張曉曄

(內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

HPLC法測定蒙藥材沙旋覆花中綠原酸的含量△

張曉曄

(內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：建立蒙藥材沙旋覆花中綠原酸的HPLC測定方法。方法：采用HPLC法測定，流動相為乙腈-水-磷酸(65：440：1)，流速1.0mL·min-1，檢測波長為328nm，柱溫為30℃。結(jié)果：綠原酸在0.62～9.92μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999；101.21%，RSD為1.22%(n=6)。沙旋覆花綠原酸含量，花0.11%、葉0.12%、莖枝0.043%、根0.009%，地上部位綠原酸平均含量為0.091%。結(jié)論： 沙旋覆花綠原酸測定方法簡便、可靠、重現(xiàn)性好，可作為藥材質(zhì)量評價指標(biāo)。

HPLC法；沙葉旋覆 花；綠原酸

沙旋覆花Inula sasoloides(Turcz.)Ostenf.蒙藥名額勒森-阿拉坦度蘇拉，蒙醫(yī)主要用于清熱解毒，燥黃水，多以復(fù)方使用[1]。沙旋覆花主要含有倍半萜內(nèi)酯化、旋覆花素，花含槲皮素、異槲皮素、咖啡酸、綠原酸、菊糖及甾醇等多種成分[2]。有關(guān)沙旋覆花有效成分含量測定未見報道。本文采用HPLC方法對該藥材中的綠原酸含量進(jìn)行研究，為沙旋覆花質(zhì)量分析、評價與控制提供新的依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：1100型高效液相色譜儀 (美國安捷倫公司)，SPD-2A紫外檢測器(島津)，TJ-912型色譜分析平臺(太極計算機(jī)公司)，IN-180型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D超生波清洗器(上海昆山)，電子天平(梅特勒)

1.2 試藥：綠原酸 對照品(111521-200303)由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；其他均為分析純試劑；水為純化水；沙旋覆花于2014年5～6月采自內(nèi)蒙古大青山壩口子。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：Kromasi -C18柱(200mm×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-水-磷酸(65：440：1)；流速：1mL·min-1；溫度：30℃；檢測波長：350nm nm；進(jìn)樣量10μL。在此條件下待測組分可達(dá)到基線分離。樣品中綠原酸 與其它組分有較好的分離，見圖1。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸 對照品適量，加甲醇制成0.62mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品,粉碎，過篩，精密稱定50mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱質(zhì)量，超聲處理40min ，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液1、2、4、8、12、16μL,注入高效液相色譜儀，測定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸, 回歸方程為Y = 1150398 X +97436，r=0.999。結(jié)果表明，綠原酸 在0.62～9.92μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，8，12h進(jìn)樣測定，以綠原酸 峰面積值計算RSD為0.31%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)：吸取同一批供試品溶液，在上述色譜條件下重覆 進(jìn)樣6次，測得綠原酸 峰面積RSD為0.41%。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同批藥材葉子按2.3項(xiàng)下平行制備6份樣品溶液，并按2.1項(xiàng)下測定，綠原酸 的平均含量為0.12%， RSD=0.44%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取同批藥材葉子已知含量的樣品6份，每份取約30mg，精密稱定，分別精密加入綠原酸對照品溶液6.0 μL(3.72 μg)，按2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，同法操作，測定含量，計算回收率。綠原酸平均回收率為101.21%，RSD為1.22%

3 樣品測定

按2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬定的色譜條件測定沙旋覆花綠原酸含量，結(jié)果，花0.11%、葉0.12%、莖枝0.043%、根0.009%，地上部位綠原酸平均含量為0.091%。

4 討論

沙旋覆花是國內(nèi)傳統(tǒng)民族醫(yī)習(xí)用藥材[2]，主要以野生狀態(tài)下采集與使用，多以花卉入藥。由于該藥材在我國大部分地區(qū)均由生長，目前也無有效成分含量測定方法。本文根據(jù)文獻(xiàn)資料沙旋覆花含綠原酸[1]，本文對其測量方法與不同藥用部位中綠原酸含量進(jìn)行了研究。表明，沙旋覆花綠原酸含量可以作為藥材質(zhì)量評價指標(biāo)之一，同時沙旋覆花不同藥用部位綠原酸含量差異較大，葉子含綠原酸最多。

[1]內(nèi)蒙古衛(wèi)生局.內(nèi)蒙古中草藥[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社,1972﹕176 -177.

[2]張馨予，王喆星，單俊杰.旋覆花屬植物化學(xué)成分及生物活性的研究進(jìn)展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2008,35(6)：433-440.

2016年7月10日收稿

國家自然科學(xué)基金(編號：81260659)；內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金(編號：2014MS0860)

張曉曄，副主任藥師，研究方向:臨床藥學(xué)。

R291.2

B

1006-6810(2016)11-0054-02