韋永瓊，沈　偉，劉成桂，曹登成，楊　煉

(成都市婦女兒童中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610031)

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·論著·

邁瑞B(yǎng)C5390血液分析儀實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證

韋永瓊，沈偉，劉成桂，曹登成，楊煉

(成都市婦女兒童中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610031)

摘要:目的對邁瑞B(yǎng)C5390血液分析儀的主要性能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證。方法依據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)系列文件和相關(guān)文獻(xiàn)，結(jié)合該實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作，對邁瑞B(yǎng)C5390(編號SM-45000421)的精密度、準(zhǔn)確度、線性、臨床可報告范圍及攜帶污染率進(jìn)行測定。結(jié)果邁瑞B(yǎng)C5390的本底計數(shù)均達(dá)到廠商設(shè)計規(guī)定的要求，檢測WBC、RBC、PLT、Hb、HCT、MCV 6項(xiàng)精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍良好，攜帶污染率低。白細(xì)胞分類與人工鏡檢分類相比，除嗜堿性粒細(xì)胞外，均有良好的相關(guān)性(r2>0.95)。結(jié)論邁瑞B(yǎng)C5390全自動血細(xì)胞分析儀的各項(xiàng)性能良好，精密度及準(zhǔn)確度高，線性范圍寬，攜帶污染率低，能較好地滿足臨床血液常規(guī)檢查的要求。

關(guān)鍵詞:血液分析儀；性能驗(yàn)證；精密度；準(zhǔn)確度

全自動血細(xì)胞分析儀因其用血量少、結(jié)果準(zhǔn)確度高及可報告參數(shù)多、同時操作簡便易于標(biāo)準(zhǔn)化，因而極大地提高了血細(xì)胞檢測的效率與質(zhì)量，現(xiàn)已基本取代手工顯微鏡檢查(形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)除外)。邁瑞B(yǎng)C5390是一款具有雙通道白細(xì)胞五分類及異常細(xì)胞篩選功能的全自動血細(xì)胞分析儀，可用靜脈全血、微量全血、預(yù)稀釋血三種模式進(jìn)行檢測，因其末梢血模式用血量少，僅需20 μL，現(xiàn)已成為目前婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科不可缺少的儀器。但若未按標(biāo)準(zhǔn)對儀器進(jìn)行性能評價，不了解其具體性能就盲目應(yīng)用，檢測結(jié)果的誤差將大大超過手工操作，而檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的高低直接影響到醫(yī)生對患者病情的判斷及疾病的診療，因此實(shí)驗(yàn)室對新安裝的儀器必須進(jìn)行性能驗(yàn)證，以保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。為了解本科室2014年8月新投入使用的邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀的性能，本文參考美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)系列文件及相關(guān)文獻(xiàn)對其精密度、準(zhǔn)確度、線性、攜帶污染及白細(xì)胞分類相關(guān)性進(jìn)行測定[1-2]，以驗(yàn)證新儀器BC5390的性能指標(biāo)是否滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源批間精密度的評價采用高、低2個濃度水平的全血室內(nèi)質(zhì)控品作為檢測標(biāo)本；批內(nèi)精密度、線性及攜帶污染率的評價使用2014年7～8月本院門診及住院患者的EDTA-K2抗凝新鮮全血作為檢測標(biāo)本。

1.2儀器與試劑邁瑞B(yǎng)C5390全自動血細(xì)胞分析儀和相關(guān)配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品；日本奧林巴斯顯微鏡；珠海瑞氏-吉姆薩染液[3]。

1.3方法

1.3.1BC5390本底(空白)檢測用儀器配套稀釋液作為標(biāo)本，在儀器選定的檢測模式下計數(shù)，測得結(jié)果為該種檢測模式當(dāng)前狀態(tài)下的空白計數(shù)結(jié)果。本底計數(shù)要求在廠家標(biāo)示的范圍內(nèi)，若開機(jī)本底未達(dá)到要求者，不能做余下相關(guān)試驗(yàn)，必須經(jīng)廠家售后服務(wù)工程師檢修合格后再次測試。

