李媛 趙振華 李勇 劉晨星 郭鳳倩 李佳 張永清

摘要：對青、白、紅三個(gè)品種萊菔子樣品的顏色、形狀、長度、寬度、千粒重、微形態(tài)等特征進(jìn)行觀察，運(yùn)用UV法測定總黃酮含量，HPLC法測定芥子堿及蘿卜苷含量，并進(jìn)行比較。結(jié)果表明，三個(gè)品種萊菔子在外觀形態(tài)和活性成分含量上均有較大差異，可從外觀形態(tài)和微形態(tài)方面初步對三個(gè)品種萊菔子進(jìn)行區(qū)分。以總黃酮、芥子堿、蘿卜苷等活性成分含量進(jìn)行評價(jià)時(shí)，紅蘿卜藥用價(jià)值為最高。建議《中國藥典》增加總黃酮、蘿卜苷兩種內(nèi)在指標(biāo)，全面對萊菔子進(jìn)行含量分析和質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：萊菔子；形態(tài)特征；活性成分

中圖分類號：S330.2文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2016）06-0058-04

萊菔子為十字花科植物蘿卜（Raphanus sativus L.）的干燥成熟種子，具有消食除脹、降氣化痰的功效[1]。萊菔子原植物來源廣泛、資源豐富，全國各地皆產(chǎn)，河北、河南、浙江、黑龍江為其主產(chǎn)地[2]。作為衛(wèi)生部公布的“藥食同源物品”之一，萊菔子應(yīng)用范圍較廣，不僅可榨油食用，而且具有較高的藥用價(jià)值。《本草綱目》[3]記載其“辛甘，平，無毒”；“下氣定喘，治痰，消食，除脹，利大小便，止氣痛，下痢后重，發(fā)瘡疹”?，F(xiàn)代藥理研究表明萊菔子具有平喘、鎮(zhèn)咳、祛痰[4]、降血壓[5]、降血脂[6]、增強(qiáng)胃腸道動(dòng)力[7]、改善泌尿系統(tǒng)[8]等多種藥理作用。

目前藥材市場上萊菔子品種眾多，入藥品種繁雜難辨，質(zhì)量參差不齊，以青、白、紅三個(gè)品種為主，但《中國植物志》、《中國藥典》等文獻(xiàn)著作在萊菔子藥材項(xiàng)下并未對不同品種進(jìn)行系統(tǒng)探究。本研究收集和整理了三個(gè)品種萊菔子樣品，通過形態(tài)特征及化學(xué)成分含量的比較，對樣品進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，以了解不同品種的質(zhì)量情況，為篩選優(yōu)良品種、完善萊菔子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保證臨床用藥的安全有效及資源的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料

供試材料采集于濟(jì)南市歷城區(qū)仲宮鎮(zhèn)，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定，均為十字花科植物蘿卜的干燥成熟種子。

1.2儀器與試劑

SZX7體視顯微鏡（奧林巴斯公司）、游標(biāo)卡尺（上海九量五金工具有限公司）、SC7620型真空鍍膜儀（EMITECH公司）、SUPRA55型熱場發(fā)射掃描電子顯微鏡（德國蔡司公司）、PL203電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、CP225D電子天平（賽多利斯公司）、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、UV 5100B型紫外可見分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）、安捷倫1260高效液相色譜儀（包括G1311C四元泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315B二極管陣列檢測器、G1316A柱溫箱和Agilent Chemstation工作站）、芥子堿硫氰酸鹽（批號20141113，純度為98%）、蘿卜苷（批號29510701，純度為98%）、蘆丁（MUST-15010707，純度98%）購于中國藥品生物制品檢定所。乙腈、磷酸、醋酸為色譜純，甲醇、乙醇為分析純。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1形態(tài)特征觀察選擇成熟飽滿的種子置于體視顯微鏡下，觀察外觀顏色、形狀等特征。每個(gè)品種隨機(jī)選取30粒種子，用游標(biāo)卡尺測量其長、寬，取平均值。測千粒重（g），重復(fù)3次。

1.3.2微形態(tài)特征觀察用超聲波清洗機(jī)洗凈并用毛筆輕輕刷去種皮表面的灰塵、雜質(zhì)，置于吸水紙上自然干燥備用。在體視顯微鏡下將5粒樣品種子分別粘貼于掃描電鏡樣品臺的雙面膠紙上，將雙面膠另一面粘于干凈的玻片上，用真空鍍膜儀噴鍍金膜90 s，移入熱場發(fā)射掃描電子顯微鏡樣品室，在5 kV 加速電壓下觀察種子形態(tài)、表面紋飾、種臍性狀等，選擇具有代表性的種子表面、局部和種臍拍照。

