杜聯(lián)峰　陳昆濤　丁立珉　唐艷麗　孫萬(wàn)邦

(遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)/貴州省免疫學(xué)研究生教育創(chuàng)新基地,珠海519041)

?

重組hIL-10聯(lián)合MTX對(duì)AA大鼠IL-1β、TNF-α含量變化和影像學(xué)變化研究①

杜聯(lián)峰陳昆濤丁立珉唐艷麗孫萬(wàn)邦②

(遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)/貴州省免疫學(xué)研究生教育創(chuàng)新基地,珠海519041)

[摘要]目的：以重組人白細(xì)胞介素-10(human interleukin-10，hIL-10)及其聯(lián)合甲氨碟呤(MTX)作用佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，檢測(cè)血清IL-1β、TNF-α含量的變化情況，研究重組hIL-10聯(lián)合MTX治療佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的效果。方法：AA大鼠造模后，用測(cè)量體重、足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)及組織病理學(xué)來(lái)評(píng)價(jià)造模是否成功， 各藥物處理AA大鼠模型后，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)大鼠血清IL-1β、TNF-α的含量。用放射學(xué)檢查來(lái)評(píng)估AA大鼠后足關(guān)節(jié)損傷的程度。 結(jié)果：各治療組IL-1β、TNF-α含量比模型組水平明顯下降，各治療組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)，聯(lián)合用藥組對(duì)AA大鼠血清IL-1β、TNF-α有明顯的抑制作用，影像學(xué)檢查提示IL-1β、TNF-α水平與大鼠足骨關(guān)節(jié)的損傷程度成正相關(guān)，聯(lián)合用藥組治療后骨侵蝕評(píng)分最低。結(jié)論：各治療組對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α有抑制作用，這種抑制作用與骨關(guān)節(jié)影像學(xué)改變顯著相關(guān)。聯(lián)合用藥組能有效降低AA大鼠的IL-1β、TNF-α水平，改善AA大鼠足關(guān)節(jié)損傷的治療作用。

[關(guān)鍵詞]重組人白介素-10；佐劑性關(guān)節(jié)炎；IL-1β；TNF-α

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種常見(jiàn)的以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的自身免疫性疾病，最終導(dǎo)致逐步和不可逆轉(zhuǎn)的關(guān)節(jié)破壞，目前病因尚不清楚，發(fā)病率高[1]。近年研究證實(shí)RA發(fā)生與免疫調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān)，最新的研究表明在RA發(fā)生和發(fā)展中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α發(fā)揮了非常重要的作用[2,3]，IL-1β和TNF-α是重要的炎癥介質(zhì)，能促進(jìn)骨髓釋放中性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)單核細(xì)胞和多核粒細(xì)胞趨化浸潤(rùn)到炎癥局部，在局部釋放溶酶體酶；能引起嗜堿粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)，IL-1β和TNF-α是促使RA病理發(fā)展的重要細(xì)胞因子，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腔中可檢出IL-1β和TNF-α含量的增加[4]。甲氨蝶呤(MTX)是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一種重要的改善病情的抗風(fēng)濕藥，臨床上已普遍引用，既往研究發(fā)現(xiàn)MTX主要是通過(guò)其細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)生多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(MTXPG)發(fā)揮治療作用及導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生[5]。最新研究發(fā)現(xiàn)甲氨蝶呤可以通過(guò)阻止激活腺苷A2A受體，增加細(xì)胞內(nèi)腺苷(Adenosine)濃度，增加cAMP水平來(lái)抑制TNF、IL-1、IL-6等炎性細(xì)胞因子的分泌和細(xì)胞吞噬來(lái)減輕骨關(guān)節(jié)炎癥[6]。但是，MTX治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎存在很大的副作用，主要是消化道癥狀以及減少血液的白細(xì)胞、血小板的數(shù)量以及影響肝功能等。最新的研究表明白細(xì)胞介素10是一種體內(nèi)重要免疫負(fù)向調(diào)控的細(xì)胞因子，IL-10能夠抑制活化及效應(yīng)性T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞功能，介導(dǎo)免疫抑制作用[4,5]。研究發(fā)現(xiàn)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中IL-10水平降低。IL-10在RA中主要由關(guān)節(jié)部位巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生，其可通過(guò)抑制炎性細(xì)胞因子的分泌，減輕關(guān)節(jié)的腫脹和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性滲出物的產(chǎn)生，具有明顯的免疫抑制功能，目前發(fā)現(xiàn)IL-10可以作為一種輔助治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的新型細(xì)胞因子，來(lái)減輕MTX在治療RA患者時(shí)的副作用。本研究擬應(yīng)用重組hIL-10及其聯(lián)合甲氨碟呤作用于佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，檢測(cè)大鼠血清中IL-1β和TNF-α水平的變化情況，同時(shí)通過(guò)后足的影像學(xué)檢查來(lái)評(píng)估AA大鼠關(guān)節(jié)損傷的程度，為重組IL-10在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物健康SPF級(jí)SD大鼠40只，雌性，由廣東省實(shí)驗(yàn)大鼠中心提供[許可證號(hào)SCXK(粵)2008-0002]。在遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)。

