劉麗莉

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

高效分子排阻色譜法測(cè)定頭孢美唑鈉聚合物含量

劉麗莉

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

目的：使用高效分子排阻色譜法對(duì)頭孢美唑鈉聚合物中的含量進(jìn)行測(cè)定。方法：使用高效分子排阻色譜法，將實(shí)驗(yàn)過(guò)后的結(jié)果使用色譜柱的對(duì)比方法進(jìn)行比較，使用鹽酸緩沖液中的磷酸氫兒鈉與磷酸二氫鈉、乙腈、為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考上的流動(dòng)相；在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)上的處理，實(shí)驗(yàn)人員還要對(duì)實(shí)驗(yàn)溶液上的流速與波長(zhǎng)進(jìn)行考慮與步驟上的安排。結(jié)果：這種實(shí)驗(yàn)方法的使用，使得孢美唑鈉峰與聚合物之間的分離效果達(dá)到了最佳的狀態(tài)。結(jié)論：并且在一定的濃度設(shè)置下峰面積可以與實(shí)驗(yàn)溶液呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。結(jié)論：這種實(shí)驗(yàn)方法在使用的過(guò)程中收獲了較好的實(shí)驗(yàn)效果，與此同時(shí)，這種實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得實(shí)驗(yàn)人員對(duì)其大范圍的推廣。

頭孢美唑鈉；聚合物；TSKgelG2000SWXL凝膠色譜柱

頭孢美挫鈉是一種抗生素在臨床使用過(guò)程中具有良好的抗菌消炎效果，但是，這種藥物在使用過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生復(fù)發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)，這種過(guò)敏源并不是抗生素本身導(dǎo)致的，導(dǎo)致出現(xiàn)這種不良反應(yīng)的原因是頭孢美唑鈉藥品中含有的高分子聚合物。文章通過(guò)葡萄糖凝膠柱法對(duì)這種藥品進(jìn)行聚合物含量的測(cè)定，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用了兩種分析方法，通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)以后發(fā)現(xiàn)，采用高效分子排阻色譜法可以收獲較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并能滿足數(shù)據(jù)上的準(zhǔn)確性，這種方法也更為準(zhǔn)確靈敏。

1 儀器與試藥

目前，頭孢美唑鈉聚合物的測(cè)定未收入國(guó)內(nèi)外藥典，參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，葡聚糖凝膠色譜柱的柱效低，分離效果差(所有聚合物為一個(gè)峰，該峰與主峰未能達(dá)到基線分離)，峰型拖尾，分析時(shí)間長(zhǎng)等。而通過(guò)優(yōu)化色譜條件，采用高效分子排阻色譜法(以下簡(jiǎn)稱：HPSEC)很好地解決了這一問(wèn)題。本文采用HPSEC法對(duì)頭孢美唑鈉的聚合物進(jìn)行測(cè)定，該色譜柱柱效高(柱效上萬(wàn))，主峰和聚合物峰峰型對(duì)稱，分離效果好(該色譜柱可分離出幾個(gè)聚合物峰且聚合物峰與主峰能完全基線分離)。該方法更為準(zhǔn)確、靈敏，簡(jiǎn)便，是β-內(nèi)酰胺抗生素聚合物測(cè)定的必然趨勢(shì)。

高效液相色譜儀：ShimadzuLC-20AT泵、ShimadzuSPD-20A型紫外檢測(cè)器、ShimadzuCTO-20A柱溫箱；Agilent1200泵、Agilent1200二極管陣列檢測(cè)器。頭孢美唑鈉樣品(批號(hào)：120701、120702、120703)，由四川抗菌素工業(yè)研究所提供；頭孢美唑鈉對(duì)照品(批號(hào)：1097782)，由美國(guó)Rockville公司提供；乙睛為色譜純；水為樂(lè)百氏純凈水；其它試劑均為分析純。

2 HPSEC法的方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用TSKgelG2000SWXL凝膠色譜柱(7.8mm×30cm,5μm)(TOSOH公司)，以pH7.0的5mmo/L磷酸鹽緩沖液[5mmol/L磷酸氫二鈉-5mmol/L磷酸二氫鈉(61:39)，V/V]-乙腈(90:10)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm，流速約每 0.6mL/min，柱溫為 25℃。理論板數(shù)按頭孢美唑鈉峰計(jì)算不低于3000，頭孢美唑鈉峰與相鄰聚合物峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的配制及測(cè)定2.2.1供試品溶液制備

取頭孢美唑鈉約50mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含0.5mg的溶液，搖勻即得。

2.2.2 對(duì)照溶液制備

取頭孢美唑鈉對(duì)照品約25mg，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含5μg的溶液。

2.2.3 測(cè)定方法

按2.1項(xiàng)下色譜條件，精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算聚合物的含量。供試品溶液色譜圖請(qǐng)見(jiàn)圖 1(主峰前的峰為聚合物峰)，頭孢美唑鈉峰與相鄰聚合物峰均能達(dá)到基線分離。

