劉丹天津市濱海新區(qū)塘沽街新港社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津　300456

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核黃素含量測定的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

劉丹
天津市濱海新區(qū)塘沽街新港社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津300456

［摘要］實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制在實(shí)驗(yàn)室測定中起到重要作用，該次實(shí)驗(yàn)采用960型熒光光度計(jì)測定核黃素的熒光強(qiáng)度，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，讀出所含核黃素含量的濃度，分別進(jìn)行精密度分析和準(zhǔn)確度分析，進(jìn)而判定實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，精密度符合要求。說明測定VB2藥片中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)方法可靠。

［關(guān)鍵詞］質(zhì)量控制；核黃素；測定

在測定VB2藥片的核黃素含量的過程中，由于存在著由某些比較確定的原因引起的系統(tǒng)誤差和各種隨機(jī)因素引起的隨機(jī)誤差，使測得的結(jié)果不可能和真實(shí)值完全一致，誤差愈小則結(jié)果愈準(zhǔn)確。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，要采取減少誤差的有效措施，并需要用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法將分析數(shù)據(jù)予以適當(dāng)處理，以便能正確地評價分析結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度。

1　材料與方法

1.1材料

以市售吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)的VB2為待測樣品，測定其中核黃素的含量。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器（1）960型熒光光度計(jì)；（2）電子天平。

1.2.2試劑（1）酸性水：取濃硫酸1.5 mL加蒸餾水稀釋至1 000 mL。（2）核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（25 mg/L）精密稱取25 mg的核黃素（分析純），然后用酸性水定容至1 000 mL，用棕色瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，置于冰箱內(nèi)冷藏，備用，每間隔兩天重新配制；（3）核黃素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（1 mg/L）取核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液4 mL，用酸性水稀釋到100 mL，用棕色容量瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，臨用時配制；（4）維生素VB2片待測液取市售吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)的VB2片（5 mg/片），用酸性水稀釋到1 000 mL，置于棕色容量瓶中，外面用黑色塑料袋包裹；（5）低亞硫酸鈉（Na2S2O4）；（6）維生素VB2片吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)。

1.3方法

（1）采用960型熒光光度計(jì)，測定各個比色管中核黃素的熒光強(qiáng)度。如①空白品：20 mL酸性水；②標(biāo)準(zhǔn)品：取10 mL應(yīng)用液稀釋到100 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；③待測品：VB2稀釋到1000 mL（A液），取A液20 mL稀釋到1 000 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；④加標(biāo)樣品：10 mL標(biāo)準(zhǔn)+10 mL樣品，每天做一個批次，每次兩個平行樣，共做20批次。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出所含核黃素含量的濃度，分別進(jìn)行精密度分析和準(zhǔn)確度分析，并繪制準(zhǔn)確度控制圖與精密度控制圖。

（2）操作步驟。①配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：取7個50 mL容量瓶，用黑色塑料袋包裹后分別加入1～7 mL的核黃素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（1 mg/L），用酸性水稀釋到刻度，搖勻。②標(biāo)準(zhǔn)系列的熒光強(qiáng)度測定：嚴(yán)格按程序開啟熒光光度計(jì)后預(yù)熱20 min，依次按照濃度從低到高的順序測量其熒光強(qiáng)度及加入低亞硫酸鈉后的熒光強(qiáng)度。③測定VB2藥片中核黃素含量：a.取8個25 mL的比色管用黑色塑料袋包裹至20 mL刻度線，分別標(biāo)注空白品、標(biāo)準(zhǔn)品、加標(biāo)樣品、待測品，分別取平行樣。b.嚴(yán)格按程序開啟熒光光度計(jì)后預(yù)熱20 min，依次測定各個比色管的熒光強(qiáng)度及加入低壓硫酸鈉后的熒光強(qiáng)度。

2　結(jié)果

2.1核黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度測定值

以標(biāo)準(zhǔn)核黃素濃度為橫坐標(biāo)、熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖1），VB2片待測液的濃度平均值C（VB2）為0.101 mg/L，則原待測液的濃度C（VB2）原=C（VB2）×100 mL/2 mL=5.05 mg/L。則藥片中VB2的含量就為C（VB2）原×1000 mL=5.05 mg/片。由核黃素標(biāo)準(zhǔn)系列得出回歸方程（r=0.997 52 P＜0.001）。

圖1　核黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.220批次不同樣品的濃度

依次測定空白品，標(biāo)準(zhǔn)品，如標(biāo)樣品，待測品，并記錄數(shù)值。見表1。

表1　20批次不同樣品的濃度（mg/L）

2.3精密度分析

通過精密度控制圖分析該次實(shí)驗(yàn)精密度是否符合要求。精密度控制圖的繪制：記錄20批次樣品測定值，求出平均值）、標(biāo)準(zhǔn)差（S），并計(jì)算出中心線是縱坐標(biāo)為的、平行于橫軸的直線；分別為上下控制限；與-2S分別為上下警告限；以測定值為縱坐標(biāo)、樣品測定序號為橫坐標(biāo)繪圖。

