鄭瑤

痰液性狀和保存條件對結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響

鄭瑤

目的 探討不同性狀及不同保存時間條件對痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響。方法 統(tǒng)計分析949份結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果，對比不同性狀及不同保存條件下的痰液標本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率。結(jié)果 在上述不同性狀的痰液樣本檢測中，干酪痰的陽性培養(yǎng)率最高，陽性培養(yǎng)率從高到底依次為干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，組間對比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性。將其隨機分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)當保存溫度是-18℃時，隨著樣本保存時間的延長，標本陽性率有不明顯的下降，差異無統(tǒng)計學意義；在4℃、25℃及30℃時，隨著樣本保存時間的延長，樣本陽性率均有明顯下降（P＜0.05），尤其是在28 d時下降特別明顯（P＜0.05）。而在溫度相同時，保存時間為0 d時標本陽性率最高，隨著保存時間的延長，同一溫度下樣本的陽性率均呈下降趨勢（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃時標本陽性率從低14 d開始即與0 d差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 不同性狀及不同保存條件會對痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率造成較大影響，因此在進行痰液結(jié)核菌培養(yǎng)實驗時，應選取適宜性狀痰液并于適宜溫度條件下短時間保存。

痰液性狀；保存條件；結(jié)核菌；陽性率

痰液結(jié)核菌分離培養(yǎng)是當前用于肺結(jié)核病原學實驗室檢查的重要依據(jù)，同時也是結(jié)核病病原學診斷的“黃金標準”[1]，其痰液樣本的陽性檢出率高于涂片檢查[2]。在進行結(jié)核菌培養(yǎng)實驗中，不僅需要對接種前的痰液樣本進行去污染處理，還應按照相應操作規(guī)程，選取合適的痰液性狀及保存條件。為進一步研究痰液性狀和保存條件對結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響，對我疾病控制中心收集的痰液樣本檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，現(xiàn)作如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取上饒市疾病預防控制中心于2012年2月～2014年10月收集的痰液樣本949份，痰液性狀劃分參照標準[3]對949份標本展開抗酸桿菌涂片檢查。

1.2 方法

1.2.1 痰結(jié)核菌培養(yǎng)方法 實驗前，上述949份痰液樣本均采用4%氫氧化鈉處理，后接種酸性羅氏培養(yǎng)基進行痰結(jié)核菌分離培養(yǎng)，于37℃環(huán)境下孵育8周后進行實驗報告總結(jié)?？偨Y(jié)抗酸桿菌檢查結(jié)果。

1.2.2 不同保存條件下的痰液標本實驗方法 將上述經(jīng)由抗酸桿菌檢查為陽性的痰液樣本隨機分為4組，分別于-18℃、4℃、25℃、30℃條件下保存，并在不同時間后對其進行痰結(jié)核菌分離培養(yǎng)實驗檢查。

1.3 質(zhì)量控制[4]上述培養(yǎng)過程均參照《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》中的相關規(guī)定實施質(zhì)量控制。

1.4 統(tǒng)計學方法 此次研究使用統(tǒng)計學軟件SPSS 17.0對相關數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以“x±s”形式表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以百分比形式表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性狀痰液結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率對比 在本次收集的949份痰液樣本中，干酪痰179例，血性痰107例，粘液痰535例，唾液128例。結(jié)核菌培養(yǎng)實驗為陽性的痰液樣本數(shù)為220份，其中干酪痰110份，陽性培養(yǎng)率為61.45%（110/179）；血性痰39例，陽性培養(yǎng)率為36.45%（39/107）；粘液痰60例，陽性培養(yǎng)率為11.21%（60/535）；唾液11例，陽性培養(yǎng)率為8.59%（11/128）。在上述不同性狀的痰液樣本檢測中，干酪痰的陽性培養(yǎng)率最高，陽性培養(yǎng)率從高到底依次為干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，組間對比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。

2.2 不同保存條件下痰液培養(yǎng)陽性率對比 經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性，將其隨機分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)，當保存溫度是-18℃時，隨著樣本保存時間的延長，標本陽性率有不明顯的下降（P＞0.05）；在4℃、25℃及30℃時，隨著樣本保存時間的延長，樣本陽性率均有明顯下降（P＜0.05），尤其是在28 d時下降特別明顯（P＜0.05）。而在溫度相同時，保存時間為0 d時標本陽性率最高，隨著保存時間的延長，同一溫度下樣本的陽性率均呈下降趨勢（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃時標本陽性率從低14 d開始即與0 d差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同保存條件下痰液培養(yǎng)陽性率對比[n(%)]

