伍潔

[摘要] 目的 研究晚期結(jié)腸癌組織與轉(zhuǎn)移灶中KRAS基因突變對(duì)臨床治療和用藥的意義。方法 整群收集該院 2014年1-12月手術(shù)的68例原發(fā)晚期結(jié)腸癌組織和轉(zhuǎn)移灶。用直接測(cè)序法檢測(cè)KRAS基因突變情況。結(jié)果 ①癌組織中KRAS基因突變率60.29%（41/68），轉(zhuǎn)移灶為55.88%（38/68），癌組織的突變率高，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。②肝轉(zhuǎn)移KRAS基因突變率58.62%（34/58）較肺轉(zhuǎn)移26.67%（4/15）患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；③癌組織與轉(zhuǎn)移灶的KRAS基因突變同時(shí)存在的有36例，一致率為89.71%（61/68），一致性較高（Kappa=0.89）。結(jié)論 結(jié)直腸癌患者中，癌組織KRAS基因突變率高于轉(zhuǎn)移灶，一致率為89.71%。KRAS基因突變提示侵襲轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高，易耐藥復(fù)發(fā)預(yù)后不良。建議原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶同時(shí)檢測(cè)。

[Abstract] Objective To research the significance of KRAS mutation in the colon cancer tissue and metastasis in late stage for the clinical treatment and mediation. Methods 68 cases of primary colon cancer tissues and metastases receiving operation in our hospital from January 2014 to December 2014 were collected and the KRAS mutation condition was detected by direct sequencing method. Results ①The KRAS mutation rate in the cancer tissues was higher than that in the metastases， 60.29%[41/68 vs 55.88%（38/68）]， the difference was not statistically significance （P>0.05）.②the KRAS mutation rate in the liver metastasis was higher than that in the pulmonary metastasis， the difference was statistically significant （P<0.05）.③The KRAS mutation in the cancer tissues and the KRAS mutation in the metastases coexisted in 36 cases， the consistency rate was 89.71%（61/68）， and the consistency was high （Kappa=0.89）. Conclusion The KRAS mutation rate in the cancer tissues is higher than that in the metastases for patients with colon cancer， the consistency rate is 89.71%， the KRAS mutation reminds that the risk of invasion and metastasis is high， and it is prone to drug resistant and recurrence and the prognosis is not good， it is suggested that the primary lesion and metastasis are detected at the same time.

[Key words] Colon cancer； KRAS mutation； Metastasis

隨著對(duì)CRC發(fā)病分子機(jī)制和信號(hào)傳導(dǎo)通路的深入研究，證明RAS信號(hào)通路激活與惡性腫瘤的發(fā)病、進(jìn)展和惡性程度密切相關(guān)[1]。野生型KRAS基因可抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，一旦突變就會(huì)持續(xù)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。KRAS檢測(cè)是目前篩選抗EGFR靶向藥物治療最有效直接的方法[2]。靶向藥物耐藥是惡性腫瘤存在的普遍現(xiàn)象，其耐藥機(jī)制復(fù)雜為多種基因共同參與的結(jié)果。相關(guān)臨床試驗(yàn)證實(shí)KRAS、BRAF突變型的患者出現(xiàn)耐藥不能從抗EGFR治療中獲益預(yù)后生存差[3]。目前有研究認(rèn)為，mCRC原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶均可作為基因突變檢測(cè)的靶標(biāo)組織，但有研究證明轉(zhuǎn)移灶基因突變具有高度異質(zhì)性，根據(jù)治療需要實(shí)時(shí)檢測(cè)[4]。該研究分析該院 2014年1—12月收治的68例結(jié)腸癌患者癌組織和轉(zhuǎn)移灶基因KRAS突變情況，探討癌組織與轉(zhuǎn)移灶KRAS突變的差異及其對(duì)臨床治療和用藥的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群收集該院68例經(jīng)病理科診斷外科手術(shù)原發(fā)結(jié)腸癌患者癌組織和轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本。男性36例，女性32例；年齡43～69歲，平均（54.6±9.1）歲。根據(jù)UJCC標(biāo)準(zhǔn)臨床分期為Ⅳ期，其中有58例伴有肝轉(zhuǎn)移、15例肺轉(zhuǎn)移（5例肝肺轉(zhuǎn)移）。入選患者術(shù)前均未行任何治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用DNA分子直接測(cè)序法，用上海碧云天生物有限公司的DNA提取試劑盒提取DNA。利用軟件Premier5.0設(shè)計(jì)PCR引物序列，用純化試劑盒將PCR產(chǎn)物純化，取5 μL PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳經(jīng)溴化乙啶染色，紫外燈下照相存盤，紫外凝膠分析成像系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果并打印。將檢測(cè)有單一條帶的樣本送公司測(cè)序，經(jīng)人工校對(duì)記錄后用DNAMAN6.0軟件與基因庫BRAF基因序列比較結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用（n，%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，應(yīng)用Kapparel統(tǒng)計(jì)方法統(tǒng)計(jì)一致性。

