馬宏偉　孫緒丁　田汝芳

1.山東金訶藥物研究開發(fā)有限公司，山東　濟南　250101；2.山東健康藥業(yè)有限公司，山東　濟南　250022Z

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HPLC法測定坐珠達西中西紅花苷的含量

馬宏偉1孫緒丁1田汝芳2

1.山東金訶藥物研究開發(fā)有限公司，山東濟南250101；2.山東健康藥業(yè)有限公司，山東濟南250022Z

【摘要】目的：建立測定坐珠達西中西紅花含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Waters C(18)(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨(40∶5∶55)，檢測波長為440nm；流速為1ml/min；柱溫為30℃。結(jié)果：西紅花苷Ⅰ的質(zhì)量濃度在6.208μg/ml～62.08μg/ml范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線性關系(r=0.9997)；精密度、穩(wěn)定性、重復性的RSD<2%；平均加樣回收率為98.31%，RSD=0.86%(n=6)；西紅花苷Ⅱ的質(zhì)量濃度在3.072～30.72μg/ml范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線性關系(r=0.9999)；精密度、穩(wěn)定性、重復性的RSD<2%；平均加樣回收率為97.69%，RSD=0.99%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡單，結(jié)果準確，可用于坐珠達西中西紅花苷的含量測定。

【關鍵詞】坐珠達西；西紅花苷Ⅰ；西紅花苷Ⅱ；高效液相色譜法

坐珠達西由寒水石、丁香、西紅花、肉豆蔻等35味藥材組成[1]，是藏醫(yī)治療慢性胃炎的常用藥物[2]。坐珠達西中的西紅花又稱藏紅花，為鳶尾科植物番紅花CrocussativusL.的干燥柱頭[3]，為貴重藥材，其主要有效成分為西紅花酸和西紅花苷，藥典以西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ的含量來控制西紅花的質(zhì)量?，F(xiàn)有測定西紅花中西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ的方法較多，但均不適用于成分復雜的藏藥制劑坐珠達西[4-9]。為此，建立坐珠達西中西紅花苷的含量測定方法，為該產(chǎn)品的質(zhì)量標準提高提供參考依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器高效液相色譜儀(日立L-7110泵，日立L-7420紫外檢測器);KQ-300B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；AUW220D型電子天平(日本)。1.2材料西紅花苷Ⅰ(批號：111588-201303)、西紅花苷Ⅱ(批號：111589-201304)購自中國食品藥品檢驗研究院;坐珠達西(批號：20140501、20140502、20140503金訶藏藥股份有限公司)；甲醇、乙腈均為色譜純(美國fisher公司)，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：Waters C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸銨(40∶5∶55)；檢測波長：440nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃。理論板數(shù)按紅花苷Ⅰ峰計算應不低于3500。見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液取西紅花苷Ⅰ對照品約15mg，精密稱定為15.52mg，置10ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得1.552mg/ml的西紅花苷Ⅰ對照品溶液；取西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌芳s7.5mg，精密稱定為7.68mg，置10ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.768mg/ml的西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤?；精密量取上述西紅花苷Ⅰ對照品溶液和西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤焊?ml，置同一50ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得含西紅花苷Ⅰ為31.04μg/ml，含的西紅花苷Ⅱ為15.36μg/ml的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液取坐珠達西樣品，研細，過3號篩，取粉末1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，冰浴中超聲處理20min，放至室溫，再稱定重量，用60%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3線性關系考察精密量取“2.2.1”項下西紅花苷Ⅰ對照品溶液和西紅花苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤焊?ml，置于50ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得含西紅花苷Ⅰ為62.08μg/ml，含西紅花苷Ⅱ為30.72μg/ml的混合對照品溶液，分別精密量取上述混合對照品溶液1、3、5、8，10ml，置10ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，進樣量10μl，記錄色譜峰峰面積。以西紅花苷Ⅰ峰面積(A)對對照品濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程為A=22532.96C-1266.18(r=0.9997)；以西紅花苷Ⅱ峰面積(A)對對照品濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程為A=27149.44C+1868.11(r=0.9999)。結(jié)果表明，西紅花苷Ⅰ在6.208～62.08μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系，西紅花苷Ⅱ在3.072～30.72μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

2.4精密度試驗取“2.2.1”項下混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，進樣量10μl，記錄峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ峰面積的RSD為0.15%(n=6)，結(jié)果，西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD為0.90%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于放置0、2、4、6、8h進樣測定，進樣量10μl，記錄峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ峰面積的RSD為0.14%(n=6)，結(jié)果，西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD為0.19%(n=6)，表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6重復性試驗取同一樣品，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積。結(jié)果，西紅花苷Ⅰ峰面積的RSD為0.46%(n=6)，西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD為1.00%(n=6)，表明該方法重復性良好。

2.7加樣回收率試驗取已知含量的樣品0.5g，共6份，分別加入一定體積的對照品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算樣品含量，并計算加樣回收率，結(jié)果見表1和表2。

表1　西紅花苷Ⅰ加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

表2　西紅花苷Ⅱ加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.8樣品含量測定取三個批號的樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算樣品含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3討論

坐珠達西收載于衛(wèi)生部藏藥部頒標準中，原標準沒有含量測定項。藏藥部頒標準并未公布坐珠達西的全部處方，在已知原藥材中，西紅花是貴重藥材，應當建立含量測定方法。但由于該產(chǎn)品由35味藥材組成，成分復雜，現(xiàn)有關于西紅花中西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的含量測定方法并不適用，或保留時間長，或分離度差。經(jīng)過反復試驗，建立了本文所述方法，可以同時測定西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ，保留時間適中，分離度好，操作簡單，可用于坐珠達西中西紅花的含量測定。

參考文獻

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Content Determination of croci stigma in zuozhudaxi by HPLC

MA Hongwei1SUN Xuding1TIAN Rufang2

1.Shandong Arura Pharmaceutical Research&Development Co.,Ltd.,Jinan 250101,China;2.Shandong Health Pharmaceutical Co., Ltd., Jinan 250022,China

Abstract:Objective To develop a method for the content determination of croci stigma in zuozhudaxi.Methods HPLC method was adopted.The determination was performed on Waters C(18) column (250mm×4.6mm, 5μm) with mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-0.05mol/L ammonium acetate (40∶5∶55) at the flow rate of 1ml/min. The detection wavelength was set at 440 nm, and column temperature was 30 ℃.Results The linear range of crocin Ⅰ were 6.208～62.08μg/ml(r=0.9997) with an average recovery of 98.31% (RSD=0.86%,n=6);RSDs of precision, stability and reproducibility tests weve all lower than 2%. The linear range of crocin Ⅱ were 3.072～30.72μg/ml(r=0.9999) with an average recovery of 97.69% (RSD=0.99%,n=6);RSDs of precision,stability and reproducibility tests weve all lower than 2%.Conclusion The method is simple,accurate,and can be used for the content determination of croci stigma in zuozhudaxi.

Key words:zuozhudaxi;crocin Ⅰ;crocin Ⅱ;HPLC

(收稿日期：2016.01.29)

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)07-0015-02

作者簡介：馬宏偉，工程師，執(zhí)業(yè)中藥師，主要從事藏醫(yī)藥健康品的研究與開發(fā)。E-mail：sdaruratcm@163.com