聶贛娟 雷戰(zhàn)平

[摘要] 目的 探討液基細胞學聯(lián)合免疫細胞化學檢測技術在胸水診斷和鑒別診斷中的意義。 方法 隨機收集該院2010年1月—2014年12月肺腺癌和反應性增生間皮細胞胸水病例各30例，通過液基細胞學技術制片，免疫細胞化學染色，檢測胸水細胞中細胞角蛋白-7、甲狀腺轉錄因子-1、間皮細胞蛋白、鈣結合蛋白的表達情況。 結果 肺腺癌和反應性增生間皮細胞胸水中4種抗體的表達比較差異有統(tǒng)計學意義，其敏感性分別為93.3%、83.3%、83.3%、86.7%，特異性分別為90%、100%、93.3%、90%。結論 液基細胞學和免疫細胞化學檢測技術的聯(lián)合使用對胸水中肺腺癌和反應性增生間皮細胞診斷和鑒別診斷具有重要的臨床應用價值。

[Abstract] Objective To discuss the significance of liquid based cytology combined with immunocytochemical technique in diagnosis and differentiation of hydrothorax. Methods 30 cases of patients with lung adenocarcinoma and 30 cases of patients with reactive hyperplasia mesothelial cell？hydrothorax treated from January 2010 to December 2014 were collected， the expression of cytokeratin -7， thyroid transcription factor-1， mesothelial cell？protein and calcium binding protein was detected by liquid based cytology preparation technique and imunocytochemical stain. Results The difference in the expression of four kinds of antibodies in the lung adenocarcinoma and reactive hyperplasia mesothelial cell hydrothorax was statistically significant， the sensitivity was respectively 93.3%， 83.3%， 83.3% and 86.7%， and the specificity was respectively 90%， 100%， 93.3% and 90%. Conclusion The combined application of liquid based cytology combined with immunocytochemical technique is of important clinical application value to the diagnosis and differentiation of lung adenocarcinoma and reactive hyperplasia？mesothelial cell in hydrothorax.

[Key words] Hydrothorax； Liquid based cytology； Immunocytochemical

胸水是肺部病變常見的并發(fā)癥，脫落細胞學檢查是判斷胸水良惡性最簡單易行的檢測方法。常規(guī)胸水涂片中細胞少、分布不均勻、背景不清晰，增生的間皮細胞和腺癌細胞有時難以鑒別[1]。與傳統(tǒng)的脫落細胞學涂片檢查相比，液基細胞學檢測在標本保存、制片、染色和診斷等方面都有顯著優(yōu)勢，是提高標本檢測準確率和檢出率的一種新技術[2]。該研究隨機收集該院2010年1月—2014年12月臨床送檢的肺腺癌和反應性增生間皮細胞胸水病例各30例，通過聯(lián)合液基細胞學和免疫細胞化學檢測技術，檢測甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）、細胞角蛋白-7（CK7）和間皮細胞蛋白 （MC）、鈣結合蛋白（CR）在胸水細胞中的表達，探討其在胸水細胞學診斷和鑒別診斷中的臨床應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機收集該院2010年1月—2014年12月臨床送檢的肺腺癌和反應性增生間皮細胞胸水病例各30例，其中肺腺癌胸水病例男性13例，女性17例，平均年齡（53.7±14.441）歲，反應性增生間皮細胞胸水病例男性14例，女性16例，平均年齡（46.2.±10.829）歲。所選病例診斷依據(jù)臨床資料、影像學檢查及病理組織學結果。

1.2 儀器

低速離心機（SC3612 安徽中科中佳科學儀器有限公司）、調(diào)速多用振蕩器（HY-2 常州市華普達教學儀器有限公司）、液基自動染色機（Tib AutoPrep1800泰普生物科學有限公司）、光學顯微鏡（Olympus BX41）。

1.3 試劑

液基細胞學試劑由泰普生物科學有限公司提供，免疫細胞化學抗體（TTF-1、CK7、CR、MC）、S-P超敏試劑盒（鼠/兔）、DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術開發(fā)有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 液基細胞學制片 臨床送檢的新鮮胸水標本取50 mL，離心機2 000 r/min離心5 min，去上清，加入細胞保存液，靜置5 min。取離心靜置后的標本進行過濾處理，去除血液、蛋白液、細胞碎片等成分。加入梯度離心液進行梯度離心，去上清、震蕩，使離心管底部沉積的細胞處于懸浮狀態(tài)。將處理好的標本放入液基自動染色機中進行染色。

1.4.2 疫細胞化學染色 將剩余的胸水標本離心過濾制成細胞懸浮液（處理過程同上）。將處理好的標本移入染色槽中沉降 10 min。倒出剩余的標本，經(jīng)過固定、沖洗、風干處理后用于免疫細胞化學染色。免疫細胞化學步驟按S-P超敏試劑盒及DAB顯色試劑盒說明進行。

