陳應超，郭俊宇，王瑋，周潔，肖蘭，楊繼洲(孝感市中心醫(yī)院，湖北孝感 432100)

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喉鱗狀細胞癌組織POK紅系髓性致癌因子、p53表達及意義

陳應超，郭俊宇，王瑋，周潔，肖蘭，楊繼洲(孝感市中心醫(yī)院，湖北孝感 432100)

摘要：目的探討POK紅系髓性致癌因子(Pokemon)和p53蛋白在喉鱗狀細胞癌(LSCC)發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法采用免疫組化法檢測55例份LSCC組織(觀察組)及30例份癌旁正常組織(對照組)Pokemon、p53表達，分析Pokemon、p53陽性表達與LSCC患者臨床病理參數(shù)的關系。結果觀察組與對照組Pokemon陽性率分別為67.3%(37/55)、20.0%(6/30)，兩者比較P<0.05；p53陽性率分別為56.4%(31/55)、0(0/30)，兩者比較P<0.05。Pokemon陽性表達與LSCC分化程度、淋巴結轉移及臨床分期有關(P均<0.05)，p53陽性表達與LSCC淋巴結轉移有關(P<0.05)。LSCC組織中Pokemon與p53表達呈正相關(r=0.402，P<0.01)。結論Pokemon、p53在LSCC組織中表達均升高，Pokemon、p53的高表達可能在LSCC的發(fā)生及轉移中起重要作用。

關鍵詞：喉腫瘤；喉鱗狀細胞癌；POK紅系髓性致癌因子；p53

POK紅系髓性致癌因子(Pokemon)作為一種轉錄因子參與多種癌基因與抑癌基因的轉錄與調節(jié)，在細胞惡性轉化過程中發(fā)揮重要作用[1]。Pokemon的高表達與人類多種腫瘤如肝癌[2]、結腸癌[3]、食管鱗癌[4]、口腔鱗癌[5]等的發(fā)生、發(fā)展密切相關。抑癌基因p53與細胞周期調控密切相關，通過使細胞分裂阻滯在G1期、激活或抑制大量p53下游基因的表達而使細胞發(fā)生凋亡。Pokemon能特異性抑制ARF/p53通路，使p53表達下調，導致細胞增殖調控失效，從而導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[6]。本研究探討Pokemon及p53在LSCC發(fā)生、發(fā)展中的作用及其相互關系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2006～2011年孝感市中心醫(yī)院收治的55例LSCC患者，其中男50例、女5例，年齡39～81(61.0±18.8)歲。均經(jīng)手術及病理學檢查確診。術前均未行放、化療。病理分化程度：高分化21例、中分化19例、低分化15例；原發(fā)部位：聲門上型15例、聲門型37例、聲門下型3例；根據(jù)1997年UICC制定的TNM分期標準：T1+T2期38例、T3+T4期17例；無淋巴結轉移35例、有淋巴結轉移20例；Ⅰ+Ⅱ期32例、Ⅲ+Ⅳ期23例。手術留取LSCC組織55例份為觀察組，癌旁正常黏膜組織30例份為對照組。

1.2Pokemon及p53表達檢測采用免疫組化EliVision二步法。收集石蠟包埋的組織標本，4 μm連續(xù)切片，每張切片滴加Pokemon (1∶150)或p53抗體(即用型)，DAB顯色、蘇木精復染后脫水封片。具體步驟參照試劑盒說明書。PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定標準：Pokemon染色陽性信號主要定位于細胞核，少數(shù)位于細胞質，以癌細胞胞核染成黃色或棕黃色顆粒為主。p53染色陽性信號主要定位于細胞核，少數(shù)位于細胞質。采用雙盲法，每張切片隨機觀察10個高倍鏡視野(×400)，每個視野計數(shù)100個細胞，計算陽性細胞百分率，≤10%為陰性，>10%為陽性。分析Pokemon及p53陽性表達與LSCC患者臨床病理參數(shù)的關系，以及Pokemon與p53表達的相關性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組Pokemon及p53陽性表達率比較觀察組及對照組Pokemon陽性率表達分別為67.3%(37/55)、20.0%(6/30)，兩者比較P<0.05；p53陽性表達率分別為56.4%(31/55)、0(0/30)，兩者比較P<0.05。

2.2Pokemon及p53陽性表達與LSCC患者臨床病理參數(shù)的關系見表1。

2.3LSCC組織中Pokemon與p53表達的相關性LSCC組織中Pokemon與p53表達呈正相關(r=0.402，P<0.01)。

表1　　　　Pokemon及p53陽性表達與LSCC患者

3討論

Pokemon基因是轉錄抑制因子POK家族的重要成員之一， 2005年被確定為原癌基因，其定位于19p13.3，該基因由2個外顯子及2個內含子構成，其中含有1個開放的閱讀框，編碼1個含584個氨基酸基Pokemon蛋白多肽，分子量為61.5 kDa。Pokemon促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展的可能機制：①抑制腫瘤抑制基因ARF及其激動劑等[6]；②參與其他癌基因H-ras、EGF等致癌過程[7,8]；③通過阻止細胞的凋亡與衰老，促進其惡性增殖[9,10]。本研究顯示，觀察組Pokemon陽性率顯著高于對照組，且Pokemon高表達與LSCC分化程度、淋巴結轉移及臨床分期有關，與其在肝癌[2]、食管鱗癌[4]、口腔鱗癌[5]中的研究結果相似，提示LSCC侵襲轉移的過程中Pokemon高表達可能是重要的分子事件。

p53是一種與人類腫瘤密切相關的抑癌基因，其表達產(chǎn)物分為野生型與突變型兩種亞型。野生型p53蛋白的主要功能是在細胞分裂周期內一旦出現(xiàn)DNA的損傷，其能使細胞分裂阻滯在G1期，從而使細胞有充分的時間來修復DNA損傷；而對DNA損傷嚴重的細胞，其還能通過激活或抑制大量p53下游基因的表達而使細胞發(fā)生凋亡；但其半衰期縮短不易檢測。突變型p53蛋白失去上述功能，促進細胞惡性轉化，因其半衰期長，目前免疫組化檢測的是突變型p53蛋白。李霞等[11]的研究結果顯示，野生型p53蛋白的表達缺失可能與LSCC的發(fā)生、發(fā)展有關。

研究表明，Pokemon可通過抑制抑癌基因ARF的轉錄來發(fā)揮致癌作用，通過上調Pokemon→下調ARF→上調MDM2→下調p53→引起p53介導的細胞凋亡途徑功能障礙，從而導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[6]。陳軍等[2]發(fā)現(xiàn)肝癌、結腸癌組織中Pokemon的高表達與突變型p53表達呈正相關。結合本研究結果，Pokemon表達陽性者突變型p53陽性表達率顯著高于Pokemon陰性者；Spearman等級相關分析結果顯示，LSCC組織中Pokemon表達與突變型p53表達呈正相關，可以認為LSCC組織中Pokemon高表達可提高p53突變率，促進LSCC的發(fā)生、發(fā)展。

總之，Pokemon可能通過提高抑癌基因p53的表達而促進LSCC的發(fā)生、發(fā)展，Pokemon高表達對判斷LSCC的發(fā)生、預測轉移趨勢有一定的臨床意義。

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(收稿日期：2015-08-28)

中圖分類號：R739.65

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)12-0070-02

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.12.025

通信作者：周潔(E-mail: cycpcy2001@sina.com)