3 討論

3.1 結(jié)核菌培養(yǎng)實驗 結(jié)核菌培養(yǎng)實驗是當前醫(yī)學界公認的結(jié)核病細菌學檢查的“黃金標準”[5]，不論是對于細菌檢查還是臨床診斷工作來說，結(jié)核菌培養(yǎng)都是最佳的檢查方法。通過結(jié)核菌培養(yǎng)實驗，能夠?qū)Ψ谓Y(jié)核病患者進行準確診斷，特別是對于經(jīng)由涂片檢查顯示為陰性的肺結(jié)核患者來說，結(jié)核菌分離培養(yǎng)實驗能夠?qū)ζ涫欠駷榉谓Y(jié)核患者進一步確認，同時也可彌補涂片檢查所帶來的遺漏，為肺結(jié)核的臨床診斷提供了重要依據(jù)，同時也在一定程度上有利于幫助消滅傳染源。但是，實際工作中存在著部分III型肺結(jié)核患者結(jié)核菌培養(yǎng)實驗仍然為陰性，相關研究表明[6]，其主要是同痰液樣本性狀以及保存條件有著較大關聯(lián)。

3.2 痰液性狀對結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響 對結(jié)核菌分離培養(yǎng)實驗來說，痰液樣本的質(zhì)量對培養(yǎng)結(jié)果的準確性存在一定影響，有研究表明不同性狀的痰液樣本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率存在顯著差異[7]。本次研究的949例痰液樣本中，結(jié)核菌培養(yǎng)實驗為陽性的痰液樣本數(shù)為220份，其中干酪痰的陽性檢出率最高，唾液的陽性檢出率最低。因此在日后進行培養(yǎng)實驗時，可注意選取干酪痰作為實驗標本，從而提升痰液培養(yǎng)陽性檢出率。同時需要注意在進行痰液取樣時，應嚴格遵循相關規(guī)范要求，降低培養(yǎng)失敗的可能性。

3.3 保存條件對結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率的影響 經(jīng)檢查，220例結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽性。將其隨機分為4組，每組樣本數(shù)是55例。將其置于不同溫度條件下培養(yǎng)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣本保存時間與保存溫度對于這220例已經(jīng)檢測為陽性的痰液標本的檢測結(jié)果有明顯影響。（1）溫度固定時對比：如在溫度是-18℃時，樣本保存時間不同時，標本檢測的陽性率雖有一定差異，但結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義。而在在4℃、25℃及30℃時，以溫度為固定值進行對比，各固定溫度值不同保存時間對比顯示，除了保存0 d、3 d及7 d時樣本陽性率不同溫度組比較差異無統(tǒng)計學意義，而在21 d與28 d時，隨著保存溫度的升高，樣本陽性率呈下降趨勢，甚至在28 d時，30℃組樣本的陽性率已降低至0%。（2）保存時間為固定值的對比：將時間作為固定兩，對不同保存溫度對樣本陽性率結(jié)果進行分析，可以發(fā)現(xiàn)，保存時間相同時，隨著保存溫度的升高樣本陽性率呈降低趨勢，尤其是在21 d與28 d時比較明顯。同時，有研究資料表明[8]，痰液標本中其他類型的細菌會隨著樣本保存時間時間的延長以及保存溫度的增加，且結(jié)核菌的數(shù)量會逐步減少，從而進一步加重了痰液樣本污染情況，最終造成樣本結(jié)核菌陽性檢出率下降。綜上所述，痰液性狀及保存條件會對結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率造成較大影響，所以在進行培養(yǎng)實驗時，可針對性的選擇適宜性狀的痰液并于合適溫度條件下短時間內(nèi)保存并進行接種培養(yǎng)，能夠有效提升結(jié)核菌陽性檢出率，便于臨床指導用藥。

[1] 董彬.不同性狀、不同保存條件痰標本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率比較[J].醫(yī)學動物防制，2011,27（5）：447-448.

[2] 齊學進.臨床技術操作規(guī)范結(jié)核病分冊[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2004:32-36.

[3] 中國疾病預防控制中心.痰涂片鏡檢實驗室質(zhì)量保證手冊[S].北京：中國協(xié)和大學出版社，2004.

[4] 宋凱.咳痰時間、痰標本性狀與涂片抗酸桿菌檢出關系分析[J].中國防癆雜志,2008,30（5）：414-416.

[5] 李靜.涂片鏡檢法與培養(yǎng)法檢測結(jié)核分支桿菌的結(jié)果比較[J].寧夏醫(yī)學雜志,2006,45(10):787-788.

[6] 李寒濱.痰標本質(zhì)量是提高痰涂片和培養(yǎng)陽性率的第一要素[J].中華中西醫(yī)學雜志,2007，5（6）：61.

[7] 謝兵.不同性狀、不同保存條件痰標本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率比較[J].臨床醫(yī)學工程，2013，20（2）：203-205.

[8] 李建華.肺結(jié)核患者痰標本性狀、咳痰時間與抗酸桿菌涂片陽性檢出率關系分析[J].臨床薈萃，2009,24（16）:1439-1441.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.040

江西 334000 上饒市疾病預防控制中心 （鄭瑤）