1.5 評價標準

由兩名病理醫(yī)師閱片鏡檢進行結果判定。陽性表達為著色定位準確并呈明顯棕黃色或棕褐色顆粒。CK7陽性表達為細胞膜著色；TTF-1陽性表達為細胞核著色；MC陽性表達為腫瘤細胞漿或間皮細胞的胞膜著色；CR陽性表達為細胞核或細胞質(zhì)著色。

1.6 統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗，以 P <0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 液基細胞學鏡檢

腺癌細胞形態(tài)學特征為：細胞緊密排列呈腺腔樣、乳頭狀、團狀，三維立體結構明顯。細胞核大、深染，染色質(zhì)粗，核仁明顯，核膜厚，核漿比大。胞漿內(nèi)可見粘液性空泡，核偏位呈印戒樣。反應性增生的間皮細胞形態(tài)學特征為：細胞單個散在或成片排列，平鋪狀，無明顯的三維立體結構，部分細胞核大、深染，可見1～2個核仁，但胞漿豐富，染色質(zhì)細膩。

2.2 免疫細胞化學

CK7、TTF-1 、MC、CR在胸水腺癌細胞和反應性增生的間皮細胞表達陽性結果見表1。

3 討論

液基細胞學技術是近年來出現(xiàn)的一種新的細胞學制片技術，在臨床婦科和非婦科細胞學檢查中都得到了廣泛應用。與傳統(tǒng)的胸水細胞涂片方法相比其優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下幾個方面：（1）制片 自動化、標準化程度高，減少了手工操作的誤差。細胞分布均勻，厚薄一致，不易掉片。去除了紅細胞和蛋白等的干擾，使背景清楚，細胞學形態(tài)清晰可見，三維立體效果明顯易于診斷[3]。（2）診斷 細胞集中沉降于直徑15 mm的面積中，縮減了鏡檢范圍，減少閱片時間，使誤診率和漏診率大大降低，提高了診斷的準確性和可靠性[4]。（3）鑒別診斷 保存了細胞抗原的生物特性，對細胞免疫化學檢測無影響，兩者聯(lián)合可用于胸水細胞學的鑒別診斷。

增生的間皮細胞和腺癌細胞受到胸水的刺激會發(fā)生形態(tài)學上的改變，因而單純使用細胞形態(tài)學鑒別兩者有時會存在一些診斷困難[5]。免疫細胞化學染色是胸水細胞學診斷的重要手段，液基細胞學與免疫細胞化學檢測技術聯(lián)合使用有助于提高胸水的診斷率。CK7是分子量為54 Kda的細胞角蛋白，常表達于卵巢、肺、乳腺的上皮細胞質(zhì)中，可作為肺腺癌分化的客觀指標[6-7]。侯興華等[8]研究報道CK7在胸水診斷中的靈敏性為85.7%，特異性為96%。TTF-1是分子量為38～40 Kda的核蛋白，在甲狀腺上皮、胎兒肺組織和成人Ⅱ型肺泡上皮中存在，除外甲狀腺來源的腫瘤后可作為肺腺癌較為特異的腫瘤標記物[9-10]。Ng WK等[11]研究報道TTF-1在胸水診斷中的靈敏性為88.2%，特異性為100%， Ye J等[12]研究顯示TTF-1在胸水中表達的靈敏性為80%，特異性為100%。該研究中CK7和TTF-1在胸水腺癌細胞診斷中的靈敏性分別為93.3、83.3%%，特異性分別為90%、100%，與研究結果較為相符。MC是一種酸性氨基多聚糖蛋白，陽性表達部位為腫瘤細胞漿或間皮細胞的胞膜著色，在鑒別腺癌及間皮細胞中具有較好的靈敏性和特異性[13-14]。崔彬等[15]研究結果顯示MC在間皮細胞中表達的靈敏性為91.3%，特異性為95.2%。CR是一種相對分子質(zhì)量為29 Kda的鈣結合蛋白，是鑒別胸水非腫瘤性間皮細胞和腫瘤細胞較好的標記物[16]。研究顯示[17-19]，CR在間皮細胞中表達的靈敏性為81.6%～100%，特異性87.2%～97.1%。該研究中MC和CR在胸水增生的間皮細胞診斷中的靈敏性分別為83.3%、86.7%，特異性分別為93.3%、90%，與文獻研究結果較為一致。單個抗體對不同腫瘤的特異性和敏感性不同，該文聯(lián)合使用TTF-1、CK7、MC、CR四種免疫組化染色指標聯(lián)合檢測的方法，對增生的間皮細胞和腺癌細胞進行診斷和鑒別診斷，相互補充，能有效地提高診斷的靈敏度和特異度。

胸腔積液良惡性的診斷和鑒別診斷對于疾病的診斷、治療和預后具有重要意義。該文聯(lián)合液基細胞學和免疫細胞化學兩種方法對胸水進行檢測，顯著提高了胸水細胞學檢查的制片質(zhì)量和診斷能力，細胞形態(tài)學和免疫學結合為胸水腺癌和增生的間皮細胞診斷和鑒別診斷奠定了良好的基礎。

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（收稿日期：2015-12-08）