1.1.2主要試劑與實(shí)驗(yàn)儀器弗氏完全佐劑，Rat IL-1β ELISA Kit和Rat TNF-α ELISA Kit購(gòu)自欣博盛生物科技有限公司，MTX 購(gòu)自廣東嶺南制藥有限公司，重組人IL-10購(gòu)自PeproTech生物公司， ELx-800型酶標(biāo)儀等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組及動(dòng)物模型的建立40只SD大鼠編號(hào)以后按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，空白對(duì)照組8只SD大鼠，AA大鼠模型組32只SD大鼠，AA大鼠模型組造模：將卡介苗于80℃滅活后加入弗氏不完全佐劑中充分乳化混勻配成(10 mg/ml)的弗氏完全佐劑，于左側(cè)足底皮下注射0.1 ml建立AA模型。20 d后同法加強(qiáng)免疫1次，加強(qiáng)免疫后15 d后造模成功，隨機(jī)分為四組，既模型對(duì)照組、IL-10治療組、MTX治療組、IL-10與MTX聯(lián)合治療組，每組8只。三個(gè)治療組自造模成功日起再給藥15 d。給藥劑量及具體方法見(jiàn)表1。

1.2.2實(shí)驗(yàn)大鼠體重變化觀測(cè)AA大鼠模型分別在造模前與治療終止時(shí)，稱量并記錄大鼠造模前及治療后的體重變化，作為慢性炎癥的度量指標(biāo)。

1.2.3AA大鼠模型排水法檢測(cè)足腫脹度在造模后7、14、21、28、35 d，對(duì)每組大鼠足跖部用排水法進(jìn)行測(cè)量，將大鼠后肢放入裝滿水的刻度玻璃容器中，剛好沒(méi)過(guò)大鼠踝關(guān)節(jié)，重復(fù)測(cè)量3次，記錄每次排水量，取平均值。

1.2.4AA大鼠模型關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)定 在造模后7、14、21、28、35 d，根據(jù)關(guān)節(jié)紅腫程度進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)的評(píng)定，關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)如下：0分：正常無(wú)紅腫；1分：?jiǎn)蝹€(gè)足趾發(fā)紅、腫脹； 2分：多個(gè)足趾和足底出現(xiàn)腫脹；3分：踝關(guān)節(jié)以下全部腫脹；4分：踝關(guān)節(jié)以上受累且不能負(fù)重。AI=四肢關(guān)節(jié)評(píng)分之和。大鼠關(guān)節(jié)評(píng)分AI≥6分被認(rèn)定造模成功。

1.2.5AA大鼠模型關(guān)節(jié)滑膜病理學(xué)改變?nèi)≌４笫笈cAA模型大鼠處死，打開(kāi)關(guān)節(jié)腔，完整剝離滑膜組織，置新鮮配制的4%多聚甲醛固定，滑膜組織石蠟包埋后切片作HE染色。

1.2.6血清IL-1β和TNF-α檢測(cè)各組末次給藥后通過(guò)內(nèi)眥采血2 ml，分離血清，ELISA法檢測(cè)血清中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α含量。

