趙晨暉，周文龍，黃　滔，張志偉，王名偉，張朝暉，楚晨龍，楊安卿，馬斌斌

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KDR、MC2R和PCNA在產(chǎn)醛固酮腺瘤與腎上腺皮質(zhì)增生病變中的表達(dá)和意義

趙晨暉1，周文龍2，黃滔1，張志偉1，王名偉1，張朝暉1，楚晨龍1，楊安卿1，馬斌斌1

［摘要］目的:探討激酶插入?yún)^(qū)受體(KDR)、促腎上腺皮質(zhì)激素受體2(MC2R)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在產(chǎn)醛固酮腺瘤(APA)與腎上腺皮質(zhì)增生(IHA)中的表達(dá)和意義。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測KDR、MC2R和PCNA在APA和IHA病變組織中(各40例)的表達(dá)情況。結(jié)果:APA組織中KDR、MC2R和PCNA的陽性表達(dá)率分別為40．0%、32．5%和85．0%; IHA組織中KDR、MC2R和PCNA的陽性表達(dá)率分別為65．0%、62．5%和77．5%; 2種病變組織中，KDR、MC2R和PCNA的表達(dá)強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05～P＜0．01)。結(jié)論:KDR、MC2R和PCNA在IHA病變的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，對于鑒別APA和IHA病變具有重要的參考意義。

［關(guān)鍵詞］產(chǎn)醛固酮腺瘤;腎上腺皮質(zhì)增生;激酶插入?yún)^(qū)受體;促腎上腺皮質(zhì)激素受體2;增殖細(xì)胞核抗原

［作者單位］1．上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院泌尿外科，上海200020; 2．上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院泌尿外科，上海200025

原發(fā)性醛固酮增多癥在高血壓人群中發(fā)病率為5%～13%［1］，是繼發(fā)性高血壓常見病因之一。腎上腺皮質(zhì)增生(IHA)和產(chǎn)醛固酮腺瘤(APA)是原發(fā)性醛固酮增多癥最常見的2種亞型，其中IHA占60%，APA占35%［2］。基因芯片技術(shù)能夠研究大量的基因表達(dá)變化［3］，通過該技術(shù)可篩查出大量的差異表達(dá)基因。本文通過對所得數(shù)據(jù)的研究和國內(nèi)外文獻(xiàn)的檢索，選擇激酶插入?yún)^(qū)受體(KDR)、促腎上腺皮質(zhì)激素受體2 (MC2R)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA) 3種表達(dá)差異明顯的基因，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測KDR、MC2R和PCNA在APA和IHA病變組織中表達(dá)情況。

1　資料與方法

1．1病例選擇收集我院2010年12月至2012年6月原發(fā)性醛固酮增多癥患者經(jīng)手術(shù)治療后APA 和IHA病變組織標(biāo)本各40例。病理組織切片HE染色，由2位有經(jīng)驗(yàn)的臨床病理學(xué)專家閱片診斷，將中間組織塊選為實(shí)驗(yàn)材料，組織石蠟包埋。

1．2一般資料APA組男18例，女22例;年齡25～69歲。IHA組男14例，女26例;年齡26～70歲。入組患者均有高血壓、低血鉀等典型臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室檢查符合原發(fā)性醛固酮增多癥的診斷，并進(jìn)一步行甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素、血皮質(zhì)醇、尿皮質(zhì)醇等檢查排除嗜鉻細(xì)胞瘤及皮質(zhì)醇增多癥。其中IHA組中有15例為雙側(cè)病變。入組病例均行腎上腺靜脈檢查，明確優(yōu)勢分泌側(cè)。

1．3方法

1．3．1 KDR、MC2R和PCNA的檢測家兔抗人PCNA單克隆抗體和家兔抗人KDR多克隆抗體購自Abcam公司，家兔抗人MC2R多克隆抗體購自Thermo公司。選用間接免疫組織化學(xué)法(免疫組化)，具體操作步驟按說明書進(jìn)行。

1．3．2對照設(shè)置用已知陽性片作陽性對照，以PBS液替代一抗作空白陰性對照，HE染色作組織學(xué)對照。

1．4結(jié)果判定

1．4．1陽性判定標(biāo)準(zhǔn)KDR和MC2R的陽性標(biāo)準(zhǔn)均為細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜出現(xiàn)淡黃色或棕黃色染色; PCNA以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。

