延安大學醫(yī)學院(延安716000)

張正祥　付佳廷　景東華△　吉金山　王　璐　米志寬　李寶莉　張　強　李　靜　宋偉欣　苗乃周

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酸柏梔油軟膠囊抗氧化作用初步研究*

延安大學醫(yī)學院(延安716000)

張正祥付佳廷景東華△吉金山王璐米志寬李寶莉張強李靜宋偉欣苗乃周

摘要目的：探討酸柏梔油軟膠囊抗氧化作用。方法：將60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、高、中、低酸柏梔軟膠囊組和辛伐他汀組。對照組正常飲食，其他組高脂飲食，4周后，眼眶采血全自動生化分析儀測定血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(CH)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平。高脂血癥大鼠模型建立后，對照組不做處理，其他組均在每天上午9:00按1ml/100g劑量灌胃：模型對照組給予生理鹽水，陽性對照組給予辛伐他汀(0.3 mg/100g)，高劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.45g/100g)，中劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.18g/100g)，低劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.072g/100g)。5周后，水合氯醛腹腔麻醉，腹主動脈采血測定血漿中TG、CH、HDL、LDL及總超氧化物歧化酶(T-SOD)水平。結果：高脂飲食4周后，高脂飲食大鼠血漿CH、HDL、LDL水平高于對照組，TG水平低于對照組(P<0.05)。干預5周后，酸柏梔油軟膠囊均可降低高脂血癥大鼠血清TC、升高血清T-SOD(P<0.01)；高劑量組降低LDL-C和TG水平(P<0.05)。結論：酸柏梔油軟膠囊具有降低高脂血癥大鼠血脂和升高高脂血癥大鼠血清總超氧化物歧化酶作用。

主題詞@酸柏梔油軟膠囊高脂血癥模型，動物抗氧化劑大鼠

酸柏梔油軟膠囊(Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardenia , SCCOJAG)是將酸棗仁、柏子仁、梔子的有效提取成分-酸棗仁油、柏子仁油、梔子油按照3∶3∶1配伍組成的復方制劑，其主要成分為多不飽和脂肪酸和維生素E[1]?，F(xiàn)代研究表明， SCCOJAG具有降低血纖維蛋白原濃度、降低血液粘度、促進學習記憶、耐缺氧和緩解體力疲勞的功能[2-4]。本實驗研究SCCOJAG降血脂和抗氧化作用。

資料與方法

1材料

1.1藥品：SCCOJAG由西安東盛醫(yī)藥研究所生產(chǎn)，酸棗仁油、柏子仁油、梔子油配比為3∶ 3∶ 1，0. 5 g /粒，批號：081120。辛伐他汀片山東魯抗醫(yī)藥集團賽特有限責任公司生產(chǎn)，100mg/片，批號：131104。

1.2試劑：豬膽固醇、豬膽鹽、丙基硫氧嘧啶購自北京博奧拓達公司，蛋黃、普通飼料購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心，豬油自制。

1.3動物：5周齡SD大鼠60只(180±20g，雌雄各半)由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。

1.4 儀器：全自動生化分析儀，規(guī)格型號：Cobas c 7 01 模塊；生產(chǎn)地址：德國羅氏診斷有限公司；產(chǎn)品序列號：1145-05。

2方法

2.1高脂飼料配置：5%膽固醇、5%蛋黃、0. 5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、10%豬油、80%普通飼料混勻，壓制成條，50℃烘干。

2.2建立SD大鼠高脂血癥模型：60只SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，按照體重，隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、高劑量酸柏梔油軟膠囊組、中劑量酸柏梔油軟膠囊組和低劑量酸柏梔油軟膠囊組，空白對照組給予正常飼料，其余各組給予高脂飼料，所有大鼠均自由飲水。4周后，采血前12h禁食自由飲水。采血時腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g劑量)麻醉，眼眶采血3ml，全自動生化分析儀測定TG、CH、HDL、LDL、T-SOD水平。

