌（ATCC 29212）均由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)本采集 患者寒戰(zhàn)發(fā)生時(shí)，抗生素治療前或者停藥后下次抗生素使用前采集血液注入血培養(yǎng)瓶中（兒童1～3 mL，成人8～10 mL），及時(shí)送檢，將血培養(yǎng)瓶放入BACTEC 9120全自動血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)5 d，若儀器陽性報(bào)警時(shí)，及時(shí)轉(zhuǎn)種血瓊脂平板，若培養(yǎng)到期陰性報(bào)警，則取出轉(zhuǎn)血瓊脂平板，次日不長均則報(bào)陰性。

1.4.2 菌種鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn) 將培養(yǎng)陽性的菌株采用MicroScan walkAway 96 SI鑒定系統(tǒng)進(jìn)行菌株及藥敏鑒定，同時(shí)采用KB瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果參照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）2014年標(biāo)準(zhǔn)判讀。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用WHONET 5.4軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 血培養(yǎng)主要菌株分布 臨床分離得到的38種292株細(xì)菌，其中革蘭氏陰性菌141株，占48.0%，革蘭氏陽性菌142株，占49.0%，真菌9株，占3.0%。革蘭陰性菌株中，排行前兩位的分別為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌，分別占革蘭氏陰性菌的44.7%和22.0%；革蘭陽性菌中，MRCNS和MRSA分別占陽性菌的48.6%和19.7%。本次分離出的腸球菌屬占8.5%。見表1。

2.2 血培養(yǎng)陽性病原菌所在科室分布 本院血培養(yǎng)陽性患者所在科室主要集中在結(jié)核科、腎內(nèi)科、小兒科、新生兒科和消化科，分別占10.6%、9.9%、8.9%、6.9%和5.1%。見表2。

表1 血培養(yǎng)陽性主要病原菌分布

表2 血培養(yǎng)陽性菌科室分布

2.3 血培養(yǎng)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 常見格蘭陰性桿菌對抗生素耐藥情況及產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）檢出 肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌對氨芐西林的耐藥率達(dá)到92.0%以上，對哌拉西林的耐藥率也達(dá)到71.0%以上，對亞胺培南的敏感性均在93.0%以上，對含酶的抑制劑如哌拉西林/他唑巴坦和頭孢哌酮/舒巴坦有很好的抑菌效果，敏感性均在87.0%以上。見表3 A。產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌34株，陽性率為54%。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌8株，陽性率為25.8%。見表3 B。

表3 A血培養(yǎng)陰性桿菌對抗菌藥物耐藥[n(%)]

表3 B大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌ESBLs檢出

2.3.2 常見格蘭陽性菌對抗生素耐藥情況 血培養(yǎng)主要革蘭陽性球菌藥敏結(jié)果見表4，由表上可見，凝固酶陰性葡萄球菌中,耐甲氧西林占82.6%，對氨芐西林/舒巴坦、紅霉素和青霉素耐藥率為81.0%、82.7%和92.8%。金黃色葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌為32.1%，對青霉素耐藥率為96.4%。兩者對利奈唑胺、萬古霉素和替考拉寧耐藥率均為0%。見表4。

表4 血培養(yǎng)陽性球菌對抗菌藥物耐藥情況[n(%)]

3 討論

血流感染是患者住院期間發(fā)病和死亡的重要因素[5-7]，血培養(yǎng)陽性有助于血流感染的診斷，但是并非所有的血培養(yǎng)陽性均可診斷血流感染，必須結(jié)合臨床癥狀加以考慮。至今為止，有關(guān)血流感染報(bào)道的相關(guān)文獻(xiàn)很多，這也反映了各個(gè)醫(yī)院對血培養(yǎng)陽性的重視及謹(jǐn)慎。本院作為重組后的一家大型的三甲醫(yī)院，其科室構(gòu)成與其他醫(yī)院可能不盡相同，有必要對全院各個(gè)科室血培養(yǎng)陽性樣本做一次調(diào)查。本研究中，回顧了2014年10月～2015年10月這1年中所有血培養(yǎng)陽性細(xì)菌的分布及耐藥性分析，為了解本院目前細(xì)菌分布及耐藥監(jiān)測提供基數(shù)資料。

