李軍德 趙群 康彥 高波 李燈林 楊艷 黃璐琦 ??

[摘要]該研究分析了4個(gè)不同的飼養(yǎng)密度和5種飼料對中華蟾蜍Bufo gargarizans蝌蚪生長發(fā)育的影響，以確定最適養(yǎng)殖密度和飼料種類。在飼養(yǎng)密度實(shí)驗(yàn)中，中華蟾蜍蝌蚪分別飼養(yǎng)在200，500，1 000，2 000只/m2的不同密度條件下；在飼料種類實(shí)驗(yàn)中，將中華蟾蜍蝌蚪分為5組，分別用5種不同飼料喂食。每隔7 d測量和記錄1次蝌蚪的體重、頭體長、尾長和死亡個(gè)數(shù)。結(jié)果表明：飼養(yǎng)密度試驗(yàn)和飼料種類試驗(yàn)中，中華蟾蜍蝌蚪臨近變態(tài)時(shí)（變態(tài)前）和變態(tài)后的成活率分別為687%～963%，57%～360%；飼養(yǎng)密度對蝌蚪變態(tài)前的成活率沒有顯著影響，中華蟾蜍蝌蚪在最適養(yǎng)殖密度1 000只/m2時(shí)，蝌蚪具有較大的體重和成活數(shù)量；飼料種類對蝌蚪變態(tài)前的成活率沒有顯著影響，喂食飼料Ⅱ（379%粗蛋白和57%粗脂肪），Ⅳ（251%粗蛋白和40%粗脂肪）和Ⅴ（雞蛋黃）的蝌蚪均具有較大的體重，這3種飼料均為中華蟾蜍蝌蚪較為適宜的飼料，人工養(yǎng)殖具體采用何種飼料，可根據(jù)飼料的易得性和成本進(jìn)行選擇與組合。

[關(guān)鍵詞]中華蟾蜍；蝌蚪；養(yǎng)殖密度；飼料；生長發(fā)育

蟾蜍是蟾蜍屬Bufo物種的通稱，隸屬于兩棲綱Amphibia無尾目Anura蟾蜍科Bufonidae[1]。蟾蜍屬分布極為廣泛，全世界范圍內(nèi)，分布于除馬達(dá)加斯加、大洋洲、巴布亞新幾內(nèi)亞和南太平洋島嶼外的各個(gè)地區(qū)，種類約255至283種；中國現(xiàn)有15種（含5亞種），在各省（區(qū)）均有分布[13]。該屬中華蟾蜍B gargarizans、黑眶蟾蜍B melanostictus為藥用動(dòng)物。以蟾皮水溶性成分開發(fā)的藥品（華蟾素注射液等）生產(chǎn)需要大量蟾蜍提供蟾皮，特別是中華蟾蜍為目前國內(nèi)蟾皮藥材和華蟾素制劑的主要來源，其抗腫瘤有效成分蟾蜍噻嚀的含量也較高[48]，對中華蟾蜍的需求量日益增加。但近年來環(huán)境污染和生態(tài)環(huán)境惡化，中華蟾蜍棲息地逐漸減少，野生資源急劇下降[9]，為了保護(hù)野生資源和滿足臨床與生產(chǎn)需求，開展規(guī)?；?、規(guī)范化人工養(yǎng)殖成為保證中華蟾蜍來源的重要途徑。

飼養(yǎng)密度和食物營養(yǎng)組成直接影響蝌蚪的成活率和質(zhì)量。飼養(yǎng)密度對蝌蚪的生長發(fā)育和變態(tài)時(shí)體質(zhì)，進(jìn)而對變態(tài)后幼體的體質(zhì)會有很大的影響[10]。王漢屏以中國林蛙為研究對象，發(fā)現(xiàn)其蝌蚪的生長發(fā)育速度隨飼養(yǎng)密度的升高而減慢[11]。關(guān)于飼養(yǎng)密度對中華蟾蜍生長發(fā)育影響的研究尚未見報(bào)道。

