張愛妹 萬引

慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)及意義分析

張愛妹 萬引

目的 研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義。方法 隨機(jī)收集COPD患者30例及健康對照組20例，分別檢測兩組T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平。結(jié)果 COPD患者患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 COPD患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂，患者細(xì)胞免疫功能下降。T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡在COPD發(fā)病中起著重要的作用。

慢性阻塞性肺疾病；T淋巴細(xì)胞亞群；細(xì)胞檢測

我國即將步入老年社會(huì)，慢性阻塞性肺疾病是危害老年人健康的常見病、多發(fā)病，由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量。COPD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，隨著研究的深入，近年來對COPD的發(fā)病機(jī)制有了進(jìn)一步的加深，其中T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡在其發(fā)病中起著重要的作用[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察本院2013年9月～2014年10月住院的COPD患者30例，所選病例符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除伴有免疫功能嚴(yán)重疾病、近半月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及免疫調(diào)節(jié)劑。其中男25例，女5例，年齡60～70歲患者15例，70～80歲患者12例，＞80歲患者3例。健康對照組20例，其中男16例，女4例，年齡60～70歲患者12例，70～80歲患者8例。健康對照組與慢性阻塞性肺疾病患者組（COPD組）在一般資料上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 上海匯中細(xì)胞生物科技有限公司的CytoCounter全自動(dòng)可視化細(xì)胞檢測儀。SEMIBLO玻片干燥儀。

1.3 操作準(zhǔn)備 （1）配制磷酸鹽緩沖液：將1包磷酸鹽緩沖液粉劑倒入SemiBio?專用缸中，加水至400 mL刻度線，完全溶解后混勻即可。（2）配制過氧化酶染色液：將1包過氧化酶染色粉倒入SemiBio?專用缸中，再加95%乙醇至500 mL刻度線，充分?jǐn)嚢柚辽?分鐘。（3）配制復(fù)染液：將1包復(fù)染粉倒入SemiBio?專用缸中，再加75%乙醇至500 mL刻度線，充分?jǐn)嚢柚寥芙狻?/p>

1.4 操作方法 （1）靜脈血標(biāo)本：吸取20?L搖勻K2 EDTA抗凝全血加于相對應(yīng)編號(hào)的380?L磷酸鹽緩沖液中，即刻混勻。（2）將濕盒置于水平工作臺(tái)，加室溫水至濕盒底部被完全覆蓋。注意濕盒支架處應(yīng)保持干燥。（3）取出玻片，將包被面朝上，按序?qū)?biāo)簽貼于玻片一端，后將玻片置于濕盒支架上(勿使玻片接觸到水)。（4）吸取5?L稀釋血樣，滴入玻片方框區(qū)域中央。確認(rèn)沒有血樣流出，且框內(nèi)無氣泡，蓋緊盒蓋，室溫（20℃～30℃）孵育40 min。（5）孵育40 min后，將玻片按序插入玻片架。（6）將玻片架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉(zhuǎn)提拉直至玻片呈無色透明。（7）將玻片架即刻放入過氧化酶染色液中，靜置1 min。（8）在步驟7計(jì)時(shí)1 min內(nèi)，將1 mL 2.5%～3.5%過氧化氫溶液加入預(yù)先盛有水（至400 mL刻度線）專用缸中，攪拌均勻后制成新鮮工作溶液。（9）將稍加瀝干的玻片架轉(zhuǎn)入新鮮過氧化氫工作溶液中，靜置4 min。（10）將玻片架轉(zhuǎn)入75%乙醇（400 mL）專用缸中，旋轉(zhuǎn)提拉至干凈，提出后振去多余乙醇。（11）打開玻片架搭扣，將其置于SemiBio?自動(dòng)玻片干燥儀下干燥6 min，確保黑框內(nèi)干燥。（12）將玻片架放入復(fù)染液中，靜置1 min。（13）將玻片架轉(zhuǎn)入純水（500 mL）專用缸中，靜置30秒，其后根據(jù)玻片數(shù)量不等提拉相應(yīng)次數(shù)，提出后振去多余水分。注意：玻片數(shù)＜15片，提拉3次；玻片數(shù)≥15片，提拉5次。（14）打開玻片架搭扣，將其置于

SemiBio?自動(dòng)玻片干燥儀下吹干。注意：為縮短干燥時(shí)間，待玻片黑框內(nèi)吹干后，可用紙擦干周圍水分。（15）通過SemiBio?

全自動(dòng)可視化細(xì)胞檢測儀，現(xiàn)場或異地，隨時(shí)進(jìn)行細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)、分析。注意：若細(xì)胞顏色淡而影響軟件識(shí)別，請重復(fù)步驟

12～14。

1.5 觀察指標(biāo) 檢測COPD患者及健康對照組外周血中

T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2組患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值比較（x±s）

3 討論

慢性阻塞性肺疾病是一種破壞性的肺部疾病，是以不完全可逆的氣流受限為特征的疾病,氣流受限通常呈進(jìn)行性發(fā)展并與肺對有害顆?；驓怏w的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。COPD是一種可以預(yù)防和治療的慢性氣道炎癥性疾病。該病患病人數(shù)眾多，是目前全球第四大死因，且發(fā)病率仍不斷上升[2]。除目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制外，近年來越來越多的研究顯示自身免疫可能是COPD發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制。T淋巴細(xì)胞是人體內(nèi)主要的免疫功能細(xì)胞，主要分為CD4、CD8兩個(gè)亞群。本資料顯示COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組,與早期研究報(bào)告一致[3-6]。CD3+是人體總的T淋巴細(xì)胞，CD4+為輔助性T淋巴細(xì)胞，調(diào)控免疫反應(yīng)，直接反應(yīng)人體的免疫狀況，CD4+／CD8+比值降低是機(jī)體免疫功能下降的重要標(biāo)志，可反應(yīng)疾病的嚴(yán)重程度[7]。本資料中，COPD患者CD3+、CD4+下降，CD8+增高，說明CD3+下降主要由CD4+下降所致，外周血中成熟T淋巴細(xì)胞總數(shù)下降。CD4+下降及CD4+／CD8+比值降低，說明COPD患者免疫功能下降，繼發(fā)感染風(fēng)險(xiǎn)性增加。故臨床上可將CD4+／CD8+比值測定來反應(yīng)COPD患者的嚴(yán)重程度及預(yù)后。目前COPD治療主要以抗感染、解痙平喘等傳統(tǒng)治療為主，隨著患者年齡增大及人體免疫力持續(xù)下降，更易反復(fù)感染導(dǎo)致發(fā)作加重，而COPD反復(fù)急性加重將導(dǎo)致患者免疫力進(jìn)一步下降，形成惡性循環(huán)，增加患者痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，提高人體自身免疫，預(yù)防COPD發(fā)生及進(jìn)展引起了眾多研究者的重視，我們期待越來越多的研究者投入到此項(xiàng)研究中來，為我們廣大的COPD患者帶來新的希望。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.34.034

江西 330006 江西省胸科醫(yī)院呼吸二科（張愛妹 萬引）