本組資料顯示，本次血培養(yǎng)陽性分離得到38種292株細(xì)菌，革蘭陰性菌分離率48.0%，革蘭陽性菌49.0%，兩者趨近平衡，與某些文獻(xiàn)報(bào)道不盡相同[8-10]。王佩芳等人報(bào)道2007～2009年血培養(yǎng)陽性菌占39.02%，而格蘭陰性菌占60.98%[11]，而謝強(qiáng)等人報(bào)道2013年血培養(yǎng)中格蘭陽性菌占63.33%，格蘭陰性菌占35.00%，說明近年來格蘭陽性菌感染率在各大醫(yī)院均有上升趨勢，某些地方甚至超過了格蘭陰性菌[12]。此外，培養(yǎng)陽性菌對應(yīng)科室主要分布在結(jié)核科、腎內(nèi)科、小兒科，這與這些科室相對患者量較多，標(biāo)本送檢量大有關(guān)。

本次檢測出的產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌陽性率為54%，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌陽性率為25.8%，而陳明慧等人分離出的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs檢出率分別55.0%和37.3%[9]，說明產(chǎn)ESBLs細(xì)菌耐藥形式嚴(yán)峻。一般而言，實(shí)驗(yàn)室中只要檢測出產(chǎn)ESBLs細(xì)菌，則無論體內(nèi)外藥物敏感試驗(yàn)如何，均可認(rèn)為對1、2、3代頭孢、青霉素類和單環(huán)菌素耐藥。本次分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對青霉素類耐藥率較高，而對碳青酶烯類藥物、阿米卡星等抗菌效果較好，可用于治療產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的首選藥物。此外，本次分離的鮑曼不動桿菌對所統(tǒng)計(jì)的藥物與大腸埃希菌耐藥率相當(dāng)（未列出），然而本次分離的鮑曼不動桿菌只有9株，需要更多株數(shù)進(jìn)行分析。本次分離出的MRCNS和MRSA占葡萄球菌的48.6%和19.7%。一般而言，分離出耐甲氧西林的葡萄球菌，其對多種藥物如頭孢西丁、亞胺培南和頭孢孟多等耐藥。此外，本次分離出的MRCNS和MRSA均未發(fā)現(xiàn)對利奈唑胺、萬古霉素和替考拉寧耐藥，可以考慮作為首選藥。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.15.003

湖南 410004 長沙市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科（馬小華 石國民 喻容 石燕 向延根）

注： R：耐藥；I：中介；S：敏感

[Abtract] Objective To investigate the distribution and drug-resistance characteristics of pathogens in blood culture isolates in order to provide the basis for guiding clinical treatment plan. Methods Pathogens collected were cultured with BACTEC 9120 automated blood culture system and bacterial confirmation and antibacterial susceptibility tests were conducted with MicroScan walkAway 96 SI. Results A total of 292 strains were isolated from blood specimens. Gram negative bacilli, gram positive cocci and fungi accounted for 48%, 49%, and 3%, respectively. The most common gram negative bacilli were Escherichia coli (44.7%), Klebsiella pneumoniae (22.0%), ESBLs producing strains of Escherichia coli and Klebsiella peumoniae was 54.0% and 25.8%, respectively. The detected rates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains resistant to Ampicillin and Piperacillin were 92.1%, 96.8% and 87.3%, 71.0%, respectively. The most frequent isolates of gram positive cocci were methicillinresistant coagulase-negative Staphylococcus (MRCNS) (48.6%) and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) (19.7%). The both isolates showed high resistant rates to Penicillin (over 92.0%). No strains were found resistant to linezolid, vancomycin, or teicoplanin. Conclusion Different bacterial isolates shows different levels of drug resistance in these data, clinicians should choose right antimicrobial gents according antimicrobial susceptibility of different bacterium.