許　慶　何繼祥　肖植國(guó)

云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南　曲靖　655000

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HPLC法測(cè)定消化膠囊中橙皮苷的含量

許慶何繼祥肖植國(guó)

云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南曲靖655000

【摘要】目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定消化膠囊中橙皮苷的含量。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈-水(20∶80)為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm。結(jié)果：橙皮苷含量在10.15～81.20μg(r=0.9995)范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系；平均回收率為98.50%(RSD為0.46%)。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消化膠囊中橙皮苷的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】消化膠囊；橙皮苷；高效液相色譜法

消化膠囊是曲靖市第一人民醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由陳皮、炒枳殼、厚樸、木香等九味藥經(jīng)過粉碎、過篩、混合后裝入膠囊制得。臨床用于治療胸腹脹滿、食欲不化、嘔吐腹瀉腹痛等癥狀。消化膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中以兩項(xiàng)薄層色譜來鑒別其中部分藥材，未建立制劑中中藥成分含量測(cè)定方法。處方中陳皮、炒枳殼兩味藥均含橙皮苷[2]，本文采用高效液相色譜法對(duì)其中橙皮苷進(jìn)行含量測(cè)定，為有效控制“消化膠囊”質(zhì)量提供可靠且簡(jiǎn)便易行的方法。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1260型高效液相色譜儀(包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD檢測(cè)器，G1316A柱溫箱，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器)；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；PURELAB Flex 3超純水儀(英國(guó)ELGA公司)。

1.2材料橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-201115，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；消化膠囊(批號(hào)：201409102、20140302、201109151，曲靖市第一人民醫(yī)院)。甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Hypersil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(20∶80)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm；進(jìn)樣量10μl。

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液制備取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混勻，取約0.2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(頻率：45KHz；功率：240W)60min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取橙皮苷對(duì)照品20.30mg置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度(作為加標(biāo)溶液，濃度為1.015mg/ml)，再精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.203mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按原處方制備不含炒枳殼、陳皮的陰性樣品，并按“2.2.1”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)將陰性樣品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。色譜圖中在橙皮苷的保留時(shí)間處，無其它成分干擾。

2.4線性關(guān)系的考察分別精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下橙皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、3、4ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，計(jì)算線性回歸方程，得橙皮苷的回歸方程Y=16.9963X+9.0488(r=0.9995)。結(jié)果表明：橙皮苷含量在10.15～81.20μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一質(zhì)量濃度的橙皮苷對(duì)照品溶液在“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，RSD為0.8%。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批消化膠囊5份，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，考察方法的重復(fù)性。供試品中橙皮苷含量RSD為1.2%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液(批號(hào)：201409102)，分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果橙皮苷的RSD為1.3%。表明供試品溶液在室溫下放置24h基本穩(wěn)定。

2.8回收率試驗(yàn)分別取已知含量的同一批消化膠囊(批號(hào)201409102)約0.1g，精密稱定，共6份，分別精密加入對(duì)照品溶液(濃度為1.015mg/ml)1ml,按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，制備供試液，分別測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率為98.50%，RSD為0.46%。見表1。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

2.9樣品含量測(cè)定取不同批號(hào)的供試品3批按“2.2.1”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷含量。見表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3討論

3.1流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)先后試用文獻(xiàn)[3]中甲醇-醋酸-水不同比例作為流動(dòng)相測(cè)定，對(duì)照品及樣品中橙皮苷的峰形及與其他雜質(zhì)的分離效果均不滿意。結(jié)果選用文獻(xiàn)[4]的乙腈-水(20∶80)為流動(dòng)相，能得到對(duì)稱性較好的橙皮苷峰，并且樣品中橙皮苷與其它雜質(zhì)能很好地分離，故選用乙腈-水(20∶80)為流動(dòng)相。

3.2提取方法的選擇 ①提取方法的確定：試驗(yàn)比較了甲醇水浴回流提取和超聲提取，結(jié)果回流提取雜質(zhì)較多，超聲處理簡(jiǎn)便快速，雜質(zhì)較少，且加標(biāo)回收率較好，故選用超聲提取。②超聲時(shí)間的確定：精密稱取樣品(批號(hào)201409102)5份，每份約0.2g，精密加入甲醇50ml，分別超聲(頻率：45KHz;功率：240W)處理20、30、50、60、70 min，結(jié)果超聲50 min后，橙皮苷含量基本不變，證明樣品超聲處理50min后，能將樣品中的橙皮苷提取完全，所以超聲(頻率：45KHz;功率：240W)時(shí)間確定為60 min。

3.3結(jié)論該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消化膠囊中橙皮苷的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1] 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)[S].云南：云南科學(xué)技術(shù)出版社，2005：543.

[2] 呂武清，龍新華.中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1996:327-328.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：176-177.

[4] 蘇紅，劉淇，薛平.橘葉中陳皮苷含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2006(4):19-20.

DETERMINATION OF HESPERIDIN IN DIGESTIVE CAPSULE BY HPLC

XU QingHE JixiangXIAO Zhiguo

Yunnan qujing city food and drug inspection test center,Qujing 655000,China

Abstract:Objective To establish high performance liquid chromatography (HPLC) determination of hesperidin in digestive capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column (4.6mm×250mm,5μm); With acetonitrile - water (0) were as mobile phase, flow rate of 1.0ml/min; Column temperature:30℃; detection wavelength 284 nm.Results Concentration of hesperidin in 10.15～81.20μg (r=0.9995) range and peak area showed a good linear relationship. The average recovery rate was 98.5% (RSD was 0.51%).Conclusion This method is simple and reliable, rapid, accurate and stable results and can be used for determination the content of hesperidin in digestive capsule.

Key words:Digestive capsule; hesperidin; HPLC

(收稿日期：2016.01.18)

【中圖分類號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)07-0019-02