劉喜綱， 常金花， 劉　沛， 陳光暉， 劉玉玲， 劉翠哲

（河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德067000）

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具有部分結(jié)腸定位釋藥特征的三黃分散片的制備

劉喜綱， 常金花， 劉沛， 陳光暉， 劉玉玲， 劉翠哲*

（河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德067000）

摘要：目的 制備具有部分結(jié)腸定位釋藥特征的三黃分散片。方法 制備黃芩苷、鹽酸小檗堿的速釋顆粒和大黃蒽醌的部分結(jié)腸定位釋放顆粒，以崩解時(shí)限和分散均勻度為指標(biāo)，篩選并優(yōu)化速釋顆粒的處方工藝；以小鼠的瀉下藥效為指標(biāo)，優(yōu)化大黃蒽醌的部分結(jié)腸定位釋放顆粒。HPLC法測(cè)定大黃蒽醌的釋放度。結(jié)果 制備工藝為黃芩苷、鹽酸小檗堿與一定比例的輔料加羥丙基甲基纖維素（HPMC）水溶液制粒，大黃蒽醌與輔料用含2.35％Eudragit L100、4.65％Eudragit S100和7.0％PEG 6000的70％乙醇溶液制粒，兩種顆?；靹蚝蠹尤胛⒎酃枘z，壓片。黃芩苷和鹽酸小檗堿在0.05％十二烷基硫酸鈉（SDS）水溶液中45 min時(shí)，溶出度均大于80％，大黃蒽醌可在結(jié)腸部分釋放。結(jié)論 制備的三黃分散片符合要求，工藝可行。

關(guān)鍵詞：三黃片；分散片；部分結(jié)腸定位釋藥；黃芩苷；鹽酸小檗堿；大黃蒽醌；釋放度；HPLC

三黃片是由大黃、黃芩浸膏和鹽酸小檗堿制成的復(fù)方片劑，為糖衣片或薄膜衣片，具有清熱解毒，瀉火通便的功效，是常用的中成藥，收載于2010年版《中國(guó)藥典》［1］。對(duì)市售的三黃片進(jìn)行質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)，10個(gè)不同廠家樣品的指紋圖譜相似度差異明顯［2］，黃芩苷和鹽酸小檗堿的溶出度存在顯著性差異，大黃素和大黃酚的溶出曲線相似因子f2值大多小于50，并且兩者體外溶出的模型擬合不統(tǒng)一［3-4］，表明該藥物質(zhì)量不穩(wěn)定。為了更好地控制三黃片質(zhì)量，將其中的大黃提取，得到蒽醌含有量在50％以上的提取物［5］，與黃芩浸膏和鹽酸小檗堿一同加入輔料，制成分散片。為了保證處方中大黃的“瀉下”藥效，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)大黃蒽醌的瀉下機(jī)理［6-8］，采用分別制粒的方式［9］，將大黃蒽醌制備成口服結(jié)腸定位釋放顆粒，將黃芩苷和鹽酸小檗堿制備成速釋顆粒。混合兩種顆粒后，將三黃片制成同時(shí)具有分散片和結(jié)腸定位釋藥特征的三黃分散片，在保證大黃蒽醌“瀉下”藥效的同時(shí)，提高方中黃芩苷和鹽酸小檗堿的溶出度。

1 材料與儀器

JASCO高效液相色譜儀，包括UV-1575紫外檢測(cè)器、PU-1580泵（日本JASCO公司）；ZRS-4智能溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）；AG-254電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；JA-2003電子分析天平（上海津科天平廠）；KQ-100E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；GTGL-16G離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；TDP壓片機(jī)、YSD-4片劑硬度計(jì)（上海天祥制藥機(jī)械有限公司）；FW800萬(wàn)能粉碎機(jī)（河北黃驊航天儀器廠）。

