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        慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)及意義分析

        2016-06-09 09:19:15張愛妹萬引
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2016年34期

        張愛妹 萬引

        慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)及意義分析

        張愛妹 萬引

        目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義。方法 隨機(jī)收集COPD患者30例及健康對照組20例,分別檢測兩組T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平。結(jié)果 COPD患者患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組,CD8+高于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 COPD患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂,患者細(xì)胞免疫功能下降。T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡在COPD發(fā)病中起著重要的作用。

        慢性阻塞性肺疾病;T淋巴細(xì)胞亞群;細(xì)胞檢測

        我國即將步入老年社會(huì),慢性阻塞性肺疾病是危害老年人健康的常見病、多發(fā)病,由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展,嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量。COPD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了,隨著研究的深入,近年來對COPD的發(fā)病機(jī)制有了進(jìn)一步的加深,其中T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)失衡在其發(fā)病中起著重要的作用[1]。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 觀察本院2013年9月~2014年10月住院的COPD患者30例,所選病例符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn),并排除伴有免疫功能嚴(yán)重疾病、近半月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及免疫調(diào)節(jié)劑。其中男25例,女5例,年齡60~70歲患者15例,70~80歲患者12例,>80歲患者3例。健康對照組20例,其中男16例,女4例,年齡60~70歲患者12例,70~80歲患者8例。健康對照組與慢性阻塞性肺疾病患者組(COPD組)在一般資料上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 上海匯中細(xì)胞生物科技有限公司的CytoCounter全自動(dòng)可視化細(xì)胞檢測儀。SEMIBLO玻片干燥儀。

        1.3 操作準(zhǔn)備 (1)配制磷酸鹽緩沖液:將1包磷酸鹽緩沖液粉劑倒入SemiBio?專用缸中,加水至400 mL刻度線,完全溶解后混勻即可。(2)配制過氧化酶染色液:將1包過氧化酶染色粉倒入SemiBio?專用缸中,再加95%乙醇至500 mL刻度線,充分?jǐn)嚢柚辽?分鐘。(3)配制復(fù)染液:將1包復(fù)染粉倒入SemiBio?專用缸中,再加75%乙醇至500 mL刻度線,充分?jǐn)嚢柚寥芙狻?/p>

        1.4 操作方法 (1)靜脈血標(biāo)本:吸取20?L搖勻K2 EDTA抗凝全血加于相對應(yīng)編號(hào)的380?L磷酸鹽緩沖液中,即刻混勻。(2)將濕盒置于水平工作臺(tái),加室溫水至濕盒底部被完全覆蓋。注意濕盒支架處應(yīng)保持干燥。(3)取出玻片,將包被面朝上,按序?qū)?biāo)簽貼于玻片一端,后將玻片置于濕盒支架上(勿使玻片接觸到水)。(4)吸取5?L稀釋血樣,滴入玻片方框區(qū)域中央。確認(rèn)沒有血樣流出,且框內(nèi)無氣泡,蓋緊盒蓋,室溫(20℃~30℃)孵育40 min。(5)孵育40 min后,將玻片按序插入玻片架。(6)將玻片架即刻放入磷酸鹽緩沖液中,旋轉(zhuǎn)提拉直至玻片呈無色透明。(7)將玻片架即刻放入過氧化酶染色液中,靜置1 min。(8)在步驟7計(jì)時(shí)1 min內(nèi),將1 mL 2.5%~3.5%過氧化氫溶液加入預(yù)先盛有水(至400 mL刻度線)專用缸中,攪拌均勻后制成新鮮工作溶液。(9)將稍加瀝干的玻片架轉(zhuǎn)入新鮮過氧化氫工作溶液中,靜置4 min。(10)將玻片架轉(zhuǎn)入75%乙醇(400 mL)專用缸中,旋轉(zhuǎn)提拉至干凈,提出后振去多余乙醇。(11)打開玻片架搭扣,將其置于SemiBio?自動(dòng)玻片干燥儀下干燥6 min,確保黑框內(nèi)干燥。(12)將玻片架放入復(fù)染液中,靜置1 min。(13)將玻片架轉(zhuǎn)入純水(500 mL)專用缸中,靜置30秒,其后根據(jù)玻片數(shù)量不等提拉相應(yīng)次數(shù),提出后振去多余水分。注意:玻片數(shù)<15片,提拉3次;玻片數(shù)≥15片,提拉5次。(14)打開玻片架搭扣,將其置于

