劉子雯，申衛(wèi)紅

(無(wú)錫市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇無(wú)錫 214041)

·臨床研究·

Th17細(xì)胞在過(guò)敏性哮喘患者中的臨床研究

劉子雯，申衛(wèi)紅

(無(wú)錫市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇無(wú)錫 214041)

目的 探討Th17細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17(IL-17)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)在過(guò)敏性哮喘患者外周血中的變化及臨床意義。方法 選取過(guò)敏性哮喘患者和健康體檢者各60例，選用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞的百分率；ELISA法檢測(cè)外周血培養(yǎng)上清液中IL-17和IL-10的表達(dá)；電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中IgE的含量。結(jié)果 哮喘組外周血Th17細(xì)胞比例、血清中IgE的含量及IL-17水平均高于健康對(duì)照組；而IL-10水平則低于健康對(duì)照組。結(jié)論 Th17細(xì)胞表達(dá)失衡可能在過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。

Th17； 過(guò)敏性哮喘； 白細(xì)胞介素-17； 白細(xì)胞介素-10

過(guò)敏性哮喘是由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥，在易感者中此種炎癥可引起反復(fù)發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和(或)咳嗽等癥狀，多在夜間和(或)凌晨發(fā)生，氣道對(duì)多種刺激因子反應(yīng)性增高,其發(fā)病率在呼吸科患者中呈上升趨勢(shì)。中國(guó)哮喘的患病率約為1%，兒童可達(dá)3%，據(jù)測(cè)算全國(guó)約有1千萬(wàn)以上哮喘患者。研究表明，Th17 細(xì)胞主要分泌細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17(IL-17)，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)輔助性CD4+T細(xì)胞，在自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病中發(fā)揮重要作用[1-3]。國(guó)外的許多研究表明，改變外周血中IL-17、白細(xì)胞介素-10(IL-10)的表達(dá)可以影響過(guò)敏性哮喘患者的炎癥反應(yīng)程度，從而參與哮喘的發(fā)生[4-5]。本研究主要通過(guò)檢測(cè)過(guò)敏性哮喘患者外周血中Th17細(xì)胞比率及細(xì)胞因子IL-17、IL-10的表達(dá)水平，從而探討其在過(guò)敏性哮喘患者發(fā)病機(jī)制中的意義及其嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年在無(wú)錫市第三人民醫(yī)院呼吸科住院治療的過(guò)敏性哮喘患者60例，其中男38例，女22例，平均(40.6±13.2)歲。本院健康體檢者60例作為對(duì)照組，男35例，女25例，平均(29.4±9.7)歲,均為無(wú)過(guò)敏性疾病和呼吸道感染,近一個(gè)月內(nèi)未使用其他藥物等。

1.2 方法

1.2.1 外周血Th17淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè) 分別抽取哮喘組和對(duì)照組靜脈血各2 mL，分別加PE標(biāo)記的抗人IL-17抗體各10 μL，室溫避光孵育30 min。然后再加入紅細(xì)胞裂解液，振蕩混勻。離心后棄上清液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后混勻，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)，獲得Th17細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。

1.2.2 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 以聚蔗糖-泛影葡胺液分離過(guò)敏性哮喘患者和對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，PBS洗滌后以每孔(3～5)×105個(gè)細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板，以含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72 h后收集培養(yǎng)上清液，待檢。

1.2.3 外周血細(xì)胞因子水平檢測(cè) 細(xì)胞因子IL-17、IL-10的檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 血清IgE含量檢測(cè) 所有實(shí)驗(yàn)者清晨空腹抽取靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10 min，分離出血漿待檢。血清IgE定量測(cè)定采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法進(jìn)行檢驗(yàn)，操作嚴(yán)格按照儀器設(shè)定的程序進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié) 果