1．4．2陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)方法高倍鏡下每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，隨機(jī)觀察10個(gè)視野(避開大血管和大面積間質(zhì))，按照陽性細(xì)胞所占百分比與著色強(qiáng)度采用雙評分半定量法進(jìn)行評分。(1)陽性細(xì)胞所占百分比評分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞≤25%為0分，＞25%～50%為1分，＞50%～75%為2分，＞75%為3分; (2)著色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn):染色陰性0分，染色弱但強(qiáng)于陰性1分，染色清晰2分，染色強(qiáng)3分。將(1)、(2)項(xiàng)評分相加，0～1分為陰性(－)，2～3分為弱陽性(1 + )，4～5分為陽性(2 + )，6～7分為強(qiáng)陽性(3 + )。

1．5圖像分析使用IMS圖象分析系統(tǒng)［基爾頓生物科技(上海)有限公司產(chǎn)品］。

1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用秩和檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2．1 APA和IHA組織中KDR表達(dá)的免疫組化結(jié)果比較APA組織中KDR表達(dá)陽性率40．0%; IHA組織中KDR表達(dá)陽性率65．0%。2種組織中KDR的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01) (見表1和圖1、2)。

2．2 APA和IHA組織中MC2R表達(dá)的免疫組化結(jié)果比較APA組織中MC2R表達(dá)陽性率32．5%; IHA組織中表達(dá)陽性率62．5%。2種組織中MC2R的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01) (見表2和圖3、4)。

表1　KDR在APA和IHA組織中表達(dá)情況比較(n)

表2　MC2R在APA和IHA組織中表達(dá)情況比較(n)

2．3 APA和IHA組織中PCNA表達(dá)的免疫組化結(jié)果比較APA組織中PCNA表達(dá)陽性率85．0%; IHA組織中PCNA表達(dá)陽性率77．5%。2種組織中PCNA的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(見表3和圖5、6)。

表3　PCNA在APA和IHA組織中表達(dá)情況比較(n)

3　討論

目前認(rèn)為，原發(fā)性醛固酮增多癥是繼發(fā)性高血壓常見的病因之一，是引發(fā)動脈性高血壓的第二大致病因素。原發(fā)性醛固酮增多癥引發(fā)的高血壓與原發(fā)性高血壓比較，對器官的損傷更加嚴(yán)重，更易引發(fā)心血管疾?。?］。因此，早期治療原發(fā)性醛固酮增多癥能夠有效地降低心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率。治療原發(fā)性醛固酮增多癥的關(guān)鍵是去除過多的鹽皮質(zhì)激素及阻斷醛固酮激素對靶器官的損傷，而其中最關(guān)鍵的步驟就是明確原發(fā)性醛固酮增多癥的亞型。原發(fā)性醛固酮增多癥存在多種亞型，包括APA、產(chǎn)醛固酮的腎上腺皮質(zhì)癌、原發(fā)性腎上腺增生、IHA、糖皮質(zhì)激素可治愈的醛固酮增多癥、異位產(chǎn)生醛固酮的腫瘤［2］。其中IHA和APA是最常見的2種亞型，所占比例為95%，因此越來越多的學(xué)者開始研究原發(fā)性醛固酮增多癥的這2種亞型之間的差異。APA在影像學(xué)表現(xiàn)為低密度影，表明腫瘤內(nèi)部血運(yùn)不豐富，這可能和腫瘤內(nèi)部血管的生長有關(guān)。

BIECHE等［5］發(fā)現(xiàn)，KDR分布于部分腫瘤細(xì)胞，對于腫瘤增殖與新血管形成有著重要作用。TAKEKOSHI等［6］發(fā)現(xiàn)KDR在嗜鉻細(xì)胞瘤的發(fā)病中起重要作用。應(yīng)用基因芯片技術(shù)已發(fā)現(xiàn)APA中KDR表達(dá)明顯下調(diào)，而在IHA病變中表達(dá)正常。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KDR在APA組織中大部分為陰性或低表達(dá)，而在IHA病變大部分為高表達(dá)。KDR在APA與IHA組織中表達(dá)的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。KDR可能通過刺激新生血管生成而促進(jìn)細(xì)胞的增殖，參與IHA病變的發(fā)生、發(fā)展。

