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        RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義

        2016-06-09 12:54:05曾丹華金仁安云婷
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2016年31期
        關(guān)鍵詞:玻片性癌腹水

        曾丹 華金仁 安云婷

        RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義

        曾丹 華金仁 安云婷

        目的 對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討,為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息。方法 選擇手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組,選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對照組,采取免疫組化法對RBM 3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測,并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 對比發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測結(jié)果發(fā)生顯著升高(P<0.05);在FIGOⅢ~Ⅳ期中的表達(dá)陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05);低分化陽性率高于高、中分化(P<0.05);有腹水者表達(dá)陽性率高于無腹水組(P<0.05)。結(jié)論 RBM 3對卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進(jìn)作用,在今后的臨床工作中,應(yīng)對其給予足夠的重視。

        RBM 3;卵巢上皮性癌;免疫組成;臨床意義

        本次研究中,出于對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討,為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息的目的,對卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進(jìn)行了RBM 3表達(dá)水平檢測,并對檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2010年1月~2013年12月在江西省婦幼保健院收治的手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組。所有石蠟組織標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診[1]。所有對象均未接受過放、化療及手術(shù)處理。對照組分別為同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例(子宮肌瘤同時(shí)行附件切除的卵巢組織,術(shù)后病理證實(shí)為正常卵巢組織)。卵巢癌患者年齡32~76歲,平均(51.1±13.2)歲,F(xiàn)IGO分期情況:Ⅰ~Ⅱ期者18例,Ⅲ~Ⅳ期者32例。病理分級(jí)情況:高、中分化者16例,低分化者34例。有腹水者19例,無腹水者31例。有淋巴轉(zhuǎn)移者21例,無淋巴轉(zhuǎn)移者29例。

        1.2 方法

        1.2.1 研究方法 選擇手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組,選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對照組,采取免疫組化法對RBM 3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測,并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

        1.2.2 檢測方法

        (1)蠟塊篩選的步驟:從資料庫中,選取合適的病例,登記每例病例所有玻片號(hào)。從玻片庫中,找到每例病例的所有玻片,在顯微鏡下篩選出最適合做免疫組化的玻片,并登記所選玻片號(hào)。根據(jù)所登記的玻片號(hào),從蠟塊庫中,找到相應(yīng)的蠟塊,用于制作組織切片。

        (2)高壓抗原修復(fù)操作方法:常規(guī)組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化后,浸泡于蒸餾水中待用。取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液(800~1 500 mL)于壓力鍋中,大火加熱直至沸騰;將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋,扣上壓力閥,繼續(xù)加熱至噴氣,從噴氣開始計(jì)時(shí),1~2 min后,壓力鍋離開熱源,冷卻至室溫(稍冷后,可在自來水籠頭下加速冷卻),取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS(pH=7.2~7.4)沖洗2次,每次3 min。

        (3)免疫組化染色步驟:將切片脫蠟后沖洗干凈,放入塑料欄裝好,并用蒸餾水沖洗一遍。在塑料欄中倒入檸檬酸液后放入微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。從微波爐中取出冷卻15 min后,把檸檬酸液倒掉,然后用蒸餾水沖洗1遍,將玻片堆放在試劑盒中畫圈,畫圈后再用PBS沖洗1遍。沖洗后滴加過氧化氫(即去離子水),室溫下孵育10 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液,每張切片分別加一抗,室溫下孵育一中午。PBS沖洗3×3’遍。加增強(qiáng)劑A(1 Polymer Helper),室溫下孵育20 min。PBS沖洗3×3’遍。加二抗(2 Polymer HRPGOat antl-mouse & Rabblt lgG),室溫下孵育30 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液,每張切片加2滴或100 μL新鮮配制的DAB。PBS沖洗1×3’遍。蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,0.1%鹽酸分化,自來水沖洗,PBS沖洗返藍(lán)。蒸餾水或自來水沖洗,切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥后用(二甲苯透明)中性樹膠封片。

        1.3 結(jié)果評價(jià) RBM 3染色為細(xì)胞核陽性, 故以胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細(xì)胞。參照Toula Bouras評分標(biāo)準(zhǔn): 在

        20倍物鏡下計(jì)數(shù)500~1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞,陽性細(xì)胞≤10%為1分、>10%~50%為2分、>50%~75%為3分、>75%為4分。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn):無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。兩種得分相加后得1分為陰性、2~3分為陽性(+)、4~5分為較強(qiáng)陽性(++),6~7分為強(qiáng)陽性(+++)[2]。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。各組間樣本率的差異采用四格表資料的Fisher確切概率法處理,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 3組受試者中RBM 3表達(dá)情況比較 對比發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽性率為76.00%,在良性卵巢上皮腫瘤中