食物是蝌蚪成活率的限制因子，也影響蝌蚪的變態(tài)率和幼體成活率[10]。在人工養(yǎng)殖過程中，所飼養(yǎng)蝌蚪的數(shù)量和密度非常大，單靠自然水中的食物已不能滿足它們需要，必須對蝌蚪進(jìn)行人工投喂飼料[12]。崔明勛等用動(dòng)物性飼料組、植物性飼料組、復(fù)合氨基酸組和普通飼料組對中國林蛙蝌蚪的食物試驗(yàn)表明，采用動(dòng)物性飼料有利于蝌蚪的生長發(fā)育及變態(tài)后幼體的存活率[10]。耿寶榮等通過不同飼料對黑眶蟾蜍蝌蚪生長的影響試驗(yàn)表明，蝌蚪要以粗蛋白含量較高的飼料為食才能獲得較大的生長量；蛋黃中粗蛋白量為324%，可以作為蝌蚪養(yǎng)殖時(shí)重要的飼料組成成分；而用40%～50%的鰻魚飼料（或牛蛙蝌蚪飼料）作為黑眶蟾蜍蝌蚪的飼料，也即用粗蛋白含量約為20%的配合飼料可以取得較為理想的效果[13]。李新紅等通過不同飼料對中國林蛙蝌蚪生長發(fā)育影響的試驗(yàn)表明，動(dòng)物性飼料比例大、蛋白質(zhì)含量高的組合飼料所喂養(yǎng)的蝌蚪發(fā)育速度較快[14]。至于飼料成分對中華蟾蜍蝌蚪發(fā)育影響的研究則很少有報(bào)道。

目前，中華蟾蜍人工養(yǎng)殖技術(shù)還未達(dá)到規(guī)范化，致使養(yǎng)殖過程中幼蟾成活率低。幼蟾成活率與蝌蚪期營養(yǎng)狀態(tài)和健康狀態(tài)密切相關(guān)，要提高幼蟾的成活率，首先要保證蝌蚪在養(yǎng)殖過程中要有較高成活率和健康體質(zhì)，必須研究、探索中華蟾蜍蝌蚪的合理飼養(yǎng)密度及食物營養(yǎng)組成，以提高幼蟾成活率，為建立規(guī)范化中華蟾蜍人工養(yǎng)殖技術(shù)體系及其應(yīng)用推廣打下基礎(chǔ)。

1材料

試驗(yàn)所用蝌蚪由采集于江蘇、山東和河北3個(gè)產(chǎn)地的中華蟾蜍種蟾所產(chǎn)卵自然孵化而來。以上3個(gè)產(chǎn)地的蝌蚪隨機(jī)混合在一起，在同一個(gè)飼養(yǎng)池飼養(yǎng)馴化至少14 d后，按下文中飼養(yǎng)密度和飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)要求平均放入每個(gè)試驗(yàn)用玻璃飼養(yǎng)缸中，在每個(gè)玻璃飼養(yǎng)缸中蝌蚪在生長初期的平均質(zhì)量是沒有顯著差異的。

每個(gè)玻璃飼養(yǎng)缸的長×寬×高為60 cm × 100 cm × 150 cm，缸內(nèi)水深30 cm。用沙子和磚塊在缸內(nèi)鋪建三分之一面積的陸地，陸地和水接觸的一面邊緣要有一定的緩坡，便于變態(tài)期間幼體隨時(shí)登陸和下水，順利完成水陸之間的過渡。玻璃飼養(yǎng)缸放在通風(fēng)和光照條件良好的室內(nèi)環(huán)境中。

2方法

21飼養(yǎng)密度將蝌蚪按200，500，1 000，2 000只/m2的飼養(yǎng)密度梯度分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)分別飼養(yǎng)于1個(gè)玻璃飼養(yǎng)缸中。檢測主要水質(zhì)指標(biāo)，保證其符合《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（GB116071989）》的規(guī)定。每天定時(shí)定量喂食。每天喂食2次，分別為上午8：30和下午2：30各1次；每次投食量為飼養(yǎng)缸中蝌蚪總重的10%左右，每隔7 d根據(jù)蝌蚪的實(shí)際質(zhì)量調(diào)整投食量。

