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        抗敏丸治療蕁麻疹作用機制的實驗研究*

        2016-06-06 11:18:41惠愛武董銀蘭
        陜西中醫(yī) 2016年4期
        關(guān)鍵詞:血清實驗模型

        惠愛武 趙 崗 董銀蘭

        陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

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        抗敏丸治療蕁麻疹作用機制的實驗研究*

        惠愛武趙崗董銀蘭△

        陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

        摘要目的:通過抗敏丸對Ⅰ型超敏反應(yīng)動物模型的實驗觀察,研究其治療蕁麻疹的作用機制。方法:應(yīng)用卵白蛋白造成 I 型超敏反應(yīng)動物模型,測定大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒,頸動脈取血測大鼠血清中白細胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)及免疫球蛋白 E(IgE)含量。結(jié)果:抗敏丸可顯著減少大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒(P<0.05),顯著升高血清IFN- γ含量(P<0.05),降低血清IL- 4 、IgE含量(P<0.05)。結(jié)論:抗敏丸具有抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用。

        主題詞Ⅰ型超敏反應(yīng) 肥大細胞脫顆粒 IL-4、IFN-γ、IgE

        蕁麻疹是臨床常見病與多發(fā)病之一,病因常不明,與食物、藥物、精神、物理、感染等因素相關(guān),其病情頑固,反復(fù)發(fā)作,較難治愈,抗敏丸由陜西省中醫(yī)醫(yī)院皮膚科研制,主要由金銀花、連翹、荊芥、防風(fēng)、蒼術(shù)、厚樸、陳皮等組成,用于外感風(fēng)熱伴脾胃虛弱型癮疹(相當(dāng)于西醫(yī)蕁麻疹),在臨床上取得了滿意的療效,本實驗通過制備I型超敏反應(yīng)的致敏動物模型,為抗敏丸治療蕁麻疹提供理論依據(jù)。

        1 材料和方法

        1.1藥品與試劑、儀器抗敏丸,由陜西省中醫(yī)醫(yī)院提供,批號:20141001;陽性藥物:撲爾敏,山西太原藥業(yè)有限公司生產(chǎn),國藥準字H14021770,產(chǎn)品批號:150104;大鼠IFN- γ、IL- 4 、IgE酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,購自南京建成生物工程研究所提供; imark酶標儀,Bio-Rad laboratories,inc。

        1.2實驗動物與分組60只健康SD大鼠,雌雄各半,體重180~220g,購買于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。實驗時取大鼠60 只,隨機分6組,即對照組、模型組、撲爾敏組、抗敏丸高、中、低劑量組。 對照組和模型組,灌胃蒸餾水20mL/kg,撲爾敏組,灌胃撲爾敏4mg/kg,抗敏丸大、中、小劑量組,分別灌胃抗敏丸6.4、3.2、1.6g生藥/kg。

        1.3方法

        1.3.1 造模:按文獻方法[1-2],第一天以0.9%氯化鈉配制Al(OH)3懸液(10g/L),除對照組每次每只大鼠腹腔注射Al(OH)3懸液1mL;其余各組大鼠均腹腔注射卵白蛋白(OVA1mg)與Al(OH)3懸液lmL的混合液進行初次免疫,第10d重復(fù)1次。從初次免疫后第6天開始,給藥,共14d。

        1.3.2對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響:Ⅰ型超敏反應(yīng)動物模型成功后給藥14 d,10%烏拉坦麻醉, 處死大鼠,立即腹腔內(nèi)注射肥大細胞沖洗液(15%枸櫞酸鈉與0.9%氯化鈉等量混合),輕揉腹部3min,剖開腹腔,用吸管吸出全部液體,2000r/min 離心15min,棄上清,沉淀物加肥大細胞懸液保存液0.2mL。細胞涂片中性紅染色,立即鏡檢[3]。隨機計數(shù)100 個細胞,計數(shù)脫顆粒細胞數(shù),計算脫顆粒百分數(shù)和抑制率。肥大細胞脫顆粒率(%)=脫顆粒細胞數(shù)/肥大細胞總數(shù)×100%。肥大細胞脫顆粒抑制率(%)=(1-用藥組脫顆粒率/模型組脫顆粒率)×100%

        1.3.3對細胞因子IFN- γ、IL- 4 、IgE表達的影響:上述大鼠未處死前頸動脈插管取血,離心2000 r /min,取血清,采用酶聯(lián)免疫試劑盒, 按照說明書步驟檢測定IFN- γ、IL- 4 、IgE光密度, 根據(jù)標準曲線, 計算濃度。

        2結(jié)果

        2.1對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響見表1。

        表1可見,模型組大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒明顯高于對照組(P<0.01),與模型組比較抗敏丸大、中劑量組和撲爾敏組能顯著減少肥大細胞脫顆粒(P<0.05)。