        RBM 3表達(dá)陽性率為40.00%,在正常卵巢組織中RBM 3表達(dá)陽性率為25.00%,顯然,在卵巢上皮性癌中RBM 3表達(dá)陽性率較良性卵巢腫瘤、正常卵巢組織發(fā)生顯著升高(P<0.05)。見表1。

        表1 3組受試者中RBM 3表達(dá)情況比較(n)

        2.2 卵巢癌患者不同F(xiàn)IGO分期者中RBM 3的表達(dá)情況比較 FIGOⅠ~Ⅱ期者RBM 3表達(dá)陽性率為66.67%(12/18),F(xiàn)IGOⅢ~Ⅳ期者RBM 3表達(dá)陽性率為81.25%(26/32)。顯然在FIGOⅢ~Ⅳ期中的表達(dá)陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05)。

        2.3 卵巢癌患者不同病理分級(jí)者中RBM 3的表達(dá)情況比較 病理分級(jí)為低分化者RBM 3表達(dá)陽性率為82.35%(28/ 34),高、中分化者RBM 3表達(dá)陽性率為62.50%(10/16),顯然病理分級(jí)低分化陽性率高于高、中分化(P<0.05)。

        2.4 卵巢癌患者有無腹水者RBM 3的表達(dá)情況比較 有腹水者RBM 3表達(dá)陽性率為84.21%(16/19),無腹水者RBM 3表達(dá)陽性率為70.96%(22/31),顯然有腹水者表達(dá)陽性率高于無腹水組(P<0.05)。

        3 討論

        研究證實(shí)[3-4],RBM 3可能通過改變細(xì)胞微小RNA水平控制球蛋白的表達(dá)水平來影響腫瘤的進(jìn)展。此外,RBM 3被認(rèn)為是一種潛在的原癌基因,有下以幾個(gè)原因:(1)RBM 3的表達(dá)水平與腫瘤的分期有關(guān),表明其可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān);(2)RBM 3沉默增加了G2/M期細(xì)胞的數(shù)量,并最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡;(3)RBM 3可以提高環(huán)氧化酶-2、IL-8和血管內(nèi)皮生長因子的

        mRNA的穩(wěn)定與翻譯。眾所周知,mRNA的翻譯水平的改變在細(xì)胞轉(zhuǎn)化與腫瘤發(fā)生中起重要作用,RBM 3直接與mRNA結(jié)合,可能改變mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu),影響起始因子和核糖體亞基的訪問,并調(diào)節(jié)他們的激酶的潛在活性。探討冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白的分子調(diào)控機(jī)制非常重要,因?yàn)樗鼈兊目赡芘c更廣泛的生理功能和多種人類疾病的生物學(xué)進(jìn)程有關(guān),包括腫瘤的發(fā)生。

        本次研究中,出于對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討,為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息的目的,對卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進(jìn)行了RBM 3表達(dá)水平檢測,并對檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測結(jié)果發(fā)生顯著升高,在

        FIGOⅢ-Ⅳ期中的表達(dá)陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期,低分化陽性率高于高、中分化,有腹水者表達(dá)陽性率高于無腹水組。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道結(jié)果相似,由此證實(shí),RBM 3在卵巢癌組織中呈現(xiàn)出異常表達(dá),證實(shí)其可能參與到卵巢癌血管生成,對卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進(jìn)作用,在今后的臨床工作中,應(yīng)對其給予足夠的重視。

        [1] Jogi A,Brennan DJ,Ryden L,et al.Nuclear expression of the RNA-binding protein RBM3 is associated with an improved clinical outcome in breast cancer[J].Mod Pathol,2009,22(12):1564-1574.

        [2] Ehlén A,Brennan DJ,Nodin B,et al.Expression of the RNA-binding protein RBM 3 is associated with a favourable prognosis and cisplatin sensitivity in epithelial ovarian cancer[J].Transl Med,2010,20(8):78.

        [3] Jonsson L,Bergman J,Nodin B,et al.Low RBM 3 protein expression correlates with tumour progression and poor prognosis in malignant melanoma:an analysis of 215 cases from the Malm? Diet and Cancer Study[J].J Transl Med,2011(9):114.

        [4] Boman K,Segersten U,Ahlgren G,et al.Decreased expression of RNA-binding motif protein 3 correlates with tumour progression and poor prognosis in urothelial bladder cancer[J].BMC Urol,2013(13):17

        [5] Jonsson L,Gaber A,Ulmert D,et al.High RBM 3 expression in prostate cancer independently predicts a reduced risk of biochemical recurrence and disease progression[J].Diagn Pathol,2011(6):91.

        [6] Zhang HT,Zhang ZW,Xue JH,et al.Differential expression of the RNA-binding motif protein 3 in human astrocytoma[J].Chin Med J (Engl),2013,126(10):1948-1952.

        10.3969/j.issn.1009-4393.2016.31.009

        江西 330006 江西省婦幼保健院 (曾丹 華金仁 安云婷)

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