每隔7 d測量和記錄1次數(shù)據(jù)，每個(gè)重復(fù)組至少測量5個(gè)樣本，主要測量蝌蚪的體重、頭體長、尾長和死亡個(gè)數(shù)。其中，頭體長是自吻端至肛管基部的長度；尾長是自肛管基部至尾末端的長度[1]。蝌蚪全部變態(tài)完畢后結(jié)束本試驗(yàn)。

22飼料營養(yǎng)組成將蝌蚪分為5組，每組飼養(yǎng)密度均為200只/m2，每組3個(gè)重復(fù)。飼養(yǎng)缸的規(guī)格、水質(zhì)要求和飼養(yǎng)管理同飼養(yǎng)密度試驗(yàn)。用玉米粉、豆餅粉、肉骨粉、魚粉、麥麩、復(fù)合維生素、酵母和新鮮蔬菜的莖葉為主要原料，配成4種在粗蛋白和粗脂肪含量有差異的組合飼料。每種組合飼料中的粗蛋白含量用凱氏法測定、粗脂肪含量通過索氏提取器用石油醚提取測定。4種組合飼料的編號、所含原料比例、粗蛋白含量和粗脂肪含量見表1。在5組蝌蚪中，其中4組分別飼喂Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ等4種不同的組合飼料，第5組飼喂雞蛋黃（飼料編號為Ⅴ）。每天飼喂2次，喂食時(shí)間和投食量同以上飼養(yǎng)密度試驗(yàn)。

每隔7 d測量和記錄1次數(shù)據(jù)，每個(gè)重復(fù)組至少測量5個(gè)樣本，主要測量和記錄其體重、頭體長、尾長和死亡個(gè)數(shù)，直到蝌蚪全部變態(tài)完畢形成幼蟾。

23數(shù)據(jù)處理所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)分析之前，進(jìn)行正態(tài)分布和方差的同質(zhì)性檢驗(yàn)。如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布和方差的同質(zhì)性，可以直接進(jìn)行方差分析；如果數(shù)據(jù)沒有正態(tài)性分布或不具同質(zhì)性，則必須將數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換以達(dá)到正態(tài)性和同質(zhì)性的要求后方能繼續(xù)進(jìn)行方差分析。

用統(tǒng)計(jì)軟件Statistica 60[15]分別以飼養(yǎng)密度、飼料種類、生長發(fā)育時(shí)間為作用因素，對體重、頭體長、尾長和成活率等數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析、單因素方差分析或二因素方差分析，最終找出蝌蚪在變態(tài)時(shí)成活率高、體重大的飼養(yǎng)密度和飼料組合即人工養(yǎng)殖蝌蚪的適宜密度和飼料。

3結(jié)果與分析

無論是在飼養(yǎng)密度試驗(yàn)還是飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)中，中華蟾蜍蝌蚪的體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)都受生長發(fā)育時(shí)間的顯著影響（P<005），見表2。在飼養(yǎng)密度試驗(yàn)中，除生長發(fā)育時(shí)間外，密度也是影響蝌蚪生長指標(biāo)的主要因素（P<005）。而頭體長還受到飼養(yǎng)密度和蝌蚪發(fā)育時(shí)間之間的互作影響（P=0000 1）。在飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)中，體重受到飼料種類的顯著影響（P<005）。盡管在該試驗(yàn)中，頭體長和尾長受飼料種類的影響不顯著，但卻受到飼料種類和生長發(fā)育時(shí)間之間的互作影響（頭體長P=0000 0；尾長P=0000 1）。