1.2.7病理學(xué)及影像學(xué)檢測(cè)骨關(guān)節(jié)損傷程度AA大鼠治療組分別在治療前與治療終止時(shí)，通過(guò)DR X射線對(duì)原發(fā)側(cè)左后足進(jìn)行攝片(攝片條件為25 KV，1.0 S，電流4 mA)，對(duì)關(guān)節(jié)破壞和關(guān)節(jié)周圍侵蝕性變化的程度進(jìn)行測(cè)量[7]，X光片的得分從0～4表示不同的骨侵蝕度：0分=正常無(wú)骨質(zhì)破壞；1分=疑似或者1個(gè)微小局部病灶；2分=2個(gè)局部病灶或者病灶總面積≤50%，輕度至中度關(guān)節(jié)破壞；3分=3個(gè)以上病灶或者病灶總面積≥50，中度關(guān)節(jié)破壞；4分=關(guān)節(jié)面完全被破壞或者可見(jiàn)骨縮小，具有明顯的關(guān)節(jié)周圍糜爛性改變的嚴(yán)重關(guān)節(jié)破壞。所有的分?jǐn)?shù)計(jì)算以影像學(xué)人員判定為準(zhǔn)。同時(shí)，AA大鼠治療組分別在治療前與治療終止后，取滑膜組織，用4%多聚甲醛固定，滑膜組織石蠟包埋后切片作HE染色。

表1AA大鼠造模成功后實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案(n=8)

Tab.1Grouping and dosing regimen after AA rats model succeed(n=8)

GroupsDoseAdministereddays(d)RouteofadministrationFrequencyofadministrationNormalNS1ml/kg15EnterocoeliaEveryotherdayModelNS1ml/kg15EnterocoeliaEveryotherdayIL-105μg/kg15EnterocoeliaEveryotherdayMTX1mg/kg15EnterocoeliaEveryotherdayJoint3μg/kgIL-10+1mg/kgMTX15EnterocoeliaEveryotherday

2結(jié)果

2.1大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型結(jié)果

2.1.1實(shí)驗(yàn)大鼠體重變化如表2所示，AA大鼠模型組發(fā)生了體重減輕，而正常對(duì)照組大鼠體重隨飼養(yǎng)時(shí)間的增加逐漸在增加，各治療組小鼠的體重和模型對(duì)照組相比較明顯的增加，說(shuō)明治療組能夠減輕佐劑性關(guān)節(jié)炎所引起的體重減輕。

2.1.2AA大鼠足腫脹度結(jié)果模型組大鼠于注射弗氏完全佐劑24 h后注射側(cè)開(kāi)始出現(xiàn)輕、中度紅腫，第14天注射側(cè)足腫脹度達(dá)到高峰，在第21天檢測(cè)注射側(cè)足腫脹度與第14天相比出現(xiàn)了下降，但是在第20天加強(qiáng)免疫后，第28天檢測(cè)時(shí)足腫脹度又達(dá)到高峰。對(duì)照組未出現(xiàn)上述表現(xiàn)。在造模35 d過(guò)程中，模型組大鼠足腫脹度與正常對(duì)照組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.3實(shí)驗(yàn)大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)在造模35 d觀察過(guò)程中，模型組大鼠與正常對(duì)照組比較，造模14 d后，大鼠主要表現(xiàn)為原發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)炎指數(shù)變化明顯增加，出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫變化。造模14 d后關(guān)節(jié)炎指數(shù)均大于6，結(jié)果見(jiàn)圖2，說(shuō)明造模成功。

2.1.4AA大鼠模型關(guān)節(jié)滑膜病理學(xué)變化滑膜組織切片，經(jīng)HE染色，顯微鏡下觀察組織病理改變。結(jié)果顯示：正常組大鼠滑膜組織主要由疏松結(jié)締組織組成，表面可見(jiàn)滑膜絨毛，結(jié)構(gòu)正常，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。AA大鼠模型組滑膜組織血管增生充血，可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞等慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但關(guān)節(jié)軟骨未見(jiàn)明顯破壞，結(jié)果見(jiàn)圖3。

GroupsBodyweight(g)Modelingago(0d)Aftertreatment(45d)Numberofweightchange(g)Normalgroup189.12±2.64250.15±6.7361.24±6.73Modelgroup186.16±3.18189.12±2.361)3.10±3.361)IL-10group190.50±2.89245.60±5.002)55.08±5.042)MTXgroup187.14±2.48239.26±4.322)42.60±3.322)Jointgroup186.51±3.47245.23±2.412)58.50±3.412)

Note：Compared with normal group,1)P<0.05；compared with model group ，2)P<0.05.

