曾丹 華金仁 安云婷

RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達及臨床意義

曾丹 華金仁 安云婷

目的 對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達及臨床意義進行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價值的參考信息。方法 選擇手術切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標本50例為實驗組，選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對照組，采取免疫組化法對RBM 3的表達水平進行檢測，并對檢測結果進行統(tǒng)計分析。結果 對比發(fā)現(xiàn)，在實驗組中RBM 3表達陽性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測結果發(fā)生顯著升高（P＜0.05）；在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表達陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）；低分化陽性率高于高、中分化（P＜0.05）；有腹水者表達陽性率高于無腹水組（P＜0.05）。結論 RBM 3對卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進作用，在今后的臨床工作中，應對其給予足夠的重視。

RBM 3；卵巢上皮性癌；免疫組成；臨床意義

本次研究中，出于對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達及臨床意義進行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價值的參考信息的目的，對卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進行了RBM 3表達水平檢測，并對檢測結果進行了統(tǒng)計分析，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月～2013年12月在江西省婦幼保健院收治的手術切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標本50例為實驗組。所有石蠟組織標本均經(jīng)病理學確診[1]。所有對象均未接受過放、化療及手術處理。對照組分別為同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例（子宮肌瘤同時行附件切除的卵巢組織，術后病理證實為正常卵巢組織）。卵巢癌患者年齡32～76歲，平均（51.1±13.2）歲，F(xiàn)IGO分期情況：Ⅰ～Ⅱ期者18例，Ⅲ～Ⅳ期者32例。病理分級情況：高、中分化者16例，低分化者34例。有腹水者19例，無腹水者31例。有淋巴轉移者21例，無淋巴轉移者29例。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 選擇手術切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標本50例為實驗組，選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對照組，采取免疫組化法對RBM 3的表達水平進行檢測，并對檢測結果進行統(tǒng)計分析。

1.2.2 檢測方法

（1）蠟塊篩選的步驟：從資料庫中，選取合適的病例，登記每例病例所有玻片號。從玻片庫中，找到每例病例的所有玻片，在顯微鏡下篩選出最適合做免疫組化的玻片，并登記所選玻片號。根據(jù)所登記的玻片號，從蠟塊庫中，找到相應的蠟塊，用于制作組織切片。

（2）高壓抗原修復操作方法：常規(guī)組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化后，浸泡于蒸餾水中待用。取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液（800～1 500 mL）于壓力鍋中，大火加熱直至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴氣，從噴氣開始計時，1～2 min后，壓力鍋離開熱源，冷卻至室溫（稍冷后，可在自來水籠頭下加速冷卻），取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS（pH=7.2～7.4）沖洗2次，每次3 min。

（3）免疫組化染色步驟：將切片脫蠟后沖洗干凈，放入塑料欄裝好，并用蒸餾水沖洗一遍。在塑料欄中倒入檸檬酸液后放入微波爐中進行抗原修復。從微波爐中取出冷卻15 min后，把檸檬酸液倒掉，然后用蒸餾水沖洗1遍，將玻片堆放在試劑盒中畫圈，畫圈后再用PBS沖洗1遍。沖洗后滴加過氧化氫（即去離子水），室溫下孵育10 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液，每張切片分別加一抗，室溫下孵育一中午。PBS沖洗3×3’遍。加增強劑A（1 Polymer Helper），室溫下孵育20 min。PBS沖洗3×3’遍。加二抗（2 Polymer HRPGOat antl-mouse & Rabblt lgG），室溫下孵育30 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液，每張切片加2滴或100 μL新鮮配制的DAB。PBS沖洗1×3’遍。蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，0.1%鹽酸分化，自來水沖洗，PBS沖洗返藍。蒸餾水或自來水沖洗，切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥后用（二甲苯透明）中性樹膠封片。

1.3 結果評價 RBM 3染色為細胞核陽性, 故以胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細胞。參照Toula Bouras評分標準: 在

20倍物鏡下計數(shù)500～1 000個腫瘤細胞，陽性細胞≤10%為1分、＞10%～50%為2分、＞50%～75%為3分、＞75%為4分。染色強度評分標準:無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。兩種得分相加后得1分為陰性、2～3分為陽性(+)、4～5分為較強陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)[2]。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行處理。各組間樣本率的差異采用四格表資料的Fisher確切概率法處理,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 3組受試者中RBM 3表達情況比較 對比發(fā)現(xiàn)，在實驗組中RBM 3表達陽性率為76.00%，在良性卵巢上皮腫瘤中

