林燕平， 黃溢華， 李自順， 黃共產(chǎn)， 林玉娟， 李建盛， 蘇菊花(福建省廈門市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科， 福建 廈門 361100)

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結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核性疾病中的診斷價(jià)值研究?

林燕平， 黃溢華， 李自順， 黃共產(chǎn)， 林玉娟， 李建盛， 蘇菊花
(福建省廈門市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科， 福建 廈門 361100)

摘 要:目的:觀察結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核性疾病中的診斷價(jià)值。方法:230例肺結(jié)核患者作為觀察組，另選擇230例健康患者作為對(duì)照組，對(duì)所有患者均進(jìn)行痰涂片結(jié)核桿菌檢測(cè)、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)、TB-DNA檢測(cè)和抗結(jié)核抗體檢測(cè)。結(jié)果:痰涂片特異性最高，敏感性較低；TB-DNA敏感性最高，但特異性較低；抗結(jié)核抗體的敏感性和特異性雖然高于痰涂片和TB-DNA相關(guān)指標(biāo)的最低水平，但其總體水平相對(duì)較低。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的敏感性和特異性雖然低于痰涂片和TB-DNA相關(guān)指標(biāo)的最高水平，但其總體水平相對(duì)較高。結(jié)論:T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)具有快速，準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，其綜合診斷價(jià)值較高，值得臨床考慮。

關(guān)鍵詞:結(jié)核分枝桿菌； T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)； 結(jié) 核

結(jié)核性疾病的治療難度較大，給患者帶來了很大痛苦，一般發(fā)現(xiàn)越早，預(yù)后越好[1]。我們回顧性分析肺結(jié)核患者的臨床資料，以探討結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料:研究對(duì)象為2013年1月至2014年5月本院收治的230例肺結(jié)核患者作為實(shí)驗(yàn)組，均經(jīng)過結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)確診。另選擇230例健康患者作為對(duì)照組。年齡(57.9±11.5)歲。病程(5.2±1.3)年。男161例，女69例。疾病類型:原發(fā)性肺結(jié)核36例，繼發(fā)性肺結(jié)核118例，血型播散型肺結(jié)核76例。

1.2方法:所有患者均同時(shí)采取4種方法進(jìn)行檢測(cè)。①痰涂片結(jié)核桿菌檢測(cè)。痰涂片采用萋一尼抗酸染色法，第1次鏡檢陰性痰標(biāo)本重復(fù)兩次留標(biāo)本檢查。藍(lán)色為陰性，紅色為陽(yáng)性。②T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)，試劑盒為英國(guó)Oxford Immunotec Limited公司提供，按照試劑盒說明書操作，陽(yáng)性結(jié)果:對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為≤5個(gè)，樣本孔斑點(diǎn)數(shù)為比對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè)。對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為≥6，樣本孔斑點(diǎn)數(shù)為比對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥2倍。③TB-DNA檢測(cè):試劑盒為華大基因公司產(chǎn)品，采用實(shí)時(shí)熒光PCR法，Ct值＜30為陽(yáng)性，否則為陰性。④抗結(jié)核抗體檢測(cè)。試劑盒為宜昌人福藥業(yè)產(chǎn)品，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，用酶標(biāo)儀讀取光密度值(OD值)，并在標(biāo)準(zhǔn)滴度曲線表中查找出相應(yīng)標(biāo)本中抗結(jié)核抗體滴度，陽(yáng)性為＞400U/ mL。

1.3數(shù)據(jù)處理:統(tǒng)計(jì)4種檢測(cè)方法的靈敏性，特異性和準(zhǔn)確率，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，SPSS12.0軟件處理相關(guān)數(shù)據(jù)，卡方檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料。

2　結(jié) 果

4種檢測(cè)方法相關(guān)指標(biāo)如表1所示。

表1　4種檢測(cè)方法相關(guān)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)

表2　肺結(jié)核組和肺外結(jié)核組的T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果

細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果列于表2，從表中可以看出，結(jié)核病組中菌陰患者201例，T-SPOT陽(yáng)性159例，靈敏度為79.1%，其中菌陰肺結(jié)核靈敏度為76. 7%(112/ 146)，菌陰肺外結(jié)核靈敏度為85.5%(47/55)；結(jié)核病組中菌陽(yáng)患者308例，T-SPOT陽(yáng)性281例，靈敏度為91.2%，其中菌陽(yáng)肺結(jié)核靈敏度為91.5%(270/295)，菌陽(yáng)肺外結(jié)核靈敏度為84.6%(11/13)。