2.2各治療組對(duì)AA大鼠血清中IL-1β、TNF-α的影響模型組的大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量明顯升高，與正常對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，說(shuō)明這兩種細(xì)胞因子對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠發(fā)揮重要的致炎作用，各治療組與模型組相比血清中IL-1β、TNF-α含量明顯下降，說(shuō)明各治療組對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-1β、TNF-α有一定的抑制作用。經(jīng)組間比較發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組IL-1β、TNF-α水平下降最多，與IL-10組和MTX組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MTX組的治療效果優(yōu)于IL-10組(P<0.05)，聯(lián)合用藥組的治療效果最好。見(jiàn)表3。

圖1　AA大鼠造模后足腫脹度的變化Fig.1　Changes swelling of paw on AA rats modelNote: Compared with model group,*.P<0.05.

圖2　AA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)的變化Fig.2　Result of arthritis index on AA rats model

圖3　正常組和模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織病理結(jié)果(HE ×400)Fig.3　Synovial tissue of histopathological change in control group and model group(HE ×400)Note: A.The synovial tissue of the normal group;B.Obvious inflammatory cell infiltrate in the synovial tissue of the model group.

GroupsIL-1β(ng/L)TNF-α(ng/L)Normalgroup48.01±9.541)62.56±8.451)Modelgroup272.77±8.26407.16±8.67IL-10group133.02±9.951)258.10±9.681)MTXgroup118.87±7.081)2)127.16±7.671)2)Jointgroup64.95±6.571)2)3)101.21±6.521)2)3)

Note：Compared with model group,1)P<0.05，Compared with IL-10 group,2)P<0.05， Compard with MTX group,3)P<0.05.

圖4　AA大鼠足關(guān)節(jié)X線影像學(xué)評(píng)分結(jié)果Fig.4　Score of X-ray imaging observation on paws of AA ratsNote: Compared with model group,*.P<0.05.

2.3AA大鼠X線影像學(xué)結(jié)果根據(jù)X線影像結(jié)果，按照骨侵蝕評(píng)分指標(biāo)相對(duì)進(jìn)行量化比較，骨侵蝕評(píng)分MTX、聯(lián)合組分別與模型組比較，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，結(jié)果見(jiàn)圖4。

