徐連強(qiáng) 曹毅 曾玉瓊 王慧敏

常規(guī)生化檢驗(yàn)中循環(huán)酶法檢測血清同型半胱氨酸的臨床分析

徐連強(qiáng) 曹毅 曾玉瓊 王慧敏

目的 探討循環(huán)酶法檢測血清同型半胱氨酸（Hcy）的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 選取腦梗死、冠心病、高血壓患者及同期進(jìn)行健康體檢的正常人各50例作為研究對象，采用常規(guī)生化檢驗(yàn)中的循環(huán)酶法對所有入組對象進(jìn)行血清Hcy檢測，分析各組的檢測結(jié)果。結(jié)果 循環(huán)酶法對血清Hcy檢測結(jié)果的批內(nèi)變異系數(shù)為1.33%，批外變異系數(shù)為3.07%，平均回收率為99.4%；濃度＞10 mmol/L的VC、血紅蛋白水平＜1.5 g/L、濃度為380 μmol/L的膽紅素對檢測結(jié)果干擾較小。腦梗死組、冠心病組、高血壓組患者的血清Hcy水平均顯著高于對照組（P＜0.05），冠心病組的血清Hcy水平最高，顯著高于腦梗死組和高血壓組（P＜0.05）。結(jié)論 臨床應(yīng)用循環(huán)酶法檢測血清Hcy，具有較高的精密度與靈敏度，抗干擾性好，檢測準(zhǔn)確性較高，是臨床診斷各類心腦血管疾病的有效手段，具有重要的臨床價(jià)值。

血清同型半胱氨酸；循環(huán)酶法；生化檢驗(yàn)

血清同型半胱氨酸（Hcy）是人體正常代謝的中間產(chǎn)物，是一種有著高反應(yīng)活性的氨基酸，由于Hcy與血漿中的蛋白質(zhì)有強(qiáng)的親合力，所以較少以游離狀態(tài)存在[1]。目前，已有研究證實(shí)，高Hcy血癥的發(fā)生主要與遺傳缺陷有關(guān)，是動脈血栓性疾病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。近年來，在生化檢驗(yàn)技術(shù)的不斷進(jìn)步下，臨床對血清Hcy也有了更為深入的認(rèn)識。循環(huán)酶法是臨床檢測血清Hcy的常用方法，本研究旨在明確循環(huán)酶法檢測血清Hcy的臨床應(yīng)用價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取江西省人民醫(yī)院2014年3月～2015年3月收治的腦梗死、冠心病、高血壓患者，以及同期進(jìn)行健康體檢的正常人各50例作為研究對象。其中腦梗死組男27例，女23例，年齡42～83歲，平均（60.4±4.8）歲；冠心病組男26例，女24例，年齡44～79歲，平均（62.5±5.4）歲；高血壓組男29例，女21例，年齡33～80歲，平均（56.8±4.7）歲。對照組男25例，女25例，年齡45～81歲，平均（63.3±4.7）歲。在平均年齡、性別構(gòu)成比方面，各組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 4組研究對象均采用循環(huán)酶法進(jìn)行血清Hcy檢測，血清Hcy的正常參考值為4.0～15.4 μmol/L。采集所有研究對象的晨起空腹靜脈血（3 mL），使用離心機(jī)以轉(zhuǎn)速3 000 r/ min離心10 min，分離上層血清待檢。血清Hcy檢測儀器選用HITACHI 7600-120全自動生化分析儀，校準(zhǔn)液濃度分別為0.0 μmol/L（試劑1）、28.0 μmol/L（試劑2），質(zhì)控液濃度分別為7.5、12.0、29.0 μmol/L。檢測參數(shù)：選用速率法，溫度37℃，主波與次波的波長分別為340、405 nm。取13.0 μL血清樣本，200 μL試劑1，反應(yīng)600 s后，加入20 μL試劑2，反應(yīng)180 s。采用兩點(diǎn)定標(biāo)法進(jìn)行校準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用“n，%”表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 循環(huán)酶法檢測的精密度分析 使用低值質(zhì)控物、中值質(zhì)控物、高值質(zhì)控物進(jìn)行血清Hcy測定，各測定20次，然后每天檢測1次，共測定20 d，得出循環(huán)酶法對血清Hcy測定的精密度，結(jié)果顯示，批內(nèi)變異系數(shù)為1.33%，批外變異系數(shù)為3.07%。

