劉靜，張柳，楊勇，李春燕，郭華雄

(荊州市中心醫(yī)院，湖北荊州434020)

卵巢癌組織CXCL12、MMP-9、integrin β1表達(dá)及意義

劉靜，張柳，楊勇，李春燕，郭華雄

(荊州市中心醫(yī)院，湖北荊州434020)

目的 探討趨化因子CXCL12、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)及整合素β1(integrin β1)在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選取60例份卵巢癌組織、20例份卵巢交界性腫瘤組織及10例份卵巢良性腫瘤組織，采用免疫組化Envision法檢測(cè)CXCL12、MMP-9及integrin β1陽(yáng)性表達(dá)率，分析CXCL12、MMP-9及integrin β1陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系及卵巢癌組織中CXCL12、MMP-9、integrin β1表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 卵巢癌組織中CXCL12、MMP-9及integrin β1陽(yáng)性表達(dá)率均高于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢良性腫瘤組織(P均<0.01)。CXCL12陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腹水有關(guān)(P<0.05或<0.01)，MMP-9及integrin β1表達(dá)均與卵巢癌組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腹水有關(guān)(P<0.05或<0.01)。卵巢癌組織中CXCL12表達(dá)與MMP-9及integrin β1表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.328、0.332，P均為0.001)，MMP-9表達(dá)與integrin β1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.447，P=0.000)。結(jié)論 卵巢癌組織CXCL12、MMP-9及integein β1均高表達(dá)，三者協(xié)同作用，共同促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。

卵巢腫瘤；趨化因子CXCL12；基質(zhì)金屬蛋白酶9；整合素β1

卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一，病死率高，導(dǎo)致患者死亡的主要原因是種植轉(zhuǎn)移。趨化因子CXCL12是由骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的前B淋巴細(xì)胞活化因子，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，被認(rèn)為是炎癥趨化因子。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12與其特異性受體CXCR4結(jié)合構(gòu)成CXCL12/CXCR4生物軸，對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要的調(diào)控作用[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)是一種能降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的重要蛋白水解酶，參與多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。整合素β1(integrin β1)主要與細(xì)胞和間質(zhì)黏附有關(guān)，與細(xì)胞基質(zhì)成分相結(jié)合，激活整合素下游相關(guān)基因，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究檢測(cè)卵巢癌組織CXCL12、MMP-9及integrin β1蛋白表達(dá)，探討其在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 60例卵巢癌患者于2007～2013年于荊州市中心醫(yī)院行手術(shù)治療，患者年齡28～69歲、平均52.4歲，>50歲36例、≤50歲24例。術(shù)前均未行放化療，術(shù)后均留取卵巢癌組織(卵巢癌組)，均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷。組織學(xué)分型：漿液性癌45例，黏液性癌15例；參照女性生殖系統(tǒng)腫瘤WHO(2003年版)標(biāo)準(zhǔn)：高分化(G1)15例，中分化(G2)25例，低分化(G3)20例；根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ 期10例，Ⅱ 期18例，Ⅲ 期27例，Ⅳ 期5例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例；伴腹水且找到癌細(xì)胞32例(腹水陽(yáng)性)，無(wú)腹水或腹水未找到癌細(xì)胞28例(腹水陰性)。另外選取卵巢交界性腫瘤組織20例份(交界性腫瘤組)、卵巢良性腫瘤組織10例份(良性腫瘤組)作為對(duì)照。三組患者年齡具有可比性。

1.2 CXCL12、MMP-9及integrin β1表達(dá)檢測(cè) 三組標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，行4 μm連續(xù)切片，采用Envision法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。具體操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)呈黃色或棕黃色為CXCL12、MMP-9及integrin β1陽(yáng)性表達(dá)。采用半定量-積分法對(duì)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)分[2]。染色強(qiáng)度：陰性記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞記0分，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%記1分，11%～50%記2分，51%～75%記3分，>75%記4分；染色強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分乘積≥3判定為陽(yáng)性。分析CXCL12、MMP-9及integrin β1表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系及CXCL12、MMP-9、integrin β1表達(dá)之間的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組CXCL12、MMP-9及integrin β1表達(dá) 見(jiàn)表1。

表1 三組CXCL12、MMP-9及integrin β1表達(dá)比較

注：與良性腫瘤組比較，*P<0.01；與交界性腫瘤組比較，△P<0.01。

2.2 卵巢癌組織中CXCL12、MMP-9及integrin β1陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表2。

表2 卵巢癌組織中CXCL12、MMP-9及integrin β1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 卵巢癌組織CXCL12、MMP-9、integrin β1表達(dá)之間的關(guān)系 卵巢癌組織中CXCL12表達(dá)與MMP-9及integrin β1表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.328、0.332，P均為0.001)，MMP-9表達(dá)與integrin β1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.447，P=0.000)。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)主動(dòng)的、有規(guī)律的過(guò)程，趨化因子在其中發(fā)揮重要作用[3]。趨化因子CXCL12是由68個(gè)氨基酸組成，屬于CXC趨化因子家族成員。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12除趨化作用外還可通過(guò)與其特異性受體結(jié)合形成生物軸，激活G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。CXCR4特異性抑制劑AMD3100可阻斷CXCL12誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路[5]。Zhao等[6]研究顯示，CXCL12在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中表現(xiàn)為雙向調(diào)節(jié)作用，一方面通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移；另一方面通過(guò)趨化、活化免疫細(xì)胞捕獲遷移中的腫瘤細(xì)胞或直接通過(guò)抑制血管增殖，發(fā)揮抗腫瘤作用。對(duì)胰腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12抑制胰腺導(dǎo)管癌的發(fā)生及發(fā)展[7]。本研究結(jié)果顯示，CXCL12高表達(dá)促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，與Ghanem等[8]對(duì)肝癌的研究結(jié)果一致；其機(jī)制可能為CXCL12與其特異性受體CXCR4結(jié)合，激活G蛋白，使PI3K磷酸化，激活局部黏著酶(FAK)，啟動(dòng)一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路[9]。整合素(integrins)是一類位于細(xì)胞表面的黏附分子，可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)間的反應(yīng)，參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、黏附及遷移，并調(diào)控細(xì)胞分化及增殖等多個(gè)生理過(guò)程[10]。本研究結(jié)果顯示，integrin β1高表達(dá)參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，激活、調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的黏附與遷移可能是其作用機(jī)制[11]。MMP-9在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，通過(guò)降解基底膜中的Ⅳ型膠原和凝膠，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移[12]。本研究中卵巢癌組織MMP-9高表達(dá)促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，其機(jī)制可能為卵巢癌中MMP-9過(guò)表達(dá)破壞基底膜，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

本研究卵巢癌組織中CXCL12、integrin β1、MMP-9表達(dá)均呈正相關(guān)，提示三者之間具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。CXCL12與其受體CXCR4結(jié)合后可激活細(xì)胞表面integrin β1，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)與遷移，促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移[13，14]。Laird等[15]研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12可通過(guò)CXCR4/ERK/NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)MMP-9表達(dá)，或直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分泌MMP-9，從而破壞腫瘤血管壁的基底膜，進(jìn)而重塑血管、誘導(dǎo)新生血管生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移[15,16]。

綜上所述，卵巢癌組織中CXCL12、MMP-9及integein β1表達(dá)均增加，三者之間協(xié)同作用，共同參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。

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荊州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2009-13-15)。

郭華雄(E-mail: ghx8361@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.017

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B

1002-266X(2016)28-0050-03

2015-11-05)