2 結(jié)果

2.1 KRAS基因突變情況

癌組織中KRAS基因突變率60.29%（41/68），轉(zhuǎn)移灶為55.88%（38/68），癌組織比轉(zhuǎn)移灶高，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.79，P>0.05）。

2.2 肝肺轉(zhuǎn)移突變比較

有肝轉(zhuǎn)移患者癌組織KRAS基因突變58.62%（34/58）明顯高于肺轉(zhuǎn)移患者26.67%（4/15），二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.94，P<0.05）。

2.3 癌組織與轉(zhuǎn)移灶KRAS基因表達(dá)結(jié)果比較

癌組織與轉(zhuǎn)移灶的KRAS基因突變同時(shí)存在的有36例，以癌組織中檢測(cè)的KRAS突變?yōu)闇?zhǔn)一致率87.80%（36/41），整體的一致率為89.71%（61/68），一致性較高（Kappa=0.89）。

3 討論

腫瘤形成和發(fā)展的不同階段不但具有不同的基因突變表達(dá)譜，而且腫瘤組織的異質(zhì)性存在異克隆生長(zhǎng)的現(xiàn)象，因此轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶之間可能具有不同的生物學(xué)特性和特異性基因型[5]。按照目前臨床常規(guī)診療的流程，因?yàn)闄z測(cè)位點(diǎn)和治療位點(diǎn)的偏移，會(huì)導(dǎo)致患者在用藥選擇方面缺乏科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性。該研究結(jié)腸癌患者中癌組織KRAS突變率比轉(zhuǎn)移灶高。雖然原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中基因表達(dá)并不完全一致，但是兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。譚聰?shù)萚6]研究76例結(jié)直腸癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶基因突變狀態(tài)并不完全一致，存在19.7%的表達(dá)差異率。提示通過檢測(cè)原發(fā)灶基因表達(dá)狀態(tài)來確定針對(duì)轉(zhuǎn)移灶靶向治療藥物存在不嚴(yán)謹(jǐn)，需要進(jìn)一步完善。冼海兵等[7]對(duì)75例原發(fā)灶和對(duì)應(yīng)肝轉(zhuǎn)移灶KRAS基因突變的對(duì)比研究一致率93.1%（k=0.842）。提示對(duì)于無法取得原發(fā)灶組織，用轉(zhuǎn)移灶替代檢測(cè)對(duì)治療也具有重要意義[8]。建議對(duì)基因表達(dá)不一致患者進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，提供用藥依據(jù)增加獲益人群。

綜上所述， 該研究對(duì)癌組織與轉(zhuǎn)移灶中KRAS突變情況進(jìn)行了初步研究，癌組織與轉(zhuǎn)移灶的KRAS突變有差異。目前檢測(cè)中大部分轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌患者是提供原發(fā)灶的樣本，靶向治療的靶點(diǎn)是轉(zhuǎn)移病灶，有可能與原發(fā)灶不一致情況，二者同時(shí)檢測(cè)非常必要。KRAS與癌組織的耐藥和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，對(duì)于治療方案選擇依據(jù)和逆轉(zhuǎn)措施的實(shí)施具有重要指導(dǎo)意義，為臨床治療提供準(zhǔn)確理論依據(jù)。

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