1.3.3總黃酮含量測定取適量種子置于烘箱中40℃干燥至恒重，粉碎，過40目篩，置于硅膠干燥器中備用。

精密稱取萊菔子粉1 g，加80%乙醇10 mL，超聲提取20 min，過濾；重復(fù)1次；取兩次所得溶液過濾于50 mL容量瓶，定容至刻度，備用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：分別精密吸取0.215 mg/mL對照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置10 mL容量瓶中，各加80%乙醇至2.5 mL，分別精密加入5%亞硝酸鈉0.4 mL，搖勻，放置6 min；加10%硝酸鋁0.4 mL，搖勻，放置 6 min；加氫氧化鈉6 mL，加80%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min。以第一瓶作為空白對照，于190～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，最大吸收波長在510 nm處。因此，選用510 nm作為檢測波長。以總黃酮濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=11.603X-0.00413，R2=0.9995。線性范圍為0.01075～0.0645 mg/mL。

1.3.4芥子堿含量測定參照《中國藥典》2015版（一部）萊菔子項(xiàng)下芥子堿含量測定方法。

色譜條件：Agilent ZORBAX Phenyl色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-3%冰醋酸溶液（15∶85）為流動(dòng)相；采用二元梯度洗脫，柱溫30℃；檢測波長為326 nm，參比波長為360 nm；流速1 mL/min。進(jìn)樣量：20 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：精密稱取芥子堿硫氰酸鹽對照品適量，加70%甲醇制成濃度為0.099 mg/mL的對照品儲備液。以峰面積（Y）對進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=351.85X+300.84，R2=0.9996，線性范圍為0.198～4.455 μg。

1.3.5蘿卜苷含量測定參照文獻(xiàn)[9]的方法。精密稱取過三號篩后的萊菔子粉0.15 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入純凈水20 mL，密塞，稱重，超聲處理，冷卻，純凈水補(bǔ)重，過0.45 μm的微孔濾膜，濾液置棕色瓶中。

色譜條件：Agilent ZORBAX SB-C18色譜（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.1%磷酸-水溶液作為流動(dòng)相（5∶95），采用二元梯度洗脫，柱溫30℃；檢測波長225 nm，參比波長360 nm；流速1 mL/min。進(jìn)樣量：20 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：精密稱取蘿卜苷對照品適量，加純凈水制成濃度為0.222 mg/mL的對照品儲備液。以峰面積（Y）對進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=1019X+2.346，R2=1，線性范圍為0.222～1.554 μg。

2結(jié)果與分析

2.1外觀形態(tài)特征

三個(gè)品種萊菔子為紅棕色或黃棕色，卵圓形或橢圓形，一側(cè)有數(shù)條縱溝，種子表面有由明顯凸起條紋構(gòu)成的致密網(wǎng)狀紋理，種臍點(diǎn)狀，褐色，略微外突。平均長度0.306～0.390 cm，寬度0.247～0.299 cm，千粒重9.734～17.079 g。長度、寬度、千粒重均以白蘿卜最大，以紅蘿卜最小，不同品種之間長度、寬度、千粒重差異顯著（表1）。

2.2微形態(tài)特征

三個(gè)品種萊菔子都是凹陷的網(wǎng)狀紋飾，網(wǎng)脊皆隆起，但網(wǎng)脊粗細(xì)、網(wǎng)紋凹陷程度、網(wǎng)眼大小有所不同。青蘿卜種子網(wǎng)脊隆起最為明顯，網(wǎng)紋凹陷最深，網(wǎng)眼最大，其網(wǎng)眼長度與白蘿卜、紅蘿卜差異顯著。紅蘿卜種子網(wǎng)脊隆起最不明顯，網(wǎng)紋凹陷最淺，網(wǎng)眼最小。種臍均位于種子基部一端，但種臍凹陷程度和直徑有所區(qū)別：青蘿卜種臍凹陷最深，直徑最小；白蘿卜種子種臍凹陷最淺，直徑最大（圖1，表2）。

2.3活性成分含量

三個(gè)品種萊菔子活性成分含量差異顯著（表3）。紅蘿卜總黃酮含量最高，為0.544%，白蘿卜最低，為0.428%；紅蘿卜芥子堿含量最高，為1.640%，白蘿卜最低，為1.210%；蘿卜苷含量以紅蘿卜最高，為0.238%，青蘿卜最低，為0.163%。

3討論與結(jié)論

青、白、紅三個(gè)品種萊菔子的顏色、形狀、大小、千粒重差異顯著，可從外觀上初步進(jìn)行比較；微形態(tài)方面亦有差別，種皮表面網(wǎng)脊粗細(xì)、網(wǎng)紋凹陷程度、網(wǎng)眼大小以及種臍性狀差異對萊菔子品種的鑒定具有重要參考價(jià)值。本研究在外觀性狀鑒別的基礎(chǔ)上加入內(nèi)在成分指標(biāo)，總黃酮、芥子堿、蘿卜苷含量均以紅蘿卜為最高，藥用價(jià)值較高。

2015版《中國藥典》中只規(guī)定了芥子堿作為藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。研究表明，蘿卜苷等硫苷類化合物具有較高的抗癌活性[10]，黃酮類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)等多種藥理作用[11]。因此，本研究選取總黃酮、芥子堿、蘿卜苷3個(gè)內(nèi)在指標(biāo)進(jìn)行綜合比較，彌補(bǔ)藥典中萊菔子藥材質(zhì)量評價(jià)的局限性，為保證臨床用藥的安全有效及資源的開發(fā)利用提供依據(jù)。

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