2.1 外周血Th17淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè) 通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)60例哮喘患者和健康者外周血中Th17淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量，結(jié)果表明：哮喘患者外周血中Th17細(xì)胞約占CD4+T細(xì)胞(5.04±1.02)%，明顯高于健康對(duì)照組(1.90±0.57)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 過(guò)敏性哮喘患者外周血中Th17細(xì)胞亞群的檢測(cè)

2.2 細(xì)胞因子IL-17、IL-10的表達(dá) 通過(guò)ELISA法分別檢測(cè)哮喘組和對(duì)照組外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-10的含量，結(jié)果表明：IL-17的含量哮喘組明顯高于健康對(duì)照組，而IL-10的含量明顯低于健康對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 血清IgE含量的檢測(cè) 通過(guò)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)哮喘組和對(duì)照組血清IgE的含量，結(jié)果表明：哮喘組患者空腹IgE的含量的含量(289.88±80.32)ng/mL，明顯高于健康對(duì)照組(49.44±8.21)ng/mL，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 哮喘組外周血IL-17、IL-10表達(dá)量的比較(pg/mL)

表3 哮喘組空腹IgE含量的檢測(cè)

3 討 論

過(guò)敏性哮喘是由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥，在易感者中此種炎癥可引起反復(fù)發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和(或)咳嗽等癥狀，氣道對(duì)多種刺激因子反應(yīng)性增高。Th17細(xì)胞主要分泌IL-17，在過(guò)敏性哮喘中發(fā)揮重要作用[6-7]。國(guó)外有研究顯示，通過(guò)給過(guò)敏性哮喘小鼠輸入活化的Th17細(xì)胞，能夠促進(jìn)氣道中性粒細(xì)胞性炎癥。另有許多研究發(fā)現(xiàn)，在中重度過(guò)敏性哮喘患者外周血中Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17的表達(dá)均增加[8-9]。因而，Th17細(xì)胞在哮喘的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，而其效應(yīng)的發(fā)揮主要通過(guò)特征性細(xì)胞因子IL-17來(lái)完成。本研究結(jié)果也顯示，在過(guò)敏性哮喘患者組中，細(xì)胞因子IL-17的表達(dá)也增加，這與國(guó)外的研究結(jié)果相一致。最近調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞成為免疫抑制治療的研究重點(diǎn)，其主要通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-10來(lái)抑制免疫應(yīng)答，從而發(fā)揮免疫耐受的作用。有研究顯示，在IL-10表達(dá)減少的小鼠中對(duì)于過(guò)敏原誘導(dǎo)的哮喘炎癥反應(yīng)相應(yīng)地增加。因此，IL-10表達(dá)減少可加重哮喘的發(fā)作，提示其在過(guò)敏性哮喘中起重要作用[10-12]。

近年來(lái)調(diào)控免疫反應(yīng)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞成為免疫抑制治療的研究焦點(diǎn)。Treg特征性地表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子FOXP3，可通過(guò)細(xì)胞間直接接觸或分泌細(xì)胞因子IL-10等方式來(lái)抑制免疫應(yīng)答，從而使機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受。有研究顯示，兒童過(guò)敏性哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞明顯減少，表明Th17/FOXP3表達(dá)失衡可能在兒童過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。

本研究結(jié)果表明，過(guò)敏性哮喘組IL-17的表達(dá)以及血清中IgE的含量均高于健康對(duì)照組；而IL-10水平則低于健康對(duì)照組，提示Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞共同參與過(guò)敏性哮喘的發(fā)病。在本研究中，過(guò)敏性哮喘組存在IL-17的表達(dá)增加而IL-10表達(dá)水平卻減少的情況，提示其細(xì)胞水平Th17/CD4+CD25+Treg表達(dá)失衡可能在過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。因此，本研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞以及IL-17、IL-10等細(xì)胞因子共同在過(guò)敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。臨床上如能動(dòng)態(tài)掌握其變化將有助于臨床早期診斷和及時(shí)治療。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.057 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-4130(2016)07-0995-03

2015-10-28)