陜西省榆林市第二醫(yī)院(榆林 719000)

李冠雄　曲敬琨△　趙　旭　馬任遠(yuǎn)　楊中民　房宏林　段小藝△　王健生△▲

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·臨床研究·

鈉尿素受體A在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義*

陜西省榆林市第二醫(yī)院(榆林 719000)

李冠雄曲敬琨△趙旭馬任遠(yuǎn)楊中民房宏林段小藝△王健生△▲

摘要目的：觀察乳腺癌組織中鈉尿素受體A(NPRA)的表達(dá)及與臨床病理資料間的關(guān)系。方法：采用免疫組化方法對符合條件的乳腺癌50例及癌旁正常組織46例進(jìn)行NPRA染色，并結(jié)合臨床病理資料分析兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果：符合納入標(biāo)準(zhǔn)的乳腺癌組織50例，癌旁正常組織46例；NPRA在TNM I和II期中NPRA蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率為36.8%(7/19)，在TNM III期和Ⅳ期中NPRA的強(qiáng)陽性表達(dá)率為80.6%(25/31)，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。NPRA蛋白表達(dá)水平與患者的發(fā)病年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、腫瘤直徑大小間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：NPRA在乳腺癌組織中高表達(dá)，且與患者TNM分期相關(guān)。

主題詞 乳腺腫瘤/病理學(xué)@鈉尿素受體A腫瘤分期

研究發(fā)現(xiàn)，之前長期被認(rèn)為跟心臟功能及血壓調(diào)節(jié)有關(guān)的鈉尿素受體A(Natriuretic peptide receptor A，NPRA)在多種人類惡性腫瘤細(xì)胞系及組織內(nèi)都有不同程度的表達(dá)，并為一種癌基因參與了黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[1-4]。我們前期在胃癌組織中也觀察到NPRA高表達(dá)[5]。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，有關(guān)乳腺癌組織內(nèi)NPRA蛋白的表達(dá)情況尚未見報(bào)道。我們應(yīng)用免疫組化方法對乳腺癌組織中的NPRA的表達(dá)進(jìn)行了檢測，并與患者的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1材料收集陜西榆林市第二醫(yī)院2007年1月至2009年12月期間手術(shù)切除的組織病理石蠟標(biāo)本共計(jì)130例，其中乳腺癌組織80例，癌旁組織50例。入組標(biāo)準(zhǔn)：①女性患者；②被病理醫(yī)師確診為乳腺導(dǎo)管癌；③術(shù)前均未行化學(xué)治療、放射治療及免疫治療；④病例資料和隨訪資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①男性患者；②所取的癌旁組織已經(jīng)被腫瘤侵犯；③組織為其他亞型的乳腺癌標(biāo)本。

2免疫組化方法石蠟組織常規(guī)切片，按試劑說明行免疫組化染色，以PBS代替一抗的切片作為陰性對照，使用Motic公司顯微鏡觀察結(jié)果。染色陽性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒，每張標(biāo)本隨機(jī)選取10個視野，各視野采用半定量評分方法。依據(jù)染色強(qiáng)度積分，分為4個等級：0分：無著色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。參照陽性細(xì)胞率評分：0分：無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞<10%；1分：陽性細(xì)胞10～25%；2分：陽性細(xì)胞25～50%；3分:陽性細(xì)胞50～75%；4分：陽性細(xì)胞>75%。 將染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率的積分相乘作為最終判定結(jié)果：0分為陰性(-)，1～4為弱陽性(+)；5～8為陽性()；9～12為強(qiáng)陽性()。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 一般資料 按入組標(biāo)準(zhǔn)篩選后有滿足要求的乳腺癌組織50例，癌旁組織46例?；颊吣挲g26～77歲，中位年齡49歲，其中<60歲40例(80.0%)，≥60歲10例(20.0%)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的40例(80.0%)，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的10例(20.0%)。組織學(xué)分化程度：高分化的11例(22.0%)，中分化的23 例(46.0%)，低分化的16例(32.0%)。按國際TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)(2009年版) 分期后，I期0例，II期19例(38.0%)，III期的29例(58.0%)Ⅳ期2例(4.0%)。腫瘤部位：外上象限35例(70.0%)，外下象限8例(16.0%)，內(nèi)上象限4例(8.0%)，內(nèi)下象限3例(6.0%)。腫瘤直徑：2～5cm 45例(90.0%)，>5cm 5例(10.0%)。

2免疫組化染色結(jié)果在乳腺導(dǎo)管癌組織的細(xì)胞中可見到NPRA蛋白密集性的分布在細(xì)胞質(zhì)與胞膜中，而在癌旁組織的上皮細(xì)胞中很少發(fā)現(xiàn)有NPRA蛋白的表達(dá)，陰性對照切片中也很少發(fā)現(xiàn)黃色的表達(dá)。在乳腺導(dǎo)管癌組織中NPRA蛋白的強(qiáng)陽性率約為64%，與癌旁組織中NPRA蛋白的強(qiáng)陽性率(26.1%)相比明顯增高，且組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1，附圖。