大黃蒽醌提取物（自制，含有量54.5％）；黃芩提取物（自制，黃芩苷含有量86.4％）；鹽酸小檗堿（邯鄲制藥有限公司，含有量98.3％）。

羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉（湖州展望藥業(yè)有限公司）；交聯(lián)聚維酮（上海運(yùn)宏化工制劑輔料技術(shù)有限公司）；乳糖（荷蘭DMV公司）；Eudragit L100、S100（德國(guó)Rhom公司）；微粉硅膠（上海運(yùn)宏化工有限公司）；其他輔料均為藥用規(guī)格。大黃酸（0757-200206）、蘆薈大黃素（0795-9803）、大黃素（110756-200211）、大黃酚（0796-200208）、大黃素甲醚（110758-201013）對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。甲醇為色譜純；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

昆明種小鼠（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第04056，體質(zhì)量20～22 g。

2 方法與結(jié)果

2.1 劑量與規(guī)格 根據(jù)三黃片中大黃、黃芩浸膏、鹽酸小檗堿的服用劑量［1］和大黃蒽醌的提取率，確定3類(lèi)成分的一次服用量分別為24、84、20 mg。

2.2 三黃分散片的設(shè)計(jì) 根據(jù)三黃片中各味藥的處方量及所得大黃蒽醌提取物的質(zhì)量，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定藥物占片重28％，輔料占72％的處方比例。黃芩浸膏中的主要成分黃芩苷和鹽酸小檗堿均為水難溶性成分，故制備成分散片時(shí)可使兩者在胃中快速釋放。根據(jù)大黃蒽醌的“瀉下”特點(diǎn)［6-8］，蒽醌類(lèi)成分包括結(jié)合蒽醌和游離蒽醌，主要“瀉下”機(jī)理是口服結(jié)合蒽醌到達(dá)結(jié)腸后，被酶解為游離蒽醌，從而發(fā)揮“瀉下”藥效；直接口服游離蒽醌時(shí)，因上消化道的吸收破壞而導(dǎo)致“瀉下”作用較弱。本實(shí)驗(yàn)中的大黃蒽醌提取物經(jīng)離子交換樹(shù)脂純化后，蒽醌以游離狀態(tài)存在，如欲使其發(fā)揮和藥材相當(dāng)?shù)摹盀a下”藥效，應(yīng)使其部分在結(jié)腸釋放以達(dá)到“瀉下”效果。因此，擬采用分別制粒的方式制備兩種顆粒，即大黃蒽醌的結(jié)腸定位釋放顆粒和黃芩浸膏、鹽酸小檗堿的速釋顆粒。

結(jié)腸定位釋放顆粒（顆粒一）的制備方法為將處方量的大黃總蒽醌提取物按照比例加入輔料，以Eudragit S100、L100的乙醇溶液為黏合劑，高速攪拌制粒，50℃下干燥，過(guò)50目篩整粒，即得。

速釋顆粒（顆粒二）的制備方法為將處方量的黃芩浸膏和鹽酸小檗堿粉碎后過(guò)篩，按照比例加入輔料，混勻，加入黏合劑，高速攪拌制粒，干燥，過(guò)50目篩整粒，即得。

然后，將上述2種顆粒按照比例混合，加入潤(rùn)滑劑，壓制成分散片，考察其崩解時(shí)限和分散均勻性。

2.3 崩解時(shí)限和分散均勻性測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》2010版Ⅱ部附錄，取供試品兩片，置于100 mL（20±1）℃水中，振搖3 min，應(yīng)全部崩解并通過(guò)2號(hào)篩，同時(shí)記錄崩解時(shí)間。

2.4 速釋顆粒的研究［10］制備速釋顆粒的目的是使其滿足分散片的要求，主要篩選填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等，但顆粒一需要和顆粒二混合壓片。為簡(jiǎn)化壓片工藝，顆粒一采用的填充劑等輔料與顆粒一相同，將3種有效成分混合一起以篩選上述輔料，并作為藥物。然后，采用單因素試驗(yàn)法，以片劑的崩解時(shí)間、分散均勻性為指標(biāo)，選擇輔料的種類(lèi)。