2.3 聚合物測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證

取本品約50mg，置100mL容量瓶中，共6份分別按以下條件實(shí)驗(yàn)：(1)未降解樣品；(2)高溫破壞樣：于 60℃下放置 10d，冷卻；(3)酸破壞樣：加0.1mol/LHCl1mL，放置0.5h，取0.1mol/LNaOH溶液1mL中和；(4)堿破壞樣品：加 0.1mol/LNaOH溶液 1mL，放置 1min，取0.1mol/LHCL溶液1mL中和；(5)強(qiáng)光破壞樣：強(qiáng)光(4500±500)照10d；(6)氧化破壞樣：加入3%H2O21mL,放置3h。取上述樣品依法操作，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述條件下的樣品溶液各20μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明：本品對(duì)酸堿很不穩(wěn)定，對(duì)氧化、高溫、光照不穩(wěn)定。但主峰與以上破壞產(chǎn)生的聚合物峰均能獲得良好分離?？梢?jiàn)，所建聚合物檢查法對(duì)樣品中的聚合物包括強(qiáng)破壞條件下產(chǎn)生的聚合物峰均有良好的分離，因此，本聚合物檢查法具有很好的專屬性。

圖1 頭孢美唑鈉HPSEC色譜圖

3 討論

3.1 聚合物的定位

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用葡萄糖凝膠色譜柱檢測(cè)方法可以對(duì)大分子化合物葡萄糖進(jìn)行定位上的分析處理，在分析過(guò)程中，兩種凝膠色譜柱都可以對(duì)藥品中的大分子化合含量進(jìn)行測(cè)定，葡聚糖凝膠色譜柱檢測(cè)方法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要比頭孢美挫鈉主峰出峰早。實(shí)驗(yàn)人員對(duì)頭孢美挫鈉的溶液進(jìn)行收集處理以后，可以采用葡聚糖檸膠色譜柱法對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析處理。處理過(guò)后的數(shù)據(jù)結(jié)果表明，收集到的供試液會(huì)在聚合物位置出峰。

此時(shí)實(shí)驗(yàn)人員可以對(duì)頭孢美銼鈉溶液進(jìn)行提取，葡聚糖凝膠色譜柱法可以對(duì)頭孢美唑鈉的峰前溶液進(jìn)行收集，這樣處理的原因是防止頭孢美唑鈉溶液在放置過(guò)程中與空氣發(fā)生相應(yīng)的化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致測(cè)出的結(jié)果失去原有的精準(zhǔn)性。收集到的供試液實(shí)驗(yàn)人員可以采取凝膠色譜柱法進(jìn)行數(shù)據(jù)上的分析，這樣處理以后，實(shí)驗(yàn)人員可以在實(shí)驗(yàn)結(jié)果反應(yīng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)供試液會(huì)在圖一中的主峰前出峰，這些研究上的結(jié)果表明，頭孢美唑鈉聚合物通過(guò)凝膠色譜法的測(cè)定以后，測(cè)定出的主峰在峰前的鋒面呈現(xiàn)都是聚合物上的鋒面展示，而主峰后的鋒面是小分子雜質(zhì)上的鋒面展示。

3.2 不同凝膠色譜柱的對(duì)比

相關(guān)研究文獻(xiàn)中對(duì)于頭孢美納挫的元素確定，主要的實(shí)驗(yàn)方法是葡萄糖凝膠柱法。這種實(shí)驗(yàn)方法可以對(duì)頭孢美納挫中的聚合物進(jìn)行質(zhì)量分?jǐn)?shù)上的測(cè)定，在方法實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，葡萄糖凝膠會(huì)作為實(shí)驗(yàn)步驟中的填充劑。實(shí)驗(yàn)人員需要使用玻璃內(nèi)徑對(duì)柱長(zhǎng)的中低壓色譜項(xiàng)柱進(jìn)行分離處理。研究結(jié)果表明，頭孢美挫鈉的色譜柱在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中出現(xiàn)了柱效低，濃度高的情況。同時(shí)，這種情況的發(fā)生，也直接導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)峰型出現(xiàn)了拖尾。

這種實(shí)驗(yàn)方法在使用過(guò)程中不僅會(huì)受到實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響，實(shí)驗(yàn)人員在對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析時(shí)，所需要的時(shí)間也較多。在對(duì)溶液進(jìn)行分離處理時(shí)，聚合物由于在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中只能使用一個(gè)峰面，所以，分離的效果往往達(dá)不到實(shí)驗(yàn)人員所期望的標(biāo)準(zhǔn)。為了讓分離效果得到相應(yīng)的提升，實(shí)驗(yàn)人員可以采用高效凝膠色譜柱開(kāi)展實(shí)驗(yàn)上的步驟，這種實(shí)驗(yàn)方法可以讓色譜柱的柱效得到相應(yīng)的提升，分離效果也更好。實(shí)驗(yàn)過(guò)后得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較為準(zhǔn)確，并且實(shí)驗(yàn)人員開(kāi)展實(shí)驗(yàn)步驟時(shí)，操作的步驟基本沒(méi)有發(fā)生任何的調(diào)整，實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單有效。所以，實(shí)驗(yàn)人員在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，應(yīng)該盡量選擇TSKgel凝膠色譜柱的檢測(cè)方法。

[1]丁玉蓮,杜文革,蔡蓉,黃曉軍.凝膠色譜法測(cè)定注射用頭孢美唑鈉的聚合物[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào).2012(05)

[2]江曉玲,劉昆,鄧俊豐,李波.頭孢菌素類抗生素中高分子雜質(zhì)的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè)).2007(06)

[3]袁雯瑋.高分子聚合物研究與中國(guó)藥典 2005年版β-內(nèi)酰胺類抗生素高分子聚合物修訂情況及操作要點(diǎn)[J].中國(guó)抗生素雜志.2005(12)

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1672-5018（2016）12-015-01