張華勇

針對(duì)食源性微生物污染引起的食品安全問題，卡尤迪生物為業(yè)界帶來了前沿的技術(shù)支持，和優(yōu)良的解決方案。為此，《食品安全導(dǎo)刊》記者采訪了卡尤迪生物科技有限公司副總經(jīng)理單長輝先生。

記者：國內(nèi)食品微生物檢測(cè)現(xiàn)狀如何？都有哪些檢測(cè)技術(shù)？

單長輝：在國內(nèi)，食品受到食源性微生物污染現(xiàn)象比較嚴(yán)重，食源性致病菌對(duì)人體造成傷害甚至死亡，而且近年來微生物引起的食品安全問題呈逐年遞增態(tài)勢(shì)，廣大老百姓及政府部門對(duì)此也十分關(guān)注，一旦發(fā)生食源性微生物污染事件對(duì)食品企業(yè)的信譽(yù)和形象都會(huì)產(chǎn)生不利的影響，公眾對(duì)政府部門處置的能力也會(huì)產(chǎn)生質(zhì)疑。目前檢測(cè)方法主要分為傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法和以金標(biāo)、酶免和PCR為代表的快速檢測(cè)方法。

記者：食品微生物檢測(cè)，卡尤迪有何好的解決方案？

單長輝：由卡尤迪獨(dú)創(chuàng)的“一步法”免核酸提取熒光定量PCR技術(shù)平臺(tái)針對(duì)于各種食源性細(xì)菌和病毒，如大腸桿菌O175、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特菌、彎曲菌、諾如病毒等可以進(jìn)行快速，準(zhǔn)確的鑒定。利用卡尤迪“一步法”實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)可以在大型實(shí)驗(yàn)室、基層實(shí)驗(yàn)室、現(xiàn)場進(jìn)行食品病原微生物核酸檢測(cè)，其特點(diǎn)是不需要核酸提取步驟，靈敏度高。在不增菌的情況下直接檢測(cè)牛奶、雞蛋、肉類等食品中病原微生物，靈敏度可達(dá)102 cfu/mL，符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于國標(biāo)中不得檢出的微生物，可以利用市售快速增菌培養(yǎng)基進(jìn)行4～6小時(shí)的增菌過程，增菌過后直接檢測(cè)，可以達(dá)到相關(guān)要求。在食品微生物檢測(cè)中通常是定性檢測(cè)，卡尤迪“一步法” 實(shí)時(shí)熒光定量既可以進(jìn)行定性檢測(cè)，又可以通過與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比做到絕對(duì)定量與相對(duì)定量，定量范圍在檢出限102 cfu/mL以上。

記者：Mini8實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀基于何原理快檢？

單長輝：基于的是熒光定量PCR的原理，PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí)， 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5端-3端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。理論上只要加樣的樣本中有一個(gè)致病微生物便可以被檢測(cè)出來，具有極高的靈敏度，這就大大縮短了前增菌的時(shí)間，可以在4個(gè)小時(shí)左右達(dá)到國標(biāo)不得檢出的標(biāo)準(zhǔn)。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。理論上只需要有1個(gè)DNA分子就可以在1個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增到數(shù)以億記的DNA分子，我們使用的熒光定量PCR是在PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí)， 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5端-3端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。這樣加入Taqman探針的熒光定量PCR具有極高的特異性，產(chǎn)生假陽性的幾率非常之低，保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

記者：PCR儀相比同類產(chǎn)品有何亮點(diǎn)和競爭力？

單長輝：PCR的方法相對(duì)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法和快檢中的酶免金標(biāo)等方法具有速度快、準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，由于PCR所檢測(cè)的是微生物的核酸，而且能在1小時(shí)內(nèi)大量擴(kuò)增檢測(cè)，這是其他方法所做不到的，傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法時(shí)間往往需要2～3天，而酶免等方法也需要1天的時(shí)間，PCR方法在4～6個(gè)小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，時(shí)間上具有很大優(yōu)勢(shì)。在準(zhǔn)確性上由于PCR方法檢測(cè)DNA片段的引物探針具有極高的特異性，在檢測(cè)的準(zhǔn)確性上也要高于酶免金標(biāo)等方法。