2.4.1 崩解劑的篩選 分別以交聯(lián)聚維酮（PVPP）、羧甲基淀粉鈉（CMS-Na）、低取代羥丙基纖維素（L-HPC）為崩解劑，按表1處方稱取A、B、C、D、E、F各組分，使輔料與3種有效成分混合均勻后，以20％可壓性淀粉漿為黏合劑，高速攪拌制粒，50℃下干燥2 h，50目篩整粒。然后，加入硬脂酸鎂（St-Mg），混合均勻后壓片，測(cè)定崩解時(shí)間和分散均勻性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　分散片的處方（m g/片）

由表可知，上述6個(gè)處方中，A、D、F具有良好的分散均勻性，在3 min內(nèi)崩解，其中A和D差別不大?？紤]成本和崩解時(shí)間，選擇羧甲基淀粉鈉和低取代羥丙基纖維素等量混合，作為崩解劑。

2.4.2 其它種類(lèi)輔料的篩選

2.4.2.1 填充劑 考察微晶纖維素（MCC）、乳糖、糊精和甘露醇，其他同表1中的處方D，工藝同上，壓片，測(cè)定崩解時(shí)間和分散均勻性。結(jié)果，微晶纖維素的崩解時(shí)間最短，故本實(shí)驗(yàn)選擇其作為填充劑。

2.4.2.2 黏合劑 固定崩解劑和填充劑，考察10％淀粉漿、3％HPMC水溶液、20％可壓性淀粉漿。結(jié)果，3％ HPMC水溶液與10％淀粉漿的崩解時(shí)間最短，但前者顆粒致密，流動(dòng)性好，故選擇其作為黏合劑。

2.4.2.3 潤(rùn)滑劑 考察滑石粉、PEG-6000、微粉硅膠和硬脂酸鎂，固定其他條件，同法壓片。結(jié)果，微粉硅膠的崩解時(shí)間最短，故選擇其作為潤(rùn)滑劑。

2.4.3 速釋顆粒的處方優(yōu)化 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)篩選的各種輔料和用量，固定藥物重量占整個(gè)片劑的28％，采用正交設(shè)計(jì)，因素水平見(jiàn)表2，按L9（34）正交表安排試驗(yàn)，以片劑崩解時(shí)間、分散均勻度為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。其中，y1為崩解時(shí)間，以3 -y1為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，占60％權(quán)重；y2為分散均勻度，以分散液能否通過(guò)24、30、40、60目篩網(wǎng)，得分分別為1、2、3、4分，占40％權(quán)重。按下式計(jì)算綜合得分Y［11］，y1≥3時(shí)，崩解時(shí)間得分為0。結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

表2　因素水平

由方差分析結(jié)果可以看出，低取代羥丙基纖維素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響（p<0.05）。最終，確定最佳處方為A2B3C3D2，即64 g藥粉，加115 g微晶纖維素、24 g低取代羥丙基纖維素、24 g羧甲基淀粉鈉、1.5％微粉硅膠，制成1 000片，發(fā)現(xiàn)其崩解時(shí)限和分散均勻度均符合要求。

2.4.4 速釋顆粒中有效成分的溶出度測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》2010版Ⅱ部附錄，以900 mL 0.05％十二烷基硫酸鈉水溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，水浴溫度（37±0.5）℃，在5、10、20、30、45、60、120 min時(shí)，取溶液5 mL，同時(shí)補(bǔ)加同溫等量的溶出介質(zhì)，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，注入高效液相色譜儀，參照文獻(xiàn)［5］中的方法測(cè)定黃芩苷和鹽酸小檗堿的含有量，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算有效成分的累積溶出百分率，結(jié)果見(jiàn)圖1。

