謝 婧 焉彩霞 劉志敏 龍千祥

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者宮頸分泌物中生殖支原體與解脲脲原體的檢測及臨床意義

謝 婧 焉彩霞 劉志敏 龍千祥

目的 觀察復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者宮頸分泌物中生殖支原體（Mg）和解脲脲原體(Uu)的檢出情況，從而分析其在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（RSA）中的作用。方法 回顧性分析48例自然流產(chǎn)患者的宮頸分泌物標本，采用PCR檢測宮頸分泌物中Mg和Uu情況，并納入同期50例自愿人工流產(chǎn)者的臨床標本作為對照。結(jié)果 48例RSA患者中Mg和Uu DNA檢出率分別為18.8%（9例）和29.2%（14例），其中Mg合并Uu感染者6例，構(gòu)成比為12.5%。對照組其Mg檢出率為4%（2例），Uu檢出率為22%（11例），Mg合并Uu感染1例，感染率2%。2組Mg陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.347，P＜0.05），而Uu檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.6619，P＞0.05）。結(jié)論 Mg感染和RSA密切相關(guān)，而單純Uu感染可能并不是導(dǎo)致RSA發(fā)生的因素。

生殖支原體；解脲脲原體；復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)。其病因目前尚未完全明了，生殖系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)異常、遺傳免疫因素以及微生物感染是RSA發(fā)生的重要原因[1-2]。研究表明，生殖系統(tǒng)沙眼衣原體、弓形蟲、支原體感染可能是RSA發(fā)生的重要因素[3]，但隨著研究的深入后發(fā)現(xiàn)，以往認為能引起人類致病的某些支原體如解脲脲原體、微小脲原體、發(fā)酵支原體等可能是人體的正常菌群或機會致病菌，因此其在RSA中的確切作用存在爭議。本研究旨在觀察RSA患者宮頸分泌物中生殖支原體（mycoplasma genitalium，Mg）和解脲支原體（ureaplasma urealyticum，Uu）的檢出情況，從而進一步分析其在RSA中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年10月～2014年7月衡陽市中心醫(yī)院產(chǎn)科收集的48例自然流產(chǎn)患者為研究對象?；颊吣挲g19～36歲，平均（24.6±5.5)歲，孕周7～15周。自然流產(chǎn)3～5次。所有納入患者均無生殖器官畸形、惡性腫瘤、遺傳性疾病、代謝與免疫性疾病。同時選取同期前來本院行人工流產(chǎn)的正常孕婦50例作為對照組。這些孕婦既往無自然流產(chǎn)史，年齡22～38歲，平均（25.5±4.5）歲，孕周6～11周。人流1～4次。2組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 采用PCR法檢測宮頸分泌物中Mg和Uu DNA。宮頸標本的獲取選擇在流產(chǎn)前1 W（自然流產(chǎn)）或流產(chǎn)后1個月（人工流產(chǎn)）內(nèi)進行。外陰采用常規(guī)方法消毒后，用無菌棉簽擦拭宮頸口分泌物，隨后用專用拭子插入宮頸口內(nèi)1～2 cm并停留20～25 s后，旋轉(zhuǎn)2～3圈后取出，置于含有1.5 mL生理鹽水的無菌試管內(nèi)，隨后按照大連寶生物有限公司提供的PCR反應(yīng)試劑盒檢測Mg和Uu DNA。本研究所采用的引物如下。Mg（MgPa）：5’-AGTTGATGAAACCTTA ACCCCTTGG-3’，5’-CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC-3’，產(chǎn)物長度為282bp；U u（尿素酶基因），5’-A C G A C G T C C A T A A GCAACT-3’，5’-CAATCTGCTCGTGAAGTATTAC-3’，產(chǎn)物為429 bp。DNA擴增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外檢測儀上觀察結(jié)果，若在Marker對應(yīng)的位置出現(xiàn)條帶，則判定為結(jié)果陽性。