        表1 抗敏丸對大鼠腹腔肥大

        注:與對照組比較▲P?0.01,與模型組比較◇P?0.01,△P?0.05

        2.2對細胞因子IFN- γ、IL- 4 、IgE表達的影響見表2。

        表2可見,模型組IL- 4 、IgE血清含量較對照組顯著升高(P<0.05-0.01), IFN- γ血清含量較對照組顯著降低(P<0.05),抗敏丸大、中劑量組和撲爾敏組能顯著降低血清IL- 4 、IgE含量(P<0.05),顯著升高血清IFN- γ含量(P<0.05)。

        3討論蕁麻疹在中醫(yī)學(xué)又叫癮疹,屬Ⅰ型超敏反應(yīng),是皮膚科臨床常見病和多發(fā)病,主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢,發(fā)紅,出現(xiàn)大小不等局限性水腫樣風(fēng)團,病因常不清楚,與食物、藥物、物理、感染、蚊蟲、精神及工作壓力等多種因素有關(guān),病情易反復(fù)遷移,嚴重影響患者生活質(zhì)量[4-5]。本病發(fā)病機理還未完全清楚,目前認為主要是通過免疫和非免疫介導(dǎo)機制使肥大細胞活化、反應(yīng)性增高導(dǎo)致。免疫介導(dǎo)的機制為過敏原(多為異種蛋白質(zhì))刺激人體,使人體產(chǎn)生特異抗體IgE(免疫球蛋白E),這種IgE抗體附著在體內(nèi)的肥大細胞上或嗜堿性白細胞上,當(dāng)相同過敏原再次進入機體時,IgE抗體就和過敏原相結(jié)合,從而使肥大細胞和嗜堿性白細胞釋放組織胺及組織胺樣物質(zhì)(包括慢性反應(yīng)性物質(zhì)、5-羥色胺、緩激肽與激肽類等)的釋放,組織胺又作用于血管,使之?dāng)U張和通透性增加,因而大量蛋白質(zhì)和液體外滲到皮膚組織中,于是產(chǎn)生蕁麻疹。非免疫機制肥大細胞激活是由于一些物理因子(如冷、熱、紫外線)、一些分子的毒性作用(生物異源物質(zhì)等)或者有關(guān)自然免疫的膜受體,肥大細胞表面受體與相對應(yīng)受體結(jié)合,啟動不同信號途徑。因此免疫介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)中抗體主要是IgE,而IgE合成取決于T輔助細胞分泌的細胞因子IL-4 和IFN-γ[6],當(dāng)Th1細胞分泌IFN-γ減少,Th2 IL- 4 分泌過多,導(dǎo)致 IgE 合成增多, 產(chǎn)生Ⅰ型超敏反應(yīng)。

        表2 抗敏丸對大鼠大鼠血清IFN- γ、IL- 4 、IgE的影響

        注:與對照組比較▲P?0.05,與模型組比較◇P?0.05

        本實驗研究結(jié)果表明抗敏丸通過提高Ⅰ型超敏反應(yīng)模型大鼠Th1 細胞分泌IFN- γ,抑制Th2細胞 分泌IL- 4,使大鼠血清IgE 合成減少,從而抑制肥大細胞脫顆粒,減少炎性介質(zhì)釋放,減輕毛細血管擴張、降低血管通透性等,從而緩解臨床癥狀[7],起到了抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用。

        參考文獻

        [1]涂興明,吳康郁,熊穎,等. 白芷揮發(fā)油抗過敏的實驗研究[J] . 海峽藥學(xué), 2008, 20( 3 ) : 46.

        [2]唐建民,張鳳蘊,高淑英,等.息敏膠囊對I型超敏反應(yīng)模型鼠IgE、IL一4及INF一,水平的影響[J].細胞與分子免疫學(xué)雜志,2003,19(6):616-617

        [3]李忻紅,王惠國,關(guān)洪全,等.消敏顆粒治療慢性蕁麻疹作用機制的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2007,6(3):141

        [4]王德旭, 蘇東寶,安全平,等. 慢性蕁麻疹患者多種因素致敏狀態(tài)研究[J]. 中華皮膚科雜志, 2009, 42(3): 201-202.

        [5]Lorenzo G, Pacor M, Candore G, et al. Polymorphisms of cyclo-oxygenases and 5-lipo-oxygenase-activating protein are associated with chronic spontaneous urticaria and urinary leukotriene E4[J]. Eur J Dermatol, 2011, 21(1): 47-52.

        [6]吳慧珍,張學(xué)奇,張文輝,等.血清中IL-4 和TNF-α水平與慢性蕁麻疹的相關(guān)性[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2003,23(7):561.

        [7]郭華. 養(yǎng)血祛風(fēng)湯配合西藥治療蕁麻疹32例及對患者血清總IgE、IL-4及TNF-α的影響[J]. 陜西中醫(yī),2012,33(11):1056-1057.

        (收稿2015-11-19;修回2016-01-20)

        【中圖分類號】R758.24

        【文獻標識碼】A

        doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.062

        *陜西省科技計劃項目(2014K11-02-04-08)

        △山西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(臨汾041004)

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