2.2 回收率分析 取15.8 μmol/L血清標(biāo)本，分別加入濃度為5.1和25.8 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液中，計(jì)算出回收率分別為99.5%、99.3%，平均回收率為99.4%。

2.3 抗干擾性分析 （1）取不同濃度的VC，與同體積血清混合，采用循環(huán)酶法進(jìn)行血清Hcy檢測，結(jié)果顯示，濃度＞10 mmol/L的VC對檢測結(jié)果無干擾；（2）配制濃度不同的血紅蛋白，與同體積無溶血血清混合，采用循環(huán)酶法檢測Hcy，結(jié)果顯示，血紅蛋白水平＜1.5 g/L對檢測結(jié)果干擾最?。唬?）分別取0.1 mL濃度不同的膽紅素與0.9 mL的血清混合，采用循環(huán)酶法檢測Hcy，結(jié)果顯示，濃度為380 μmol/L的膽紅素對檢測結(jié)果干擾較小。

2.4 血清Hcy檢測結(jié)果對比 腦梗死組、冠心病組、高血壓組患者的血清Hcy水平均顯著高于對照組（P＜0.05）；冠心病組的血清Hcy水平最高，顯著高于腦梗死組和高血壓組（P＜0.05）；腦梗死組與高血壓組的血清Hcy水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 4組研究對象的血清Hcy檢測結(jié)果比較（x±s）

3 討論

目前，臨床檢測血清Hcy的方法較多，如HPLC法、FPIA法、氨基酸分析儀法、酶學(xué)分析法、ELISA等[2]。HPLC是最為常用的一種方法，但其對設(shè)備要求較高，F(xiàn)PIA和ELISA法需在特異性的Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶和S腺苷Hcy水解酶催化下將Hcy轉(zhuǎn)化為S腺苷Hcy，然后再水解為Hcy，反應(yīng)過程十分復(fù)雜[3]。循環(huán)酶法是將氧化型Hcy轉(zhuǎn)化為游離Hcy，然后在CBS催化作用下，與絲氨酸反應(yīng)生成L-胱硫醚，再在CBL催化下生成Hcy、NH 3和丙酮酸，該反應(yīng)過程相對簡單[4]。通過進(jìn)行抗干擾試驗(yàn)、精密度檢測，發(fā)現(xiàn)循環(huán)酶法檢測血清Hcy的精密度、回收率均較高，抗干擾性較好，故本次研究就采用了循環(huán)酶法進(jìn)行血清Hcy檢測。

大量臨床研究表明，心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展與血清Hcy水平有著密切聯(lián)系，Hcy是心腦血管疾病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素[5]。有學(xué)者提出[6]，檢測血清Hcy水平，可以為臨床早期診斷、治療高血壓疾病，以及評估高血壓治療效果提供可靠依據(jù)。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，高血壓患者的血清Hcy水平顯著高于正常人（P＜0.05）。這一結(jié)果與前述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相符。本次研究結(jié)果還顯示，腦梗死、冠心病患者的血清Hcy水平均顯著高于健康人，并且冠心病患者的血清Hcy水平最高，顯著高于腦梗死和高血壓患者的血清Hcy水平（P＜0.05）。這也證實(shí)了腦梗死、冠心病的發(fā)生與血清Hcy水平有著密切聯(lián)系，并且冠心病患者的血清Hcy水平上升最為顯著，臨床應(yīng)對此引起高度重視[7-8]。

綜上所述，臨床應(yīng)用循環(huán)酶法檢測血清Hcy，具有較高的精密度與靈敏度，且抗干擾性好，檢測準(zhǔn)確性高，是臨床診斷各類心腦血管疾病的有效手段，具有重要的臨床價(jià)值。

[1] 席金甌,王維鵬.循環(huán)酶法檢測血清同型半胱氨酸的性能評價(jià)及臨床應(yīng)用[J].中國婦幼保健,2012,27(10):1574-1575.

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[3] 鐘白云,李臘秀,廖經(jīng)忠,等.同型半胱氨酸與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的相關(guān)性研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2010,20(12):1802-1805.

[4] 焦文學(xué),王潔.循環(huán)酶法雙試劑測定血清同型半胱氨酸的方法學(xué)評價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012(18):2352-2353.

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[8] 梁紅梅,黃華,羅奇智,等.兩種方法學(xué)同型半胱氨酸水平正常值的臨床驗(yàn)證及分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(22):2747-2748.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.031

江西 330006 江西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（徐連強(qiáng) 曹毅 曾玉瓊 王慧敏）