陳應超，李澤文，周潔，肖蘭，劉漢忠

(孝感市中心醫(yī)院，湖北孝感 432100)

鼻咽癌組織MTDH、MMP-9表達及意義

陳應超，李澤文，周潔，肖蘭，劉漢忠

(孝感市中心醫(yī)院，湖北孝感 432100)

目的 觀察鼻咽癌組織異黏蛋白(MTDH)及基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達變化，探討其意義。方法 采用免疫組化法檢測60例份鼻咽癌組織(觀察組)、26例份慢性鼻咽炎組織(對照組)中MTDH及MMP-9蛋白表達，并分析MTDH及MMP-9與鼻咽癌患者臨床病理參數(shù)的關系，及二者表達的相關性。結果 觀察組與對照組MTDH陽性表達率分別為53.3%(32/60)、11.5%(3/26)，二者比較P<0.01；MMP-9陽性表達率分別為71.7%(43/60)、34.6%(9/26)，二者比較P<0.01。MTDH陽性表達與鼻咽癌淋巴結轉移及臨床分期有關(P均<0.05)，MMP-9陽性表達與鼻咽癌淋巴結轉移有關(P<0.05)。鼻咽癌組織MTDH表達與MMP-9表達呈正相關(r=0.376，P<0.01)。結論 鼻咽癌組織中MTDH、MMP-9表達均升高，MTDH及MMP-9高表達可能在鼻咽癌的發(fā)生及轉移過程中發(fā)揮重要作用。

鼻咽癌；異黏蛋白；基質金屬蛋白酶9

鼻咽癌是我國發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，且具有高轉移性的特征。異黏蛋白(MTDH)又稱AEG-1、LYRIC、3D3，是近年來發(fā)現(xiàn)的一個癌基因，在多種人類腫瘤組織中高表達，被認為與腫瘤的侵襲、轉移及預后不良有關[1]。基質金屬蛋白酶9(MMP-9)是一種重要的蛋白水解酶，通過降解細胞外基質(ECM)及基底膜的重要成分參與腫瘤的侵襲和轉移過程[2]。MTDH可通過調控MMP-9，在ECM降解、細胞侵襲及轉移過程中發(fā)揮重要作用[3,4]。目前在鼻咽癌組織中MTDH、MMP-9的相關研究鮮見報道。本研究觀察鼻咽癌組織中MTDH、MMP-9的表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010～2013年孝感市中心醫(yī)院收治的鼻咽癌患者60例，男37例、女23例，年齡27～74(57.0±16.7)歲。均經(jīng)病理學檢查證實，術前均未行放、化療。根據(jù)2002年美國聯(lián)合委員會(AJCC)標準進行分期：T1、T2期26例，T3、T4期34例；無淋巴結轉移24例，有淋巴結轉移36例；臨床分期Ⅰ期+Ⅱ期27例、Ⅲ期+Ⅳ期33例；60例活檢標本均為低分化鱗狀細胞癌。手術留取鼻咽癌組織60例份為觀察組，另取同期慢性鼻咽炎組織26例份為對照組。對照組男15例、女11例，年齡22～72 (57.0±16.2)歲。兩組性別比、年齡具有可比性。

1.2 MTDH、MMP-9表達檢測 采用免疫組化SP法。MTDH兔抗人多克隆抗體(ZA-0346)、MMP-9兔抗人多克隆抗體(ZA-0336)、免疫組化試劑盒(SP-9000)、DAB顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。常規(guī)脫蠟、水化，4 μm連續(xù)切片；抗原修復：采用枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)高壓下修復10 min，室溫下3% H2O2封閉10 min；滴加MTDH抗體(1∶100)及MMP-9抗體(即用型) 4 ℃孵育過夜，滴加二抗，DAB顯色、蘇木精復染后脫水封片。染色結果判斷：MTDH及MMP-9均以細胞質染色為主，以細胞質染成棕黃色或棕褐色為陽性。采用雙盲法，結合陽性細胞率及顯色程度進行半定量處理。陽性細胞率評分：陽性細胞率≤10%、>10%～50%、>50%～80%、>80%分別記0、1、2、3分。顯色程度評分：無顯色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。以上兩項評分之積<3分為陰性，≥3分為陽性[5]。分析鼻咽癌組織MTDH、MMP-9陰性表達與患者臨床病理參數(shù)的關系，及二者表達的相關性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組與對照組MTDH陽性表達率分別為53.3%(32/60)、11.5%(3/26)，兩組比較P<0.01；MMP-9陽性表達率分別為71.7%(43/60)、34.6%(9/26)，兩組比較P<0.01。MTDH陽性表達與鼻咽癌患者淋巴結轉移及臨床分期有關(P均<0.05)，MMP-9陽性表達與鼻咽癌淋巴結轉移有關(P<0.05)。鼻咽癌組織MTDH及MMP-9表達與患者臨床病理參數(shù)的關系見表1。