RBM 3表達陽性率為40.00%，在正常卵巢組織中RBM 3表達陽性率為25.00%，顯然，在卵巢上皮性癌中RBM 3表達陽性率較良性卵巢腫瘤、正常卵巢組織發(fā)生顯著升高（P＜0.05）。見表1。

表1 3組受試者中RBM 3表達情況比較(n)

2.2 卵巢癌患者不同F(xiàn)IGO分期者中RBM 3的表達情況比較 FIGOⅠ～Ⅱ期者RBM 3表達陽性率為66.67%（12/18），F(xiàn)IGOⅢ～Ⅳ期者RBM 3表達陽性率為81.25%（26/32）。顯然在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表達陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）。

2.3 卵巢癌患者不同病理分級者中RBM 3的表達情況比較 病理分級為低分化者RBM 3表達陽性率為82.35%（28/ 34），高、中分化者RBM 3表達陽性率為62.50%（10/16），顯然病理分級低分化陽性率高于高、中分化（P＜0.05）。

2.4 卵巢癌患者有無腹水者RBM 3的表達情況比較 有腹水者RBM 3表達陽性率為84.21%（16/19），無腹水者RBM 3表達陽性率為70.96%（22/31），顯然有腹水者表達陽性率高于無腹水組（P＜0.05）。

3 討論

研究證實[3-4]，RBM 3可能通過改變細胞微小RNA水平控制球蛋白的表達水平來影響腫瘤的進展。此外，RBM 3被認為是一種潛在的原癌基因，有下以幾個原因：（1）RBM 3的表達水平與腫瘤的分期有關，表明其可能與腫瘤的發(fā)生有關；（2）RBM 3沉默增加了G2/M期細胞的數(shù)量，并最終導致細胞凋亡；（3）RBM 3可以提高環(huán)氧化酶-2、IL-8和血管內(nèi)皮生長因子的

mRNA的穩(wěn)定與翻譯。眾所周知，mRNA的翻譯水平的改變在細胞轉化與腫瘤發(fā)生中起重要作用，RBM 3直接與mRNA結合，可能改變mRNA的二級結構，影響起始因子和核糖體亞基的訪問，并調節(jié)他們的激酶的潛在活性。探討冷誘導RNA結合蛋白的分子調控機制非常重要，因為它們的可能與更廣泛的生理功能和多種人類疾病的生物學進程有關，包括腫瘤的發(fā)生。

本次研究中，出于對RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達及臨床意義進行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價值的參考信息的目的，對卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進行了RBM 3表達水平檢測，并對檢測結果進行了統(tǒng)計分析，結果發(fā)現(xiàn)，在實驗組中RBM 3表達陽性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測結果發(fā)生顯著升高，在

FIGOⅢ-Ⅳ期中的表達陽性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期，低分化陽性率高于高、中分化，有腹水者表達陽性率高于無腹水組。這一結果與相關文獻[5-6]報道結果相似，由此證實，RBM 3在卵巢癌組織中呈現(xiàn)出異常表達，證實其可能參與到卵巢癌血管生成，對卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進作用，在今后的臨床工作中，應對其給予足夠的重視。

[1] Jogi A,Brennan DJ,Ryden L,et al.Nuclear expression of the RNA-binding protein RBM3 is associated with an improved clinical outcome in breast cancer[J].Mod Pathol,2009,22(12):1564-1574.

[2] Ehlén A,Brennan DJ,Nodin B,et al.Expression of the RNA-binding protein RBM 3 is associated with a favourable prognosis and cisplatin sensitivity in epithelial ovarian cancer[J].Transl Med,2010,20（8）:78.

[3] Jonsson L,Bergman J,Nodin B,et al.Low RBM 3 protein expression correlates with tumour progression and poor prognosis in malignant melanoma:an analysis of 215 cases from the Malm? Diet and Cancer Study[J].J Transl Med,2011(9):114.

[4] Boman K,Segersten U,Ahlgren G,et al.Decreased expression of RNA-binding motif protein 3 correlates with tumour progression and poor prognosis in urothelial bladder cancer[J].BMC Urol,2013(13):17

[5] Jonsson L,Gaber A,Ulmert D,et al.High RBM 3 expression in prostate cancer independently predicts a reduced risk of biochemical recurrence and disease progression[J].Diagn Pathol,2011(6):91.

[6] Zhang HT,Zhang ZW,Xue JH,et al.Differential expression of the RNA-binding motif protein 3 in human astrocytoma[J].Chin Med J (Engl),2013,126(10):1948-1952.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.31.009

江西 330006 江西省婦幼保健院 （曾丹 華金仁 安云婷）