表3　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4　方差分析

圖1　速釋顆粒中黃芩苷和鹽酸小檗堿的溶出度

2.5 結(jié)腸定位釋放顆粒的研究 大黃蒽醌提取物中的蒽醌均以游離形式存在，故直接口服不能達(dá)到瀉下藥效。Eudragit L100、S100具有在胃液中不溶解，分別在pH值6和7以上溶解的性質(zhì)，并有一定的黏性［12］，故以兩種腸溶材料為黏合劑進(jìn)行制粒，使部分大黃蒽醌到達(dá)結(jié)腸后釋放。由于大黃蒽醌到達(dá)結(jié)腸后應(yīng)快速釋放，才能達(dá)到相應(yīng)的瀉下作用，故該腸溶材料在體外結(jié)腸pH值條件下不能快速溶解，而PEG-6000能作為速溶型固體分散體的載體材料［13］，將其加入黏合劑中可起到類(lèi)似致孔劑的作用，從而使Eudragit L100、S100快速溶解。

制備大黃蒽醌結(jié)腸定位釋放顆粒的目的是滿足制劑的瀉下藥效，其以其為指標(biāo)優(yōu)化工藝。在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇Eudragit L100和S100總濃度（A）、Eudragit L100與S100比例（B）、PEG-6000與Eudragit L100和S100總濃度比例（C）、23 g物料制粒時(shí)所用黏合劑（D）4個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表5，按L9（34）正交表安排試驗(yàn)，以相當(dāng)于三黃片（素片）出現(xiàn)瀉下的量為給藥劑量，以小鼠的瀉下作用為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。瀉下作用評(píng)價(jià)是在1次喂藥后，每只小鼠糞便干、軟、稀、溏的程度分別為1～2、3～4、5～6、7～8分，再加上相應(yīng)小鼠數(shù)量的權(quán)重，計(jì)算得分。

按篩選的速釋顆粒中的輔料比例，即大黃蒽醌6.4 g，微晶纖維素11.5 g，低取代羥丙基維素2.4 g，羧甲基淀粉鈉2.4 g，混合均勻，加入一定濃度與比例Eudragit L100、S100黏合劑，高速攪拌制粒，50℃下干燥，過(guò)50目篩整粒，即得大黃蒽醌的結(jié)腸定位釋放顆粒。

取實(shí)驗(yàn)小鼠90只，禁食18 h，隨機(jī)分為9組，灌胃給藥（劑量92 mg/kg），給藥容積0.2 mL/10 g體質(zhì)量。然后，將小鼠置于小鼠代謝籠內(nèi)，籠底部鋪濾紙，觀察給藥后糞便的性狀，按照干、軟、稀、溏的程度分別計(jì)分，結(jié)果見(jiàn)表6。

表5　因素水平

表6　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

綜上所述，最優(yōu)處方為A2B3C2D3，考慮到因素D影響不明顯，故選擇容易整粒的水平，即D2水平。最終，確定工藝為取7％PEG-6000和7％（Eudragit L100：Eudragit S100 =1∶2），溶于70％乙醇溶液中，作為黏合劑，23 g物料一次加入5 mL黏合劑，高速攪拌制粒，50℃下干燥，60目篩整粒，即得。

2.6 三黃分散片的制備工藝 對(duì)三黃分散片（1 000片）速釋顆粒和結(jié)腸定位釋放顆粒的制備工藝進(jìn)行考察，正交試驗(yàn)法優(yōu)化處方，結(jié)果見(jiàn)表7。而且，速釋顆粒中的有效成分在45 min時(shí)，釋放度達(dá)80％以上。

表7　制備工藝考察結(jié)果

2.7 大黃蒽醌釋放度的測(cè)定 取三黃分散片1片，密封于300目的尼龍篩網(wǎng)中，固定于槳上，轉(zhuǎn)速為100 r/min，用0.05％十二烷基硫酸鈉水溶液配制不同pH介質(zhì)（pH 1.2的鹽酸溶液、pH 7.2的緩沖鹽），分別在10、30、60、120、150、180、240、300 min取樣（0～120 min在pH 1.2的介質(zhì)中，而120～300 min在pH 7.2的介質(zhì)中），過(guò)濾，取續(xù)濾液，在下述色譜條件下，HPLC法測(cè)定蒽醌的釋放度，計(jì)算其累積釋放率，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖可知，大黃蒽醌釋放有pH依賴性。