3　討 論

對(duì)于肺結(jié)核疑似患者來說，許多患者缺乏典型的影像學(xué)征象，部分初發(fā)患者也缺乏典型的結(jié)核癥狀。細(xì)菌培養(yǎng)是診斷結(jié)核病情的金標(biāo)準(zhǔn)，具有非常高的特異性和靈敏性，但其最大的局限在于所需時(shí)間較長(zhǎng)[2]，最快也要兩周左右，不利于結(jié)核病情的大規(guī)?？焖俸Y查，而且醫(yī)療資源緊張?jiān)谙喈?dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)難以有較大改觀，花費(fèi)大量的人力和時(shí)間成本檢測(cè)病情對(duì)于大多數(shù)醫(yī)院來說都不太現(xiàn)實(shí)，此外，對(duì)于結(jié)核性腦膜炎患者來說，診斷所需時(shí)間太長(zhǎng)，可能延誤治療，因此尋找合適的檢測(cè)方法，對(duì)于提高結(jié)核疾病的檢出率具有重要意義。

痰涂片方法所需時(shí)間較短，技術(shù)要求低，即使在很多基層醫(yī)院也可開展，由于其基于結(jié)核分枝桿菌對(duì)特定染料顯現(xiàn)特定顏色的原理，特異性較高，因此在臨床上應(yīng)用廣泛。但由于提取和制作標(biāo)本的過程中，主觀因素較大，特別在含菌量少的情況下，敏感性較低。本次結(jié)果顯示，痰涂片方法在4種方法中特異性最高，敏感性最低，其具有較為明顯的局限性。抗結(jié)核抗體檢測(cè)具有快速的特點(diǎn)，其原理是基于結(jié)核分枝桿菌對(duì)特定抗體產(chǎn)生反應(yīng)，從而成為臨床上可觀察到的指標(biāo)，從理論上來說，具有較高的特異性，但由于許多患者有卡介苗接種史[3]，假陽(yáng)性率較高，從而使其特異性較低，此外，由于特異反應(yīng)受所取樣本濃度影響，敏感性相對(duì)較低。本次結(jié)果顯示，抗結(jié)核抗體的敏感性和特異性較為均衡，但均處于較低水平，這對(duì)于提高檢出率是不利的。TB-DNA是利用PCR反應(yīng)，將原本濃度很低的結(jié)核分枝桿菌DNA序列擴(kuò)增到較大水平，從而使其更容易檢測(cè)到，具有很高的敏感性，而且可以很快拿到結(jié)果，但由于非特異性序列也可能隨之?dāng)U增[4]，影響到對(duì)定性結(jié)果的評(píng)定，因此其特異性較低。本次結(jié)果顯示，TB-DNA檢測(cè)在在4種方法中敏感性最高，特異性最低，這同樣不利于大規(guī)模篩查。

在結(jié)核分枝桿菌中存在RD1基因序列，這種序列在大部分其他分枝桿菌基因序列和卡介苗菌株基因序列中不存在，交叉反應(yīng)少，從而保證了較高的特異性。RD1基因序列編碼產(chǎn)生CFP-10和ESAT-6蛋白，其作為特異性抗原，可刺激T淋巴細(xì)胞成為致敏T淋巴細(xì)胞，并釋放特異性的IFN-γ細(xì)胞因子。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)本質(zhì)上是一種酶免疫技術(shù)，每1個(gè)顯色斑點(diǎn)代表1個(gè)致敏T淋巴細(xì)胞，根據(jù)斑點(diǎn)數(shù)來判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌。其可以從單細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)，有報(bào)道顯示，其可以從6萬(wàn)個(gè)致敏T淋巴細(xì)胞中檢出1個(gè)細(xì)胞，具有很高的特異性。此外，由于致敏T淋巴細(xì)胞是受刺激而產(chǎn)生，且壽命較短，因此T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)還可以判斷患者治療后體內(nèi)是否還存在結(jié)核分枝桿菌。本次結(jié)果顯示，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)具有較高的靈敏性和特異性，顯示了較高的診斷價(jià)值。靈敏度高的原因是在實(shí)驗(yàn)過程中，需要對(duì)受試者的白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，使每位受試者加入反應(yīng)孔的白細(xì)胞數(shù)均為25萬(wàn)個(gè)，細(xì)胞計(jì)數(shù)雖不能完全克服免疫力異常的問題，但能讓受試者基本在相同的水平進(jìn)行測(cè)試。特異性高的原因是CFP-10和ESAT-6兩個(gè)抗原的高特異，能排除絕大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌和卡介苗接種的影響。但此方法檢測(cè)結(jié)核特異效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，不能區(qū)分活動(dòng)性和潛伏性結(jié)核，因此也是導(dǎo)致特異性較低的原因。

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文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.048

文章編號(hào):1006-6233(2016)02-0305-03

基金項(xiàng)目：?福建省廈門市科技計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：2011S0409)