2.3干預實驗：造模成功后，空白對照組繼續(xù)正常飲食，模型對照組、陽性對照組、高劑量酸柏梔油軟膠囊組、中級劑量酸柏梔油軟膠囊組和低劑量酸柏梔油軟膠囊組繼續(xù)高脂飲食?？瞻讓φ战M不做處理，其它各組均在上午9:00按1ml/100g 劑量灌胃，模型對照組給予生理鹽水，陽性對照組給予辛伐他汀(0.3mg/100g)，高劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.45g/100g)，中劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.18g/100g)，低劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.072g/100g)。5周后，腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g)麻醉，麻醉后仰臥固定在手術臺上，腹部備皮，常規(guī)消毒，打開腹腔，暴露腹主動脈，在腎臟下方約1cm處向下分離腹主動脈約1.5cm，近心端動脈夾阻斷血流，遠心端結扎，提起結扎線，在結扎線近心端剪一小口，沿腹主動脈向向心端插入動脈插管固定，松開動脈夾采血3ml，全自動生化分析儀檢測TG、CH、HDL、LDL和T-SOD水平。

結果

1高脂飲食4周后，各組大鼠血清血脂及過氧化物歧化酶水平高脂飲食各組大鼠血漿TC、LDL-C、HDL-C水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，而血漿TG和T-SOD水平均低于對照組，差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表1。

表1　高脂飲食4周后各組大鼠血清血脂及超氧化物歧化酶水平

注：與正常對照組相比,*P<0.01；與模型對照組相比,△P<0.01

2酸柏梔油軟膠囊對高脂血癥大鼠血脂和血清總超氧化物歧化酶的影響造模成功后，分別給予辛伐他汀、高、中、低酸柏梔油軟膠囊干預5周后，腹腔麻醉(麻醉方法同上)，腹主動脈采血測定各組大鼠血清中血脂及總超氧化物歧化酶水平，可見酸柏梔油軟膠囊降低高脂血癥大鼠血清TC、LDL-C、HDL-C)和TG水平，升高血清T-SOD，其中高劑量酸柏梔油軟膠囊組降低血清TC效果好于辛伐他汀組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；高劑量酸柏梔油軟膠囊組降低LDL-C和血清TG水平與辛伐他汀組相當，中劑量和低劑量酸柏梔油軟膠囊組降低LDL-C和血清TG水平則不如辛伐他汀，差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；高劑量酸柏梔油軟膠囊組升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀組，中、低劑量酸柏梔油軟膠囊組則低于辛伐他汀組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2　酸柏梔油軟膠囊對高脂血癥大鼠血脂和血清總超氧化物歧化酶的影響

注：與正常對照組相比,*P<0.01；與模型對照組相比,△P<0.05，▲P<0.01；與陽性對照組相比,#P<0.05，□P<0.01

討論

高脂血癥是動脈粥樣硬化(Atheroslerosis, AS)發(fā)生的主要危險因素之一，也是誘發(fā)心腦血管疾病的重要因素，血清中TC、TG和LDL-C含量升高， HDL-C含量降低，可導致動脈內(nèi)膜損傷，血管通透性增高，加速脂質(zhì)在血管內(nèi)皮下沉積，誘發(fā)粥樣斑塊形成；而血脂升高時，氧自由基大量產(chǎn)生，脂質(zhì)過氧化作用增強，產(chǎn)生大量的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)，使SOD 活性降低，促進AS的發(fā)生和發(fā)展[5]。