MC2R能特異性與促腎上腺皮質(zhì)激素(ATCH)結(jié)合，促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的分泌。GORRIGAN等［7］發(fā)現(xiàn)MC2R在腎上腺細(xì)胞生長和分化中起重要作用。應(yīng)用基因芯片技術(shù)已發(fā)現(xiàn)IHA病變中ACTH受體基因表達(dá)上調(diào)，使腎上腺皮質(zhì)受ACTH的作用增強(qiáng)，導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞異常增生。本研究發(fā)現(xiàn)MC2R在APA組織中大部分為陰性或低表達(dá)，而在IHA病變大部分為高表達(dá)。MC2R在APA 與IHA組織中表達(dá)的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。顯示MC2R的增多，使腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞受ACTH的作用增強(qiáng)，促進(jìn)了腎上腺細(xì)胞的生長和分化，腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)異常增生，最終導(dǎo)致IHA病變的發(fā)生與發(fā)展。

IHA很重要的一個(gè)方面是球狀帶細(xì)胞的增殖活性發(fā)生變化，增殖活性是了解異常增生細(xì)胞生物學(xué)行為的一個(gè)有用的輔助手段，PCNA可作為細(xì)胞周期的內(nèi)源性組織標(biāo)志物，是反映細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)［8］。應(yīng)用基因芯片技術(shù)已發(fā)現(xiàn)PCNA在IHA病變中表達(dá)上調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)，PCNA在APA及IHA組織中均有高表達(dá)，但PCNA在APA組織中表達(dá)強(qiáng)度更高。PCNA在APA與IHA組織中表達(dá)的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。表明PCNA在APA組織細(xì)胞增殖活躍，說明PCNA在APA發(fā)揮了重要作用，但具體的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，KDR和MC2R在IHA病變的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，對于鑒別原發(fā)性醛固酮增多癥的2種亞型APA及IHA病變具有重要的參考意義。

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(本文編輯姚仁斌)

·臨床醫(yī)學(xué)·

The expressions and significance of kinase domain receptor，melanocortin-2 receptor and proliferating cell nuclear antigen in aldosterone-producing adenoma and adrenal cortical hyperplasia

ZHAO Chen-hui1，ZHOU Wen-long2，HUANG Tao1，ZHANG Zhi-wei1，WANG Ming-wei1，ZHANG Zhao-hui1，CHU Chen-long1，YANG An-qing1，MA Bin-bin1
(1．Department of Urology，Ruijin Hospital Luwan Branch Affiliated to Shanghai Jiao Tong University of Medicine，Shanghai 200020; 2．Department of Urology，Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University of Medicine，Shanghai 200025，China)

［Abstract］Objective: To explore the expressions and significance of kinase domain receptor(KDR)，melanocortin-2 receptor(MC2R)

and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in aldosterone-producing adenoma(APA) and adrenal cortical hyperplasia(IHA)．

Methods: The expressions of KDR，MC2R and PCNA in 40 cases APA and 40 cases IHA lesions were detected by immunohistochemistry．Results: The positive expression rates of KDR，MC2R and PCNA in APA lesions were 40．0%，32．5% and 85．0%，respectively．The expression rates of KDR，MC2R and PCNA in IHA lesions were 65．0%，62．5% and 77．5%，respectively．The differences of KDR，MC2R and PCNA expressions between APA and IHA were statistically significant(P＜0．05 to P＜0．01)．

Conclusions: The KDR，MC2R and PCNA play an important role in the occurrence and development of IHA，which have important reference meaning in the differentiation of APA and IHA lesions．

［Key words］aldosterone-producing adenoma; adrenal cortical hyperplasia; kinase domain receptor; melanocortin-2 receptor; proliferating cell nuclear antigen

［作者簡介］趙晨暉(1980－)，男，碩士研究生，主治醫(yī)師．

［基金項(xiàng)目］上海市盧灣區(qū)衛(wèi)生局科研課題項(xiàng)目(盧衛(wèi)科1010)

［收稿日期］2014-07-23

［文章編號］1000-2200(2016) 01-0041-03

［中圖法分類號］R 586．24

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

DOI:10．13898/j．cnki．issn．1000-2200．2016．01．011