3討論

隨著對(duì)RA發(fā)病機(jī)制的不斷深入研究，由免疫系統(tǒng)過(guò)量產(chǎn)生多種細(xì)胞因子在RA的發(fā)病機(jī)理中起重要作用。其中由單核-巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α在RA發(fā)病過(guò)程中起到了非常重要的作用。IL-1β是RA發(fā)病過(guò)程中的主要促炎細(xì)胞因子，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎損傷關(guān)節(jié)的過(guò)程中，它改變軟骨細(xì)胞合成代謝，通過(guò)刺激軟骨細(xì)胞來(lái)增強(qiáng)誘導(dǎo)MAPKs的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，最終導(dǎo)致了許多炎性介質(zhì)包括基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達(dá)，如MMP-1、 MMP-3、MMP-13和蛋白聚糖酶表達(dá)上調(diào)，NO、PGE2和環(huán)氧合酶-2(COX-2)等合成增加[8]。大量的研究也證實(shí)， IL-1β在人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。因此，IL-1β與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有密切的關(guān)系，被認(rèn)為是導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨變性的關(guān)鍵細(xì)胞因子。研究發(fā)現(xiàn)在佐劑性關(guān)節(jié)炎模型中早期階段的特征是一種全身性TNF-α水平含量的增加，TNF-α被認(rèn)為是在炎性疾病中發(fā)揮主導(dǎo)作用的細(xì)胞因子，它能通過(guò)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其黏附分子的表達(dá)增加，在關(guān)節(jié)發(fā)生炎癥時(shí)，血液中的白細(xì)胞正是通過(guò)與黏附分子相互作用被匯集到關(guān)節(jié)腔；刺激產(chǎn)生多種小分子炎性遞質(zhì)，如前列腺素等；同時(shí)通過(guò)直接刺激滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，導(dǎo)致骨和軟骨的破壞。我們的研究結(jié)果顯示：各治療組與模型組相比血清中TNF-α含量明顯下降，其中重組hIL-10組的抗炎作用較MTX組和聯(lián)合用藥組弱，聯(lián)合用藥組和MTX組具有較好的抗炎作用，能有效降低血清中TNF-α含量，其中聯(lián)合用藥組的效果最好。結(jié)果表明重組hIL-10在AA大鼠模型中有一定的抗炎作用，目前大量研究也證實(shí)IL-10是在RA發(fā)病過(guò)程中起保護(hù)作用的重要細(xì)胞因子。其治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制可能是IL-10可抑制MMPs產(chǎn)生及IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的釋放，并促進(jìn)IL-1RA和可溶性TNF受體的產(chǎn)生，抑制T細(xì)胞的增殖。通過(guò)對(duì)血清中細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α分泌水平產(chǎn)生明顯的抑制作用，從而阻止滑膜成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)水平上發(fā)揮免疫調(diào)控作用達(dá)到抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的目的。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究在AA大鼠藥物治療15 d后，AA大鼠血清中IL-1β、TNF-α分泌水平發(fā)生不同程度的降低。各治療組組間比較，聯(lián)合組能明顯抑制IL-1β、TNF-α在血清中的含量水平，和MTX組和IL-10組對(duì)比有顯著性差異，對(duì)調(diào)節(jié)IL-1β、TNF-α分泌水平的效果最好。說(shuō)明聯(lián)合用藥組能有效減少AA大鼠血清中IL-1β、TNF-α的含量水平，從而起到減輕關(guān)節(jié)炎的作用。

在骨關(guān)節(jié)炎疾病中，X射線對(duì)骨關(guān)節(jié)的照片分析，仍然是臨床和實(shí)驗(yàn)中常用于評(píng)估疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)方法[10，11]，本研究在AA大鼠藥物治療15 d后，MTX組、IL-10組及兩者聯(lián)合組的關(guān)節(jié)病變與模型組比較，病變程度有所減輕，X線影像顯示治療后骨侵蝕評(píng)分降低，關(guān)節(jié)面損傷有一定程度改善，藥物治療前后在軟組織腫脹、骨侵蝕的評(píng)分方面看到相同的規(guī)律，以聯(lián)合用藥組的治療效果最明顯。

甲氨蝶呤是目前治療RA首選的緩解病情藥物，也是聯(lián)合治療方案中最基礎(chǔ)的藥物。根據(jù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎R(shí)A新的分類標(biāo)準(zhǔn)及其方法學(xué)的推薦意見(jiàn)[12，13]，一旦診斷明確，主張?jiān)缙趹?yīng)用MTX，或以此為基礎(chǔ)進(jìn)行聯(lián)合治療。本研究中使用甲氨蝶呤做對(duì)照組，結(jié)果具有可比性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示重組hIL-10聯(lián)合MTX治療AA大鼠后的各項(xiàng)指標(biāo)都優(yōu)于單用MTX組，說(shuō)明生物制劑hIL-10與化療藥MTX聯(lián)合有一定的優(yōu)勢(shì)，為進(jìn)一步探討生物制劑重組hIL-10聯(lián)合化學(xué)藥物MTX治療RA提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Firestein GS.Evolving concepts of rheumatoid arthritis[J].Nature，2003，423(6937):356-361.

[2]Rho YH,Chung CP,Deser A,etal.Inflammatory mediators and premature coronary atherosclerosis in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rueum,2009；61(11):1580-1585.

[3]Brennan FM,McInnes JB.Evidence that cytokines play a role in rheumatoid arthritis[J].J Clin Invest,2008，118(11):3537-3545.

[4]Ghasemi H，Ghazanfari T，Yaraee Retal.Roles of IL-10 in Ocular Inflammations:A Review[J].Ocul Immunol Inflamm,2012，，20(6):406-418.