2.4準(zhǔn)確度分析

通過待測樣品中核黃素含量的加標(biāo)回收率來判定該次實(shí)驗(yàn)中準(zhǔn)確度是否在控制之中。平均回收率=101.83%。經(jīng)測定1號樣品加標(biāo)回收率為100%，2號樣品加標(biāo)回收率為103.5%，3號樣品加標(biāo)回收率為103.55，4號樣品加標(biāo)回收率為103.3%，5號樣品加標(biāo)回收率為103.4%，6號樣品加標(biāo)回收率為100%，7號樣品加標(biāo)回收率為100%，8號樣品加標(biāo)回收率為100%，9號樣品加標(biāo)回收率為103.3%，10號樣品加標(biāo)回收率為103.4%，11號樣品加標(biāo)回收率為103.4%，12號樣品加標(biāo)回收率為103.4%，13號樣品加標(biāo)回收率為96.5%，14號樣品加標(biāo)回收率為95.6%，15號樣品加標(biāo)回收率為100%，16號樣品加標(biāo)回收率為100%，17號樣品加標(biāo)回收率為104.9%，18號樣品加標(biāo)回收率為105.8%，19號樣品加標(biāo)回收率為103.2%，20號樣品加標(biāo)回收率為103.4%。

3　討論

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制雖然會增加一定的工作量，但它所換來的是數(shù)據(jù)可信性。所以要建立較全面的質(zhì)量控制，把所做的實(shí)驗(yàn)都加以控制，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性就十分有把握。樣品總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.004 6）＜目標(biāo)值W（0.101），加標(biāo)樣總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.004 9）＜目標(biāo)值W（0.005）；標(biāo)準(zhǔn)品總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.005 5）＞目標(biāo)值W（0.005），但標(biāo)準(zhǔn)品總均方S2（0.3×10-4）/目標(biāo)值W2（0.0052）＜F（19，∝），所以加標(biāo)樣和標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的精密度均符合要求，平均加標(biāo)回收率為101.83%，在95%～105%之間。由準(zhǔn)確度控制圖可看出各點(diǎn)的分布情況：18個點(diǎn)的位置在中心線附近、上下控制限的區(qū)域內(nèi)浮動，說明測定工作的質(zhì)量處于較好控制水平；其中有2個點(diǎn)的位置在下警告限之外，但仍在下控制限的區(qū)域內(nèi)，提示可能存在誤差，但樣品測定結(jié)果尚可保留，準(zhǔn)確度符合要求。由精密度控制圖可看出各點(diǎn)的分布情況：20個點(diǎn)的位置在中心線附近、上下警告限之間的區(qū)域內(nèi)浮動，說明測定工作的精密度符合要求。實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的可能影響核黃素?zé)晒鈴?qiáng)度的因素：

①溶劑：該次實(shí)驗(yàn)所用溶劑為酸性水，主要考慮到核黃素極易分解，其在酸性條件下比較穩(wěn)定。

②溫度影響：在該次實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)室配有遮陽窗簾，所用到的容器都已用黑色塑料袋包裹，避免實(shí)驗(yàn)過程中核黃素的分解，避光措施較好。

③激發(fā)光的照射對熒光強(qiáng)度的影響：實(shí)驗(yàn)測定過程中，要在放入比色皿前打開蓋門，放入后立即讀數(shù)，以減少核黃素受激發(fā)光照射的時間，取出后立即關(guān)閉蓋門。

④溶液的pH值：該次實(shí)驗(yàn)所用的酸性水由于所需劑量較大，故如果多次配制易產(chǎn)生誤差，使酸性水的pH有所改變，會影響到測定結(jié)果。因此在該次實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)配好足夠的酸性水，保持酸性水的pH在5.6。由于濃硫酸比較粘稠，吸取濃硫酸時要盡量讓刻度吸管里的濃硫酸全部流下后再移走刻度吸管，以免濃硫酸殘留，影響測定結(jié)果。

⑤樣品濃度的影響：熒光分析應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。

⑥試劑的配制對熒光強(qiáng)度的影響：由于實(shí)驗(yàn)中需要配制大量的溶液，故溶液配制的是否準(zhǔn)確直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。能否準(zhǔn)確無誤地配制溶液，就需要實(shí)驗(yàn)人員具有良好的操作技能及耐性。

4　結(jié)語

由準(zhǔn)確度控制圖、精密度控制圖可看出，實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度、精密度符合要求。說明測定VB2藥片中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)方法可靠、測定結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性。

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［中圖分類號］R927.2

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A

［文章編號］1672-5654（2016）03（b）-0108-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.08.108

收稿日期：（2015-12-19）