表1　NPRA蛋白在人乳腺導(dǎo)管癌組織與

注：與癌旁組織比較，*P<0.05

附圖a： 乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞中可見呈密集分布的棕黃色顆粒(SP法 200×)；b：乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞中可見密集分布的棕黃色或淡黃色顆粒，且主要位于細(xì)胞質(zhì)和胞膜中，胞核基本不染色(SP法 400×)；c：癌旁組織中呈淡黃色(SP法 200×)；d：陰性對照(SP法 200×)

3NPRA在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系NPRA蛋白表達(dá)水平與患者的發(fā)病年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、腫瘤部位、腫瘤直徑大小等臨床特征無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NPRA在TNM I和Ⅱ期中NPRA蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率為36.8%(7/19)，在TNM Ⅲ期和Ⅳ期中NPRA的強(qiáng)陽性表達(dá)率為80.6%(25/31)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.810，P<0.05),見表2。

表2　人乳腺導(dǎo)管癌組織中NPRA的表達(dá)與

討論

NPRA作為心房鈉尿肽受體家族(NPRA、NPRB及NPRC)中的一員，具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)酶激活活性。NPRA基因位于1號染色體長臂2區(qū)l帶和2帶(1q21～q22)，編碼一條含有約1057個氨基酸的多肽，包括四個結(jié)構(gòu)域，通過與ANP或BNP的結(jié)合進(jìn)而發(fā)揮其病理和生理作用[1]。以往對NPRA的研究大多集中在心血管系統(tǒng)，主要與高血壓、心肌肥大、心力衰竭等有關(guān)。有研究顯示，NPRA在人類多種癌組織或細(xì)胞中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與癌惡性程度有關(guān)，剔除NPRA基因可以抑制前列腺癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌等腫瘤的形成[2-4]。本課題組前期在胃癌的研究中也觀察到癌組織中NPRA高表達(dá)[5]。陳華云等在胃癌細(xì)胞株中檢測到NPRA mRNA表達(dá)上調(diào)[6]。本研究觀察到，NPRA在人乳腺導(dǎo)管癌組織中明顯高表達(dá)，且主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜內(nèi)，NPRA在人乳腺導(dǎo)管癌中的強(qiáng)陽性率為64%，與癌旁組織中的強(qiáng)陽性率(26.1%)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這與Wang X等在前列腺癌中的研究類似[4]。

王等發(fā)現(xiàn)NPRA在正常人體內(nèi)和良性前列腺增生患者增生細(xì)胞中的表達(dá)非常低，顯著低于前列腺癌和前列腺高級上皮內(nèi)瘤變組織，同樣在低級的上皮內(nèi)瘤變中也是如此，這提示NPRA在腫瘤的發(fā)展過程中有一定的促進(jìn)作用[4]。本研究結(jié)果顯示，NPRA在乳腺導(dǎo)管癌組織中高表達(dá)并與患者的TNM分期相關(guān)，即TNM分期越高的患者，其癌組織內(nèi)NPRA基因表達(dá)越高，這提示NPRA在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著促進(jìn)作用，NPRA可以作為判斷預(yù)后的一個分子指標(biāo)。

有研究表明，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，NPRA作為癌基因可能是通過促進(jìn)炎癥的發(fā)生，調(diào)控抑癌基因pRb和VEGF的表達(dá)而發(fā)揮作用，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探索[7]。調(diào)控NPRA的表達(dá)可使得ANP分子與血管壁黏性降低，從而阻止脫落的癌細(xì)胞黏附在血管壁上，降低腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，通過對NPRA基因及其上下游調(diào)控因子的進(jìn)一步研究，將有助于找到治療腫瘤的有效分子生物靶點(diǎn)，為臨床上有效治療腫瘤、降低腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、改善預(yù)后開辟一條新的途徑。

參考文獻(xiàn)

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(收稿：2015-05-17)

Expression of natriuretic peptide receptor A and its clinical significance in the breast carcinomas

Department of General Surgery, The Second Hospital of Yulin (Yulin719000)

Li GuanxiongQu Li JingkunZhao Xuet al

ABSTRACTObjective：To observe the expression of Natriuretic Peptide Receptor A (NPRA) and its relationship with clinicopathological data clinical significance in the Breast Carcinomas. Methods：Using immunohistochemical technique to investigate the NPRA protein in eligible human breast ductal cancer and para-carcinoma specimens, and analyze the relationship between NPRA expression and clinical pathological features. Results：Including 50human breast ductal cancer and 46 para-carcinoma specimens in the standard, the positive expression of NPRA was 36.8%(7/19)in patients of TNM I and TNM Ⅱ,the positive expression of NPRA was 80.6%(25/31)in patients of TNM Ⅲand TNM Ⅳ, statistical significance was found between groups. While the expression of NPRA showed no statistically significant among the association of age, lymph node metastasis, tumer size, histologic differentiation and tumer position. Conclusion: NPRA is highly expressed in patients with human breast ductal cancer, the higher positive expression of NPRA was correlation with TNM Stages.

KEY WORDSBreastneoplasms/Pathology@Natriuretic peptide receptor ANeoplasm staging

【中圖分類號】R737.9

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.009

*國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81471710)

陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2009K2-02)

△西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院

▲通訊作者