同時，獲取刮宮后的絨毛及蛻膜組織行病理學(xué)檢查，觀察比較2組絨毛膜炎情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用（n）表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RSA患者宮頸分泌物中Mg和Uu檢出情況 RSA組患者中共檢測出Mg陽性9例，Uu陽性14例，分別構(gòu)成比為總數(shù)的18.8%和29.2%。對照組中Mg陽性2例，Uu陽性11例，分別構(gòu)成比為總例數(shù)的4%和22%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，2組Mg陽性率有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.347，P＜0.05），而2組Uu檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.6619，P＞0.05）。見表1。

表1 宮頸分泌物中Mg和Uu陽性例數(shù)（n）

2.2 2組患者絨毛膜炎癥與Uu感染情況比較 RSA組的14例Uu陽性標本中，9例病理學(xué)檢查絨毛膜炎陽性，34例標本Uu陰性標本中絨毛膜炎12例，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.387，P＞0.05）。而對照組11例Uu陽性標本中絨毛膜炎標本3例，29例Uu陰性標本中絨毛膜炎8例，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.043，P＞0.05），表明Uu與絨毛膜炎無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表2 2組分泌物中Uu陽性與絨毛膜炎癥關(guān)系（n）

3 討論

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)是指連續(xù)發(fā)生2次或2 次以上的自然流產(chǎn)。研究表明，病原微生物感染是導(dǎo)致RSA的重要因素，Uu屬支原體目脲原體屬，微生物是由Shepard于1954年首先從非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分離獲得。有研究表明，Uu為性傳播疾病的主要病原體之一，在男女泌尿生殖道有很高的攜帶率（60%～70%），主要通過性接觸和母嬰傳播。可引起NGU、前列腺炎、附睪炎、女性陰道炎、盆腔炎、宮頸炎、男女不孕、不育等泌尿生殖道感染。女性生殖道Uu感染可引起自發(fā)性流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等不良妊娠，同時可導(dǎo)致新生兒敗血癥、支氣管肺炎及腦膜炎等中樞神經(jīng)系統(tǒng)致死性的感染[4]。尤其是妊娠期孕婦由于體內(nèi)內(nèi)分泌改變，機體固有免疫功能有所降低，因此大大增加了Uu等菌群的感染幾率。但目前有關(guān)Uu與RSA的觀點仍存在爭議。支持Uu導(dǎo)致RSA的觀點認為，Uu上行感染后，可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜分泌一系列細胞因子與介質(zhì)，導(dǎo)致局部炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而影響胚胎植入以及母體耐受，從而導(dǎo)致自然流產(chǎn)的發(fā)生[4-5]。而相反的證據(jù)則表明，有研究顯示,Uu感染與RSA并非因果關(guān)系，且并不增加自然流產(chǎn)的發(fā)生率。在本研究當(dāng)中，我們發(fā)現(xiàn)RSA患者宮頸分泌物標本中Mg的檢出率明顯高于對照人群，與文獻報道一致，表明Mg是引起RSA的重要因素[3]。而Uu在2組人群中的檢出率并無統(tǒng)計學(xué)意義，這表明Uu感染可能并不是導(dǎo)致RSA發(fā)生的原因。本文同時也證實，RSA患者與正常人群中Uu感染與絨毛膜炎也無統(tǒng)計學(xué)意義。因此，Uu的確切致病作用需要重新評估。這表明Uu可能是下生殖道的條件致病菌，孕婦在孕期抵抗力較低，寄生于生殖道的Uu可由正常攜帶狀態(tài)變?yōu)楦腥緺顟B(tài)[6]。但單純的Uu可能并不足以導(dǎo)致RSA等不良妊娠的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn)，Uu感染的同時可能伴有其他細菌感染，因此造成了Uu是導(dǎo)致RSA的假象[7]。此外，Uu的不同學(xué)清型、感染濃度和感染后機體的免疫狀態(tài)等也是直接影響了妊娠的結(jié)局。因此，對于無臨床癥狀的Uu感染，并不一定需要抗生素治療[8]。而對于有癥狀患者，建議給予大環(huán)內(nèi)酯類抗生素口服，以免造成RSA。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.10.032

湖南 421001 衡陽市中心醫(yī)院產(chǎn)科（謝婧 焉彩霞） 衡陽市中心醫(yī)院檢驗科 （劉志敏 龍千祥）