本實驗采用高脂飲食，建立高脂血癥大鼠模型，經(jīng)過酸柏梔油軟膠囊干預，觀察酸柏梔油軟膠囊對高脂血癥大鼠血脂和血清SOD水平影響。經(jīng)過4周的高脂飼料喂養(yǎng)，SD大鼠血清TC、LDL和HDL水平高于對照組，而血清TG和SOD水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，與謝文鴻[6]、Yanagita[7]研究結果一致。王玉明等[8]研究發(fā)現(xiàn)，添加膽固醇飼料喂養(yǎng)大鼠，其肝臟膽固醇酯化酶(ACAT)和膽固醇異化的限速酶-7α-羥化酶基因表達增高，而膽固醇合成的關鍵酶-羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoA reductase)活性明顯下降，降低了高膽固醇飲食大鼠肝臟膽固醇水平，并增加(Cholesterol ester，CE)的合成，優(yōu)先向分泌的極低密度脂蛋白(Very low density lipoprotein，VLDL)內(nèi)填充膽固醇酯CE，相對減少了TG的充填，使肝外轉(zhuǎn)移的TG減少，可能導致血液中TG降低，而肝臟內(nèi)TG蓄積。血漿內(nèi)高TG和高LDL水平，使大鼠體內(nèi)過氧化損傷作用增強，黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶活性增加產(chǎn)生大量氧自由基，而體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)清除大量的氧自由基，而不斷消耗。因此，高脂飲食大鼠血清T-SOD水平低于對照組，說明本次實驗造模成功。

高脂血癥大鼠，經(jīng)酸柏梔油軟膠囊干預5周后，血清TC、LDL-C、HDL-C和TG水平降低，血清T-SOD水平升高；并且高劑量組降低血清TC效果好于辛伐他汀組，但差異無統(tǒng)計學意義；高劑量組降低LDL-C和TG作用與辛伐他汀組相當，中劑量和低劑量組則不如辛伐他汀，差異有統(tǒng)計學意義；高劑量組升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀組，中、低劑量組則低于辛伐他汀組，但差異無統(tǒng)計學意義；高、中、低劑量酸柏梔軟膠囊降低血清TC、LDL-C和TG作用，隨劑量增加而增加，高劑量組效果最好，差異有統(tǒng)計學意義；其升高血清T-SOD作用，也隨劑量增加而增加，但差異無統(tǒng)計學意義；而酸柏梔油軟膠囊卻降低血清HDL-C，且隨劑量增加作用更加明顯。酸柏梔油軟膠囊的主要成分為油酸、亞油酸和亞麻酸等不飽和脂肪酸和維生素E[1]，其中油酸[9]屬十八碳一烯酸，不飽和鍵的位置在甲基端的第九位，屬于ω-9不飽和脂肪酸；亞油酸[10](Linoleic acid；18：2 ω-6)是人體的一種必需脂肪酸(EFA)，屬于18 碳多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，有兩個雙鍵，第一個雙鍵出現(xiàn)在甲基端的第六位，稱為ω-6多不飽和脂肪酸。亞麻酸[10](Linolenic acid，LA，C18：3)也是人體的一種必需脂肪酸(EFA)，屬于18碳多不飽和脂肪酸，包含三個雙鍵，有兩個同分異構體：α-亞麻酸(ALA)和γ-亞麻酸(GLA)。α- 亞麻酸(ALA)是ω-3脂肪酸的典型代表，在人體內(nèi)可以合成其他的ω-3多不飽和脂肪酸(EPA、DHA)；GLA 是ω-6 多不飽和脂肪酸，是合成花生四烯酸(Arachidonic acid，ARA)的前體；油酸作為不飽和脂肪酸的一員，能夠緩解飽和脂肪酸引起的細胞毒性[11]，但是也可以引起細胞的氧化損傷與胰島素抵抗[12-13]。多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，是人體的必須營養(yǎng)成分之一，既能為機體提供能量，又是細胞內(nèi)膜的重要組成成分，其中ω-3、ω-6多不飽和脂肪酸還可影響血脂代謝。據(jù)文獻報道，ω-3型多元不飽和脂肪酸能夠通過調(diào)控LDL-C受體mRNA水平而調(diào)節(jié)LDL-C受體活性；二十碳五烯酸(Eicosa pntemacnioc acid，EPA)、二十二碳六烯酸(Docosa hexaenoic acid, DHA)可使LDL-C受體活性增加，減少LDL-C受體在血液中水平，并促進LDL-C受體向HDL-C轉(zhuǎn)化；同時，EPA、DHA 通過抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶活性，減少對食物中TC的吸收，增加TC在糞便中排泄從而降低TC水平[14]。維生素E作為氧自由基和單線氧的清除劑，是機體抗氧化系統(tǒng)中非酶促反應體系的重要組成成分。其可能通過可通過清除活性氧自由基、抑制細胞脂質(zhì)氧化、減少細胞中H2O2誘導的DNA 損傷和打斷脂質(zhì)過氧化鏈式反應、抑制核酸內(nèi)切酶的活化和促進受損DNA的清除[15]等途徑清除脂質(zhì)過氧化自由基，升高高脂血癥大鼠SOD活性。酸柏梔油軟膠囊一方面通過多不飽和脂肪酸降低高血脂大鼠血清TC、 LDL和TG水平，減少了氧自由基的產(chǎn)生，減弱了脂質(zhì)過氧化作用，使SOD活性增加；另一方面，其含有47.6%維生素E，可清除脂質(zhì)過氧化自由基，升高高脂血癥大鼠SOD活性；而其降低高脂血癥大鼠HDL水平可能是降低TC的繼發(fā)效應，即血清TC越低，機體代償性向肝臟轉(zhuǎn)移TC需要HDL就越少，體內(nèi)合成的HDL也就越少。