        SemiBio?自動(dòng)玻片干燥儀下吹干。注意:為縮短干燥時(shí)間,待玻片黑框內(nèi)吹干后,可用紙擦干周圍水分。(15)通過SemiBio?

        全自動(dòng)可視化細(xì)胞檢測儀,現(xiàn)場或異地,隨時(shí)進(jìn)行細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)、分析。注意:若細(xì)胞顏色淡而影響軟件識(shí)別,請重復(fù)步驟

        12~14。

        1.5 觀察指標(biāo) 檢測COPD患者及健康對照組外周血中

        T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組,CD8+高于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 2組患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值比較(x±s)

        3 討論

        慢性阻塞性肺疾病是一種破壞性的肺部疾病,是以不完全可逆的氣流受限為特征的疾病,氣流受限通常呈進(jìn)行性發(fā)展并與肺對有害顆?;驓怏w的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。COPD是一種可以預(yù)防和治療的慢性氣道炎癥性疾病。該病患病人數(shù)眾多,是目前全球第四大死因,且發(fā)病率仍不斷上升[2]。除目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制外,近年來越來越多的研究顯示自身免疫可能是COPD發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制。T淋巴細(xì)胞是人體內(nèi)主要的免疫功能細(xì)胞,主要分為CD4、CD8兩個(gè)亞群。本資料顯示COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組,CD8+高于健康對照組,與早期研究報(bào)告一致[3-6]。CD3+是人體總的T淋巴細(xì)胞,CD4+為輔助性T淋巴細(xì)胞,調(diào)控免疫反應(yīng),直接反應(yīng)人體的免疫狀況,CD4+/CD8+比值降低是機(jī)體免疫功能下降的重要標(biāo)志,可反應(yīng)疾病的嚴(yán)重程度[7]。本資料中,COPD患者CD3+、CD4+下降,CD8+增高,說明CD3+下降主要由CD4+下降所致,外周血中成熟T淋巴細(xì)胞總數(shù)下降。CD4+下降及CD4+/CD8+比值降低,說明COPD患者免疫功能下降,繼發(fā)感染風(fēng)險(xiǎn)性增加。故臨床上可將CD4+/CD8+比值測定來反應(yīng)COPD患者的嚴(yán)重程度及預(yù)后。目前COPD治療主要以抗感染、解痙平喘等傳統(tǒng)治療為主,隨著患者年齡增大及人體免疫力持續(xù)下降,更易反復(fù)感染導(dǎo)致發(fā)作加重,而COPD反復(fù)急性加重將導(dǎo)致患者免疫力進(jìn)一步下降,形成惡性循環(huán),增加患者痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此,提高人體自身免疫,預(yù)防COPD發(fā)生及進(jìn)展引起了眾多研究者的重視,我們期待越來越多的研究者投入到此項(xiàng)研究中來,為我們廣大的COPD患者帶來新的希望。

        [1] BarceloB,Pons J,Ferrer JM,et al.Phenotypic characterisati-on of T-lymphocytes in COPD: abnormal CD4+CD25+regula-tory T-lymphocyte response to tobacco smoking[J].EuropeanRespiratory Journal,2008,31(3): 555-562.

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        [4] 黃美建,冷報(bào)浪,梁斌,等.慢性阻塞性肺疾病不同病期細(xì)胞免疫功能德國臨床研究[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2004(8):664-665.

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        10.3969/j.issn.1009-4393.2016.34.034

        江西 330006 江西省胸科醫(yī)院呼吸二科(張愛妹 萬引)

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