[5]Ireland SJ，Monson NL，Davis LS.Seeking balance:Potentiation and inhibition of multiple sclerosis autoimmune responses by IL-6 and IL-10[J].Cytokine,2015，73(2):236-244.

[6]Mediero A,Perez-Aso M,Wilder T,etal.Methotrexate prevents wear particle -induced inflammatory osteolysis via activation of the adenosine A2A receptor[J].Arthritis Rheum，2014，64(3):849-855.

[7]van Maanen MA,Lebre MC,van der Poll T,etal.Stimulation of nicotinic acetylcholine receptors attenuates collagen-induced arthritis in mice[J].Arthritis Rheum,2008，60(1)：114-122.

[8]Thalhamer T1,McGrath MA,Harnett MM.MAPKs and their relevance to arthritis and inflammation[J].Rheumatology，2008，47(4):409-414.

[9]Alghasham A1,Rasheed Z.Therapeutic targets for rheumatoid arthritis:Progress and promises[J].Autoimmunity，2014；47(2):77-94.

[10]Roy S,Sannigrahi S,Ghosh B,etal.Combination therapy of dexamethasone with epigallocatechin enhances tibiotarsal bone articulation and modulates oxidative status correlates with cartilage cytokines expression in the early phase of experimental arthritis[J].Eur J Pharmacol,2013，698(1)444-454.

[11]Roy S,Sannigrahi S,Vaddepalli RP,etal.A novel combination of methotrexate and epigallocatechin attenuates the overexpression of pro-inflammatory cartilage cytokines and modulates antioxidant status in adjuvant arthritic rats[J].Inflammation,2012，35(4)1435-1447.

[12]Aletaha D,Neogi T,Silman A,etal.2010 Rhuematoid arthritis classification criteria:an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative[J].Arthritis Rheum，2010，62:2569-2581.

[13]Funovits J,Aletaha D,Bykerk V,etal.The 2010 American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism classification criteria for rheumatoid arthritis:Methodological Report Phase I[J].Ann Rheum Dis，2010，69:1589-1595.

[收稿2015-08-25修回2015-10-15]

(編輯倪鵬)

Effect of recombinant hIL-10 plus MTX on change of IL-1β，TNF-α level and medical imaging of an AA rat model

DULian-Feng，CHENKun-Tao，DINGLi-Min，TANGYan-Li，SUNWan-Bang.

ZunyiMedicalCollegeCampusinZhuhai/GraduateEducationandInnovationBaseofImmunologyinGuizhouProvince，Zhuhai519041，China

[Abstract]Objective:Adjuvant arthritis(AA)rats interfered with recombinant hIL-10,methotrexate(MTX)and IL-10 plus MTX separately,we detected the changes of IL-1β and TNF-α in rat′s serum.Methods: AA rats after interfered with recombinant hIL-10,MTX and IL-10 plus MTX.The levels of IL-1β，TNF-α in serum of rats were measured by ELISA method.with radiological examination to evaluate the degree of AA paw joint damage.Results: Compared to normal control group,the IL-1β，TNF-α of treatment group was significantly decreased,there was a significant differences compared with control group(P<0.05),The Combination group had significant difference compared with MTX group and IL-10 group，radiological examinations showed IL-1β,TNF-α levels and degree of AA paw joint damage were positive correlation,the combination group therapy bone erosion score lowest.Conclusion: Marked alteration in the serum level of IL-1β,TNF-α on Each treatment group of adjuvant arthritis in rats,these alterations of cytokine levels were associated with significant radiological changes of the joints.The combined group can effectively reduce levels of IL-1β,TNF-α and improve therapeutic effect of paw joint injury in AA rats.

[Key words]Recombinant hIL-10；Adjuvant arthritis；IL-1β；TNF-α

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.05.004

作者簡(jiǎn)介：杜聯(lián)峰(1976年-)，男，碩士，副教授，主要從事分子免疫學(xué)研究，E-mail：8wy149842@163.com。

中圖分類號(hào)R392.31

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)05-0624-05

①本文受貴州省教育廳自然科學(xué)項(xiàng)目(2008032)資助。

②通訊作者，E-mail:sunwb7224@sina.com。