1.3.2精密度分析根據(jù)EP15-A文件[4]，對BC5390進(jìn)行精密度評價。批間精密度：取高、低兩個水平質(zhì)控品，每天測定2次，每次檢測之間相隔2 h，連續(xù)測定10 d，一共收集20個數(shù)據(jù)，計算變異系數(shù)(CV)，標(biāo)準(zhǔn)差(s)。批內(nèi)精密度：取高、中、低3個水平的新鮮全血，連續(xù)重復(fù)測定20次，計算CV，s；將實(shí)驗(yàn)所得的CV值與衛(wèi)生部臨檢中心所要求的進(jìn)行比較，若小于臨檢中心所要求的，說明該儀器的精密度指標(biāo)符合要求。

1.3.3準(zhǔn)確度分析參照CLSI的EP9-A2[5-7]文件以及國家食品藥品監(jiān)督管理局體外診斷試劑分析性能評估系列指導(dǎo)原則，采用對比試驗(yàn)進(jìn)行準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。每天準(zhǔn)備8份新鮮全血樣本，濃度覆蓋生物參考區(qū)間，分別在BC5390和基準(zhǔn)儀器BC6900(SPA46151115)上進(jìn)行測定，共5 d，收集40個數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計算比對儀器和基準(zhǔn)儀器之間的直線回歸、相關(guān)系數(shù)(r)及相對偏差。判斷標(biāo)準(zhǔn)為兩儀器間r2>0.95及偏差在規(guī)定范圍內(nèi)為合格，即WBC：≤5%，RBC：≤2%，血紅蛋白(Hb)：≤2%，平均紅細(xì)胞體積(MCV)：≤3%，血小板(PLT)：≤5%，血細(xì)胞比容(HCT)：≤2%。

1.3.4線性范圍驗(yàn)證參照EP6-A2[8]文件，選取接近預(yù)期上限的高值全血標(biāo)本(H)1份，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋，每個稀釋度重復(fù)測定2次，計算的均值作為實(shí)測值。將實(shí)測值與理論值進(jìn)行比較，并計算直線回歸方程Y=bX+a和r，驗(yàn)證線性范圍。判斷標(biāo)準(zhǔn)：r≥0.975，b值在1±0.05范圍內(nèi)為合格。臨床可報告范圍：要求偏差在1/3CLIA′88之內(nèi)的最大稀釋度，為本室可接受的最大稀釋度，臨床可報告范圍=最大稀釋倍數(shù)×線性范圍上限，偏差值=(Y實(shí)測值-X理論值)/X理論值。

1.3.5攜帶污染率測定取高濃度全血標(biāo)本，連續(xù)測定3次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度全血標(biāo)本，連續(xù)測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率。攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。攜帶污染率值小于1.0%為合格。

1.3.6生物參考區(qū)間驗(yàn)證收集20份健康男性和20份健康女性新鮮EDTA-K2抗凝全血標(biāo)本，連續(xù)上機(jī)檢測，對現(xiàn)有的生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證所有提供參考范圍的報告參數(shù)(如有性別或年齡劃分，則按要求填入)。

1.3.7白細(xì)胞五分類的驗(yàn)證取20份非血液科非腫瘤科住院患者的EDTA-K2抗凝血，每份標(biāo)本重復(fù)測定2次，取五分類均值。同時每份標(biāo)本制備血片2張，分別由2位具備資格的檢驗(yàn)人員在油鏡下選擇體尾交界處，分類計數(shù)200個白細(xì)胞，共400個，取均值與BC5390儀器五分類均值結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析[9]。

1.3.8質(zhì)量控制驗(yàn)證前使用配套校準(zhǔn)液、質(zhì)控品對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)以及室內(nèi)質(zhì)控檢測，確保儀器狀態(tài)良好。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對各指標(biāo)的檢測結(jié)果分別計算算術(shù)平均值、s及相對偏差，可比性和線性驗(yàn)證計算回歸方程Y=bX+a和r。