蝌蚪的體重和頭體長分別與密度呈負(fù)相關(guān)（r=-0511 4，P=0000 0；r=0499 8，P=0000 0）。在飼養(yǎng)密度和飼料種類試驗(yàn)中，頭體長與體重之間均表現(xiàn)為線性相關(guān)程度很高的正相關(guān)（密度試驗(yàn)r=0816 1，P=0000 0；飼料試驗(yàn)r=0866 5，P=0000 0）。具有相關(guān)性的變量之間的直線回歸方程分別見表3，4。進(jìn)入第28天后，變態(tài)蝌蚪處于敏感期，出現(xiàn)大量死亡。

盡管在之后通過延長各玻璃飼養(yǎng)缸中增氧機(jī)運(yùn)行時(shí)間和增加換水頻率等措施使剩余的變態(tài)期蝌蚪得到了有效控制，但在之后的數(shù)據(jù)由于大量蝌蚪樣本的缺失（蝌蚪死亡所致），則不能與之前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)合并而用于試驗(yàn)分析。因此，本報(bào)告中，主要以從第7天到第28天記錄的蝌蚪期數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果為有效數(shù)據(jù)和結(jié)論，而大量蝌蚪死亡之后的第35天變態(tài)期的數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析僅作為參考而不作為本試驗(yàn)結(jié)論。

31飼養(yǎng)密度試驗(yàn)在飼養(yǎng)密度試驗(yàn)中，從第7天到第28天臨近變態(tài)期時(shí)，各個(gè)密度試驗(yàn)組中蝌蚪的體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)大多隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加，而到第35天變態(tài)期時(shí)，3種生長指標(biāo)大多比第28天減少。在第28天時(shí)，蝌蚪的體重在不同密度組間具有顯著的差異，表明飼養(yǎng)密度對蝌蚪體重影響很大（P=0000 5）。其中，密度為2 000只/m2的試驗(yàn)組蝌蚪體重顯著小于其他3個(gè)密度組，而其他3個(gè)密度組之間的蝌蚪體重沒有顯

著差異。密度為2 000只/m2的試驗(yàn)組蝌蚪的頭體長也顯著小于其他3個(gè)密度組（P=0000），且其他3個(gè)密度組之間的頭體長也沒有差異。4個(gè)密度組蝌蚪的平均尾長則沒有顯著差異（P=0213），見表5。

變態(tài)前成活率（893%～963%）和變態(tài)后成活率（57%～243%）在4個(gè)密度試驗(yàn)組間均無顯著性差異，見表6，表明不同飼養(yǎng)密度對蝌蚪的成活率影響不大。

32飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)在飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)中，從第7天到第28天臨近變態(tài)期時(shí)，各個(gè)飼料種類試驗(yàn)組中蝌蚪的體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)大多隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加，而到第35天變態(tài)期時(shí)，3種生長指標(biāo)大多比第28天減少。這種情況與以上飼養(yǎng)密度試驗(yàn)的結(jié)果一致。在第28天時(shí)，蝌蚪的體重在不同飼料種類試驗(yàn)組間具有顯著的差異，表明飼料種類對蝌蚪的體重有很大的影響（P=

0007 9）。其中，飼料種類為Ⅴ的試驗(yàn)組的蝌蚪體重顯著大于飼料種類為Ⅰ，Ⅲ這2個(gè)試驗(yàn)組，而與飼料種類為Ⅱ，Ⅳ的試驗(yàn)組間沒有顯著差異，見表7。

盡管Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ組之間的蝌蚪體重?zé)o顯著差異，但Ⅱ和Ⅳ組更接近于Ⅴ組，因此，在從蝌蚪的體重來看，用Ⅱ（28%玉米粉、19%豆餅粉、16%肉骨粉、17%魚粉、10%酵母、3%多維和6%新鮮蔬菜），Ⅳ（43%玉米粉、13%豆餅粉、0%肉骨粉、6%魚粉、10%酵母、4%多維和24%新鮮蔬菜）和Ⅴ（雞蛋黃）這3種飼料養(yǎng)殖蝌蚪效果較好。此外，蝌蚪的頭體長和尾長在5個(gè)不同飼料組中沒有顯著的差異。所以，可以通過體重選擇所用的飼料種類。

