肖雪 于天泉

哈藥集團制藥六廠 150000

超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片的溶出度

肖雪 于天泉

哈藥集團制藥六廠 150000

目的：利用超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片的溶出度。方法：使用AgilentXDB-C18的色譜柱，流動相是磷酸二氫銨溶液(用三乙胺調pH值至7.5)-乙腈(50∶50)，檢測的波長是205nm，流動相的流速是0.65mL/min，而且柱溫是35℃。結果：這種方法有著較好的專屬性，濃度還要在25.2ˉ225.2μg/mL的這一范圍內，濃度和峰面積有著良好的線性關系，R2=0.999而且羅紅霉素的平均回收率為99.5%，RSD達到了0.93%。結論：這種方法是極為便捷的，也較為簡單，重復性和準確性都較好，可以用于羅紅霉素分散片溶出度的測定。

超高效液相色譜法；羅紅霉素分散片；溶出度

羅紅霉素是一種大環(huán)內酯類抗生素，羅紅霉素分散片的溶出度在檢查方法上主要是利用高效液相色譜法，但是還沒有使用超高效液相色譜法來進行羅紅霉素分散片溶出度的研究，超高效液相色譜法主要是用于藥品行業(yè)進行分析，因此要根據(jù)超高效液相色譜法的特點來進行羅紅霉素分散片溶出度的測定，這樣就可以快速的實現(xiàn)藥品的檢測。本文就是對超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片溶出度進行分析，為相關的研究提供借鑒。

一、儀器與試藥

超高效液相色譜儀使用的是Agilent1200超高效液相色譜儀，藥物溶出儀是天津大學的智能藥物溶出儀。

羅紅霉素分散片的樣品主要是由四川科倫藥業(yè)提供的，羅紅霉素分析所使用的試劑是乙腈，羅紅霉素的對照品是EP標準的，批號是00BV47，色譜用水是自制的純化水，而其他的試劑是分析純，所有的儀器都要達到標準，滿足基本的試驗需要，否則就會影響到試驗的效果。

二、方法與結果

（一）色譜條件

使用的色譜柱是AgilentXDB-C18色譜柱，標準是50mm×4.6mm，1.8μm，流速是0.65mL/min，流動相是0.067mol/L磷酸二氫銨溶液-乙腈，要用三乙胺將 pH值調到 7.5，柱溫為 35℃，檢測的波長是205nm，進樣量為10μL。

（二）溶出度的測定方法

在進行溶出度測定的時候，需要按照2015年版的《中國藥典》進行溶出度的測定。溶出介質是醋酸鹽緩沖液，pH值為5.5（取醋酸鈉溶液0.04moL/L,利用冰醋酸進行調節(jié)，將醋酸鹽緩沖液的pH值調到5.5），需要緩沖液900mL為溶出介質，依法操作，轉速為100r/min，在經(jīng)過了45min時，就要將溶液取出適量進行過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，另取羅紅霉素的對照品適量，經(jīng)過了精密的稱定之后，加溶出介質進行溶解并且定量稀釋，稀釋成為約0.16mg/ml的溶液，這一溶液就是對照品溶液，在這樣的情況下，就可以按照相應的色譜條件進行上述兩種溶液的測定，進樣量為10μl，將其注入到液相色譜儀中，并且要對色譜圖進行記錄和分析，使用外標法對峰面積進行計算，這樣就可以得到每片的溶出度。

（三）方法學驗證

1.輔料干擾試驗

在進行羅紅霉素分散片干擾試驗的時候，要按照羅紅霉素分散片處方比例來稱取樣品，樣品是不含有主藥的空白輔料，進行精密的稱定后，在里面加入醋酸鹽緩沖液適量，并且利用超聲震蕩的方式進行稀釋，定容到相應的濃度，還要進行搖勻和濾過處理，續(xù)濾液要按照相應的色譜條件進行測定，在此條件下，空白輔料會在1min內出峰，這樣的試驗方式是不會影響樣品測定的。