色譜條件［14］為Discovery C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫室溫；流動(dòng)相甲醇-0.1％高氯酸（85∶15）；體積流量0.80 mL/min。

圖2　大黃蒽醌在不同pH值介質(zhì)中的釋放曲線

3 討論

采用聚類(lèi)分析，對(duì)市售三黃片的指紋圖譜進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)10個(gè)不同廠家樣品被聚為4類(lèi)，然后通過(guò)相似度計(jì)算，發(fā)現(xiàn)同一廠家5批樣品的相似度良好，而不同廠家樣品的相似度差異明顯［2］。同時(shí)，對(duì)該藥物進(jìn)行溶出度比較，發(fā)現(xiàn)10個(gè)不同廠家樣品中鹽酸小檗堿的溶出度和含有量存在顯著差異［15］；對(duì)黃芩苷和鹽酸小檗堿的溶出度進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同廠家樣品中兩者的溶出度存在顯著性差異；對(duì)不同廠家樣品中大黃素和大黃酚的溶出度進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)溶出曲線相似因子f2值大多小于50，并且兩者體外溶出的模型擬合不統(tǒng)一［3-4］。為了更好地控制三黃片質(zhì)量，人們將其中的大黃提取，得到蒽醌含有量在50％以上的提取物，與黃芩浸膏和鹽酸小檗堿一同加入輔料，制成分散片。三黃片處方中的黃芩苷和鹽酸小檗堿均為85％以上的有效部位，而占總質(zhì)量和體積比較大者為大黃。因此，對(duì)大黃原料進(jìn)行提取精制，得到蒽醌含有量在50％以上的有效部位，可更有利于劑型改進(jìn)。

大黃經(jīng)30％乙醇提取后濃縮，用NaOH堿化，過(guò)離子交換樹(shù)脂柱，酸化解析，85％以上用乙醇洗脫，減壓回收乙醇［5］，所得提取物中的蒽醌均以游離形式存在，直接口服后不能達(dá)到和藥材相當(dāng)?shù)臑a下作用。本實(shí)驗(yàn)將大黃蒽醌提取物加輔料，以Eudragit L100、S100混合70％乙醇溶液為黏合劑制粒，口服后游離蒽醌在整個(gè)胃腸道均有釋放，產(chǎn)生與三黃片相似的藥理作用。同時(shí)，Eudragit L100、S100作為黏合劑，在顆粒中形成類(lèi)似骨架結(jié)構(gòu)，其在結(jié)腸pH值條件下也不能快速溶解，而瀉下作用的產(chǎn)生需要對(duì)腸壁有一定的刺激強(qiáng)度，故到達(dá)結(jié)腸時(shí)也應(yīng)快速釋放。另外，PEG-6000作為速溶型固體分散體的載體材料，加入黏合劑時(shí)可加快蒽醌的釋放。

本實(shí)驗(yàn)采用兩步制粒的方法，即先將黃芩浸膏和鹽酸小檗堿制備成速釋顆粒，再將大黃蒽醌制備成結(jié)腸定位釋放顆粒，將兩者按照處方比例混合，既解決了片劑崩解緩慢的問(wèn)題，同時(shí)又可保證蒽醌的瀉下藥效，為三黃片的劑型開(kāi)發(fā)提供了參考。

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*通信作者：劉翠哲（1964—），女，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┈F(xiàn)代化及中藥藥代動(dòng)力學(xué)。Tel：（0314）2290359，E-mail：liucuizhexy@163.com

作者簡(jiǎn)介：劉喜綱（1978—），男，碩士，副教授，從事中藥制劑現(xiàn)代化研究。Tel：（0314）2290629，E-mail：liuxgmail@sina.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81073146，81341143）；河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（ZH2012050，QN2014145）；河北省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（冀教高［2013］4號(hào)）

收稿日期：2015-04-20

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.042

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）05-1155-05