總之，酸柏梔油軟膠囊具有降低高脂質(zhì)血癥大鼠血清TC、LDL、TG和升高SOD水平的作用，其具體作用機制還有待于進一步研究。

參考文獻

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(收稿：2015-07-17)

Preliminary study on antioxidant activity of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia

Medical College of Yan’an University(Yan’an 716000)

Zhang ZhengxiangFu JiatingJing Donghua et al

ABSTRACTObjective:To investigate the antioxidant effects of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia. Methods: The 60 SD rats were randomly assigned to normal control group，model control group, high, medium and low SCCOJAG group and simvastatin group. A normal diet was given to the control group and a high fat diet was given to other groups. After 4 weeks，the level of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) in serum were determined by the automatic biochemical analyzer for orbital blood sampling. After the establishment of the model of hyperlipidemia rats，other groups were administered in the dose of 1ml / 100g every 9:00 a.m. according to the gavage method except for the control group; model control group was given normal saline，the positive control group received simvastatin (0.3 mg / 100g)，high dose group given SCCOJAG (0.45g/ 100g)， middle dose group given acid SCCOJAG 0.18g/100g，low dose group given SCCOJAG 0.072g/100g. After 5 weeks, the abdomen was anaesthetized with chloral hydrate, the abdominal aortic blood sampling was collected to determine the levels of plasma TG,TC,HDL,LDL and total superoxide dismutase (T-SOD).Results: After high fat diet for 4 weeks ，plasma TC,HDL and LDL levels of the rats with high fat diet were higher than those in the control group(P<0.05)，and TG levels were lower than those in the control group (P<0.05). After 5 weeks' intervention，SCCOJAG could reduce serum TC of the rats with hyperlipidemia, elevated serum levels of T-SOD (P< 0.01)；High dose group decreased low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and TG levels (P< 0.05).Conclusion: SCCOJAG can reduce the blood lipid of hyperlipidemia rats and elevated serum TSOD in rats with hyperlipidemia..

KEY WORDS@Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardeniaHyperlipidemiasModels,animalAntioxidants Rat

【中圖分類號】R392.5

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.004

*國家級大學生創(chuàng)新訓練計劃項目(201210719014)

延安大學專項科研基金項目(YD2008-44)

△延安大學附屬醫(yī)院