2.專屬性試驗

取羅紅霉素分散片適量，仔細研磨成細粉，精密稱取適量，相當于羅紅霉素50mg，放入50ml的容量瓶中，之后就可以分別的按照以下的條件進行破壞：（1）堿破壞：要加入5ml的氫氧化鈉溶液，氫氧化鈉溶液必須要達到 0.1mol/L的濃度，將其放下室溫下，放置30min，之后利用0.1mol/L的鹽酸溶液5ml進行中和，之后向里面加入流動相進行溶解，就可以將其稀釋為0.16mg/mL的相應溶液。（2）酸破壞：加入0.1mol/L的鹽酸溶液5mL，于室溫放置30min，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液 5mL中和至中性，加流動相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（3）氧化破壞：加入30%的過氧化氫溶液5mL，于室溫放置30min，加流動相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（4）高溫破壞：在105℃條件下放置2h，取出冷卻至室溫，加流動相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（5）光照破壞：在照度為(4500±500)lx的條件下放置 10d，加流動相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。

按上述色譜條件分別進樣測定，結果表明，羅紅霉素分散片在各破壞條件下均明顯產(chǎn)生降解產(chǎn)物，各降解峰與羅紅霉素能有效分離，且主峰均為單峰(峰純度參數(shù)均在999以上)，該法專屬性較強。

3.線性關系與范圍

取羅紅霉素對照品適量，精密稱定，加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)溶解并稀釋制成濃度分別為25.2、50.4、81.5、100.7、162.9和225.2μ g/mL的溶液，搖勻，進行色譜條件測定，記錄色譜圖。以羅紅霉素濃度(μg/mL)為橫坐標(x)，以主峰峰面積為縱坐標(y)，做線性回歸計算，得出回歸方程：y=2941.2x+3036.8；R2=0.9999。結果表明，羅紅霉素在25.2～225.2μg/mL(相當于測定濃度的15%—140%)范圍內，其濃度與峰面積呈良好的線性關系。

4.對照品重復性與供試液穩(wěn)定性

取羅紅霉素對照品溶液，按色譜條件進樣10μL，重復測定6次的峰面積RSD為0.48%。取供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12和24h進樣考察，結果表明，24h內主峰面積沒有明顯變化，供試品溶液穩(wěn)定。

5.回收率實驗

按處方比例分別精密稱取相當于樣品標示量的50%，80%，100%和120%的主藥及相應量的空白輔料，加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)適量，振搖使羅紅霉素溶解，并加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)稀釋至規(guī)定濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液按以上色譜條件測定，平均回收率為99.5%，RSD為0.93%(n=12)。

6.溶出曲線的繪制

取本品，在5，10，15，20，45和60min時，分別取溶液5mL濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，并及時在溶出杯中補充溶出介質5mL。另取羅紅霉素對照品適量，精密稱定，用上述溶出介質溶解并稀釋制成0.16mg/mL的溶液，作為對照品溶液。將上述2種溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算每片在不同時間的溶出度。實驗結果見表1和圖1。

表1 6個時間點溶出度考察試驗結果

圖1 羅紅霉素分散片溶出曲線

三、討論

測定方法比較

在本品溶出度研究過程中發(fā)現(xiàn)，以《中國藥典》的溶出度測定色譜條件進行測定，羅紅霉素主峰的保留時間約15min，而UPLC方法的主峰保留時間約為 5min，即將原來溶出度測定的工作量縮減為1/3左右。在當前國家高度重視藥品質量的大環(huán)境下，溶出曲線對比將成為固體制劑質量評價的一個重要指標，將會有越來越多的企業(yè)開展仿制藥一致性評價工作，采用UPLC法測定本品的溶出度，將極大地縮短了分析時間，有利于高效、快速、準確的開展該項工作，必將大大減少成本，促進節(jié)能環(huán)保，應用前景廣闊。

[1]洪利婭,孫曉明,王建.高效液相色譜法測定羅紅霉素片與羅紅霉素分散片溶出度[J].醫(yī)藥導報,2011,30(2):251-253

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].2015年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:651-652.

S567.23+9

A

1672-5018（2016）12-152-01