相關性分析顯示， 鼻咽癌組織MTDH表達與MMP-9表達呈正相關(r=0.376，P<0.01)。

表1 鼻咽癌組織MTDH及MMP-9表達與患者臨床病理參數(shù)的關系

3 討論

MTDH基因定位于8q22染色體，包含12個外顯子和11個內含子，總長度85 482 bp；通過PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin等信號通路促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，包括啟動腫瘤細胞的增殖與凋亡、增強腫瘤細胞的侵襲與轉移、提高腫瘤細胞對化療藥物及放射線的耐受性等[1]。MTDH在正常組織中不表達或低表達，但在多種腫瘤如結腸腺癌[5]、食管鱗癌[6]、舌鱗癌[7]、胰腺癌[8]等組織中過表達。本研究觀察組MTDH陽性表達率顯著高于對照組，提示MTDH過表達與鼻咽癌的發(fā)生有關。MTDH的致癌活性與其對細胞增殖、凋亡的異常調節(jié)有關。研究發(fā)現(xiàn)，MTDH通過AKT/FOX03a信號通路影響細胞周期，上調CyclinD表達、下調p27表達，加速細胞的惡性增殖[6]；MTDH通過PI3K/Akt信號通路，下調促凋亡蛋白BAD與p21表達、上調MDM2表達，導致抑癌基因p53失活，抑制細胞凋亡[9]。本研究顯示，MTDH過表達與鼻咽癌淋巴結轉移及臨床分期有關，提示MTDH可作為評估鼻咽癌惡性程度及轉移的分子指標之一。在食管鱗癌[6]、舌鱗癌[7]中亦發(fā)現(xiàn)，MTDH高表達與腫瘤的分化程度、TNM分期相關，是患者預后的獨立影響因素。MTDH促進腫瘤惡性發(fā)展及轉移的可能機制包括：①下調E-cadherin表達，促進上皮-間質轉化(EMT)，進而促進轉移[8,10,11]；②誘導MMPs表達，加速ECM降解[3～5]；③促進新生血管形成[8,12]。

ECM及基底膜是阻礙腫瘤細胞侵襲和轉移的主要屏障。MMP-9是降解基底膜及ECM的重要水解酶之一，通過降解其主要成分(如Ⅳ、Ⅴ型膠原和明膠等)參與腫瘤的侵襲和轉移[2]。本研究觀察組MMP-9陽性表達率顯著高于對照組，且MMP-9陽性表達與淋巴結轉移有關，證實了MMP-9在鼻咽癌發(fā)生及轉移中的作用，與其他研究結果相似[13,14]。研究表明，過表達的MTDH可作用于MMP-9的啟動子并激活MMP-9表達，抑制內源性MMP-9表達，顯著降低MTDH對腫瘤細胞所產(chǎn)生的侵襲性影響[3]。在MTDH基因沉默的子宮頸癌細胞中，其瘤細胞的侵襲能力明顯降低；下調MTDH表達后，MMP-9表達亦減少[4]。張偉等[5]應用免疫組化法檢測了結腸腺癌中MTDH和MMP-9蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)兩者的表達呈正相關，認為兩者可能協(xié)同促進結腸腺癌的發(fā)展。本研究鼻咽癌組織中MTDH與MMP-9的表達呈正相關，推測鼻咽癌組織MTDH過表達可能通過上調MMP-9表達為癌細胞向ECM侵襲提供前提條件。

總之，鼻咽癌組織中MTDH及MMP-9表達增加，二者高表達可能在鼻咽癌的發(fā)生及轉移中發(fā)揮重要作用，但其具體調控機制有待進一步的研究。

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孝感市中心醫(yī)院院內基金資助項目(201211)。

周潔(E-mail: cycpcy2001@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.022

R739.6

B

1002-266X(2016)28-0063-03

2015-11-27)