變態(tài)前成活率（687%～960%）和變態(tài)后成活率（123%～360%）在5個(gè)飼料種類試驗(yàn)組間均無顯著性差異，見表8。表明不同飼料種類對蝌蚪的成活率影響不大，或者說給蝌蚪喂食不同飼料，對其變態(tài)前成活率影響不大。

4討論

飼養(yǎng)密度試驗(yàn)和飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)結(jié)果都表明：中華蟾蜍蝌蚪體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)在蝌蚪期會隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加，當(dāng)進(jìn)入變態(tài)期后，這些生長指標(biāo)大多都會減少。這與有關(guān)文獻(xiàn)研究的在一些無尾目蝌蚪在變態(tài)前期達(dá)到最大體重，在變態(tài)期時(shí)體重迅速減少的結(jié)論相一致[12，14]。用飼養(yǎng)密度和飼料種類分別與生長發(fā)育時(shí)間為作用因素對蝌蚪體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)的雙因素方差分析表明，飼養(yǎng)密度對以上3種生長指標(biāo)都有顯著性影響，飼料種類對體重有顯著影響。飼養(yǎng)密度和飼料種類分別與生長發(fā)育時(shí)間的互作對蝌蚪的生長指標(biāo)也有很大的影響。因此，可以分別對飼養(yǎng)密度和飼料種類2種因素進(jìn)行試驗(yàn)和分析，找出

每種因素中最合適的水平。同時(shí)，由于各試驗(yàn)組的蝌蚪在試驗(yàn)初期都是經(jīng)過人為選擇在平均體重、頭體長和尾長等生長指標(biāo)方面無顯著差異的個(gè)體，因此在試驗(yàn)時(shí)各期的體重、頭體長和尾長的絕對差異均可代表體重、頭體長和尾長的增長率差異。

在密度試驗(yàn)和飼料種類試驗(yàn)中，頭體長與體重之間具有很高的正相關(guān)性表明，蝌蚪在生長時(shí)，其體重通常會隨著頭體長的生長而增加，因此通過對蝌蚪體重或頭體長的測量，可以分別推知其他相關(guān)生長指標(biāo)的情況。

41飼養(yǎng)密度試驗(yàn)在飼養(yǎng)密度試驗(yàn)中，蝌蚪的體重和頭體長分別與密度成負(fù)相關(guān)的結(jié)果表明，飼養(yǎng)密度太高會嚴(yán)重減小蝌蚪的體重而對蝌蚪的生長發(fā)育及變態(tài)后生活產(chǎn)生不利影響。但是，在2 000只/m2的飼養(yǎng)密度下（也即約7只/L），第28天測量的蝌蚪尾長與其他3種更低飼養(yǎng)密度下的蝌蚪?jīng)]有差異，這與研究人員對于其他無尾目蝌蚪的研究所得出的密度不超過80只/L時(shí)密度對蝌蚪尾長的增長率影響不顯著的結(jié)論相一致[16]。

飼養(yǎng)密度試驗(yàn)的結(jié)果表明，飼養(yǎng)密度對蝌蚪變態(tài)前和變態(tài)后的成活率均無顯著影響，而對蝌蚪變態(tài)初期的體重和頭體長有顯著影響，因此在選擇適宜飼養(yǎng)密度時(shí)，只要考慮有利于體重和頭體長的密度水平即可。由于密度為2 000只/m2的蝌蚪體重和頭體長明顯小于其他3個(gè)密度組，因此在養(yǎng)殖過程中，要排除2 000只/m2的飼養(yǎng)密度。又由于其他3個(gè)密度組對蝌蚪的體重和頭體長無顯著影響，因此，出于飼養(yǎng)效率考慮，1 000只/m2的飼養(yǎng)密度既可以使蝌蚪在變態(tài)前期具有較高的體重，又有較多的數(shù)量，所以本研究的最適飼養(yǎng)密度為1 000只/m2。

42飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)飼料營養(yǎng)組成的試驗(yàn)表明，給蝌蚪分別喂以5種不同飼料，蝌蚪的成活率沒有顯著差異。因此，在成活率沒有差異的情況下，只要考察不同飼料對蝌蚪體重、頭體長和尾長的影響，即可選擇出適宜的飼料類型。由于在臨近蝌蚪變態(tài)期時(shí)，不同飼料對蝌蚪的頭體長和尾長的生長無影響，而對體重有顯著的影響，因此，可通過飼料對蝌蚪體重的影響選合適的飼料類型。飼喂飼料Ⅴ（雞蛋黃）的蝌蚪體重明顯大于飼喂飼料Ⅰ和Ⅲ的蝌蚪，因此對于這3種飼料來說，飼料Ⅴ的效果較好，能更好地促進(jìn)蝌蚪的生長發(fā)育，而飼料Ⅱ和飼料Ⅳ對蝌蚪體重的影響接近于飼料Ⅴ，和飼料Ⅴ相比沒有顯著差異，所以在養(yǎng)殖時(shí)，用飼料Ⅱ，Ⅳ和Ⅴ飼喂蝌蚪，均可取得較好的效果，都是適宜的飼料，具體選用哪一種，可以根據(jù)這3種飼料的成本而定。

43中華蟾蜍的生態(tài)對策根據(jù)生態(tài)對策可以把生物分為2類，一類為r對策者，另一類為K對策者[1718]。K對策者中的K是指環(huán)境所能負(fù)擔(dān)的種群的最大密度，即環(huán)境容納量或環(huán)境載力（carrying capacity）。K對策者通常壽命長，個(gè)體大，具有完善的保護(hù)后代的機(jī)制，后代成活率高，但其出生率很低，如很多大型獸類為K對策者，其每個(gè)個(gè)體產(chǎn)生的后代很少[1718]。而r對策者正相反，r表示物種的潛在增殖能力（per capita growth rate），其繁殖能力強(qiáng)，出生率很高，但后代的個(gè)體小，缺乏保護(hù)后代的機(jī)制，無親代關(guān)懷和防御能力弱，在自然條件下后代死亡率很高而成活率很低[1718]。而中華蟾蜍為典型的r對策者，后代出生率雖然很高，但在自然條件下成活率極低，所以本研究的目的，就是克服自然條件下的不利因素，通過人工養(yǎng)殖盡可能避免自然條件下的不利環(huán)境和提供充足的食物和棲息條件（如飼養(yǎng)密度），在中華蟾蜍高繁殖力下，進(jìn)一步提高其后代的成活率。中華蟾蜍后代（蝌蚪）在自然條件下成活率極低，本研究在密度試驗(yàn)中蝌蚪變態(tài)前和變態(tài)后成活率分別為893%～963%和57%～243%，在飼料種類試驗(yàn)中分別為687%～960%和123%～360%，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蟾蜍蝌蚪在自然條件下的相應(yīng)成活率。

根據(jù)本研究的試驗(yàn)結(jié)果，可得出以下結(jié)論：飼養(yǎng)密度試驗(yàn)和飼料營養(yǎng)組成試驗(yàn)中，中華蟾蜍蝌蚪臨近變態(tài)時(shí)（變態(tài)前）和變態(tài)后的成活率分別為687%～963%，57%～360%。中華蟾蜍蝌蚪的最適養(yǎng)殖密度為1 000只/m2，Ⅱ（379%粗蛋白和57%粗脂肪），Ⅳ（251%粗蛋白和40%粗脂肪）和Ⅴ（雞蛋黃）等3種飼料都是中華蟾蜍蝌蚪較為適宜的飼料，具體在養(yǎng)殖時(shí)采用哪種飼料類型，可以根據(jù)當(dāng)時(shí)飼料的易得性和成本進(jìn)行選擇。在后續(xù)工作中進(jìn)一步加大對變態(tài)期蝌蚪死亡原因的研究。

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[責(zé)任編輯呂冬梅]