記者：Mini8實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀有何特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)？

單長輝：Mini8便攜式熒光定量PCR儀，將PCR熱循環(huán)與熒光檢測(cè)和各種軟件算法有機(jī)結(jié)合，可實(shí)時(shí)觀察到PCR反應(yīng)每次擴(kuò)增中產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化。PCR之后，即可馬上得到定量結(jié)果，免去了傳統(tǒng) PCR后續(xù)的PCR產(chǎn)物純化，凝膠電泳分析等費(fèi)時(shí)費(fèi)力的環(huán)節(jié)。 通過采用創(chuàng)新性的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，Mini8能為用戶有效節(jié)約單個(gè)反應(yīng)的試劑成本，反應(yīng)體積可配置15～150UL，一個(gè)半小時(shí)左右即可得到精準(zhǔn)的定量結(jié)果。 此外，Mini8是市場上唯一一款可使用12V直流電源，可車載，可在移動(dòng)環(huán)境使用的實(shí)時(shí)熒光定量PCR，非常適合現(xiàn)場檢測(cè)，針對(duì)突發(fā)食品安全事件具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。

記者：卡尤迪產(chǎn)品有何檢測(cè)的成功案例？分享給大家？

單長輝：在不增菌的情況下直接檢測(cè)牛奶、雞蛋、肉類等食品中病原微生物，從拿到樣本到出結(jié)果時(shí)間控制在90分鐘以內(nèi)。如果進(jìn)行快速增菌步驟，經(jīng)過4小時(shí)的增菌，總的檢測(cè)時(shí)間控制在6小時(shí)以內(nèi)。由于卡尤迪一步法技術(shù)平臺(tái)剛上市不久，在食品方面應(yīng)用還不是很廣泛，但在檢驗(yàn)檢疫、病毒檢測(cè)上應(yīng)用十分廣泛，卡尤迪研發(fā)的基于一步法技術(shù)平臺(tái)的寨卡病毒檢測(cè)試劑已經(jīng)在北京、浙江、上海、深圳、廣州、福建、遼寧等地檢驗(yàn)檢疫局和疾病預(yù)防與控制中心得到了大面積的應(yīng)用，可以直接在機(jī)場口岸等地對(duì)疑似病例進(jìn)行現(xiàn)場檢驗(yàn)。同時(shí)我們的一步法技術(shù)平臺(tái)在動(dòng)物疫病檢測(cè)、癌癥篩查、個(gè)性化用藥指導(dǎo)、乙肝丙肝檢測(cè)、突發(fā)應(yīng)急事件中得到了廣泛應(yīng)用。

記者：卡尤迪產(chǎn)品的市場推廣情況與客戶評(píng)價(jià)如何？

單長輝：我們現(xiàn)在已經(jīng)開發(fā)了部分食源性微生物檢測(cè)試劑盒，可以直接對(duì)復(fù)雜的食品樣本進(jìn)行檢測(cè)，由于免去了復(fù)雜的核酸提取過程，在同類PCR產(chǎn)品中卡尤迪具有操作簡便、檢測(cè)時(shí)間短的優(yōu)勢(shì)，由于卡尤迪一步法技術(shù)平臺(tái)剛上市不久，在食品方面應(yīng)用還不是很廣泛，但在檢驗(yàn)檢疫、病毒檢測(cè)上應(yīng)用十分廣泛，客戶的總體評(píng)價(jià)就是方便、快速、準(zhǔn)確。如今在《食品安全導(dǎo)刊》媒體平臺(tái)的幫助下，把我們的產(chǎn)品推廣給了全國各級(jí)食監(jiān)部門、檢驗(yàn)所、食品企業(yè)、流通、零售終端及更多用戶，使得我們的產(chǎn)品獲得了越來越廣泛的歡迎與贊譽(yù)。