2結(jié)果

2.1BC5390本底檢測BC5390本底檢測結(jié)果顯示每次本底計數(shù)均在廠家標(biāo)示的范圍內(nèi)。

2.2精密度驗(yàn)證WBC、RBC、PLT、Hb、HCT、MCV的批間、批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果均低于判定標(biāo)準(zhǔn)，見表1，滿足衛(wèi)生部臨檢中心的要求。

表1　　邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2　　邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀的準(zhǔn)確度驗(yàn)證

2.3準(zhǔn)確度驗(yàn)證通過對比試驗(yàn)，邁瑞B(yǎng)C5390與參比儀器進(jìn)行相關(guān)性分析，兩臺儀器r2>0.95以及誤差均在允許范圍內(nèi)，儀器BC5390的準(zhǔn)確度指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)。見表2。

2.4線性驗(yàn)證WBC、RBC、Hb、HCT和PLT線性方程及線性范圍見表3，各檢測項(xiàng)目的線性驗(yàn)證結(jié)果均符合合格的判定標(biāo)準(zhǔn)。

表3　　邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀線性驗(yàn)證結(jié)果

2.5攜帶污染率邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀測定WBC、RBC、Hb、HCT和PLT的攜帶污染率均遠(yuǎn)低于判定標(biāo)準(zhǔn)的1%，滿足臨檢中心的要求，見表4。

表4　　邁瑞B(yǎng)C5390全血細(xì)胞分析儀攜帶污率的計算

2.6生物參考區(qū)間驗(yàn)證檢測男、女各20例健康志愿者全血標(biāo)本，5項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果均至少有95%的檢測值分布在實(shí)驗(yàn)室使用的生物參考區(qū)間范圍內(nèi)。

2.6白細(xì)胞五分類驗(yàn)證將20例非血液科患者的血細(xì)胞分析儀五分類百分比結(jié)果與手工顯微鏡分類結(jié)果進(jìn)行比對分析，計算出回歸方程和r，結(jié)果中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的r分別為0.980、0.990、0.983、0.976、0.386，表明除嗜堿性粒細(xì)胞百分比外均有良好的相關(guān)性(r>0.975)。

3討論

邁瑞B(yǎng)C5390是一款具有雙通道白細(xì)胞五分類及異常細(xì)胞篩選功能的全自動血細(xì)胞分析儀，有多種不同的操作模式及多種項(xiàng)目組合檢測，能滿足不同的檢測需求，儀器在不同模式下使用一根進(jìn)樣針檢測，減少了因不同進(jìn)樣針而造成的結(jié)果差異。該儀器可對靜脈血、末梢血進(jìn)行定量分析，手動模式中還有標(biāo)本足量時的封閉模式及量少時的開蓋模式。因其開蓋模式用血量少，僅需20 μL，已成為目前許多臨床實(shí)驗(yàn)室特別是兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科不可缺少的儀器。任何全自動分析儀在使用時都首先要保證該儀器的系統(tǒng)誤差在臨床可接受范圍內(nèi)，因此要求儀器在新安裝和投入臨床使用前，要顯示有能力達(dá)到所需的性能且還須滿足與檢測相關(guān)的規(guī)格[7,10]。美國頒布的“臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)的最終法規(guī)”也明確要求：每個實(shí)驗(yàn)室在引入未作修改的、FDA認(rèn)可或批準(zhǔn)的檢測系統(tǒng)時，在向臨床報告患者檢驗(yàn)報告前必須作性能指標(biāo)的驗(yàn)證[9]。故本文對本院臨床實(shí)驗(yàn)室新投入使用的邁瑞B(yǎng)C5390(編號SM-45000421)全血細(xì)胞分析儀實(shí)驗(yàn)室性能進(jìn)行驗(yàn)證。

檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證是臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的重要內(nèi)容，系統(tǒng)性能良好是保證患者檢驗(yàn)報告準(zhǔn)確、可靠的前提。其最主要的性能包括精密度、準(zhǔn)確度、線性及攜帶污染率等。精密度是檢測儀器在校準(zhǔn)狀態(tài)下，對同一份標(biāo)本檢測結(jié)果一致性的能力，良好的精密度是驗(yàn)證其他各項(xiàng)指標(biāo)的基礎(chǔ)[11]，衛(wèi)生部臨檢中心要求批內(nèi)和批間精密度應(yīng)分別小于1/4和1/3CLIA′88允許范圍。本研究中，邁瑞B(yǎng)C5390全自動血細(xì)胞分析儀批內(nèi)、批間精密度CV%均小于判定標(biāo)準(zhǔn)，表明本儀器重復(fù)性良好，滿足臨床和患者的要求。通過與基準(zhǔn)儀器的比對結(jié)果表，BC5390儀器準(zhǔn)確度指標(biāo)符合要求，結(jié)果穩(wěn)定可靠，其檢測出來的數(shù)據(jù)可信性高，可以放心出具報告。線性范圍的驗(yàn)證是確定臨床可報告范圍的基礎(chǔ)，當(dāng)儀器檢測結(jié)果超出線性范圍時，該結(jié)果應(yīng)視為不準(zhǔn)確的測定值。本文表3中斜率b在1±0.05之內(nèi)，r2均不低于0.95，檢測濃度與稀釋倍數(shù)呈線性相關(guān)線性，表明儀器檢測的線性范圍很寬，儀器對于臨床標(biāo)本的可報告范圍上限較高，完全能滿足臨床上不同標(biāo)本的準(zhǔn)確定量分析。攜帶污染率是體現(xiàn)檢測標(biāo)本之間相互污染的程度，是判定高濃度標(biāo)本是否影響低濃度標(biāo)本測定結(jié)果的指標(biāo)，其大小應(yīng)符合儀器制造商的要求。表4結(jié)果顯示，儀器BC5390攜帶污染率均遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于標(biāo)準(zhǔn)要求的1%，表明沖洗功能良好，不同標(biāo)本間的交叉污染小，對于結(jié)果的可信性也有很大的提高。

在白細(xì)胞五分類驗(yàn)證中，與顯微鏡手工分類相比，除嗜堿性粒細(xì)胞外，均有良好的相關(guān)性(r2>0.95)。嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)性不好，可能是由于嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量少，在血液中的絕對值相對低以及在血片中分布不均，數(shù)據(jù)變異較大所致，這也是目前全血細(xì)胞分析儀普遍存在的一個問題。面對這個問題，要求檢驗(yàn)人員在日常工作中，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際工作，制訂完善的復(fù)檢規(guī)則，嚴(yán)格按照要求，做好人工顯微鏡復(fù)檢的工作[12]，可做到基本不影響臨床醫(yī)師對檢測結(jié)果的正常分析。

綜上所述，邁瑞B(yǎng)C539全自動血細(xì)胞儀準(zhǔn)確度及精密度良好，攜帶污染率低，線性范圍覆蓋臨床可能遇到的水平，是一臺性能良好的血細(xì)胞分析儀，可用于檢驗(yàn)科的日常工作，基本能滿足臨床患者血液標(biāo)本分析的需要。但儀器五分類結(jié)果需根據(jù)儀器散點(diǎn)圖及報警提示，必要時進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢后發(fā)出報告。

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Evaluation verification of Mindary BC5390 hematology analyzer

WeiYongqiong，ShenWei，LiuChenggui，CaoDengcheng，YangLian

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChengduWomen′sandChildren′sCentralHospital,Chengdu,Sichuan610031,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the performance verification of Mindary BC5390 hematology analyzer.MethodsAccording to requirement of CLSI documents,the precision,accuracy,linearity,carryover were evaluated.ResultsThe background counts all met the designed requirements of manufacturer.Precision,accuracy,linearity of the WBC,RBC,PLT,Hb,HCT,MCV were good and the contamination carrying rates were low.Except for basophils,the classification of leukocyte was well correlated with the artificial microscopy classification(r2>0.95).ConclusionThe BC5390 is a ideal automated hematology analyzer which has high precision and accuracy,wide linearity，low contamination carrying rate，and it can be used for the blood samples analysis.

Key words:hematology analyzer；performance qualification；precision；accuracy

(收稿日期：2015-11-06)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.013

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1046-03

作者簡介：韋永瓊，女，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床血液學(xué)與檢驗(yàn)的研究。