毛曉雪

(自貢市第四人民醫(yī)院檢驗科，四川自貢 643000)

·臨床研究·

自貢地區(qū)婦科就診患者HPV檢測及結(jié)果分析

毛曉雪

(自貢市第四人民醫(yī)院檢驗科，四川自貢 643000)

目的 探討自貢地區(qū)婦科就診者HPV檢測的結(jié)果。方法 采用HPV-PCR擴(kuò)增技術(shù)對2 286例婦科就診可疑HPV感染者進(jìn)行HPV 分型檢測。結(jié)果 2 286例樣本中，檢出HPV 陽性者589例，總陽性率為25.77%，其中2011、2012、2013、2014年陽性率分別為20.80%、27.10%、28.50%及27.1%。4年中HPV陽性者總共檢出HPV感染亞型734例，高危型HPV總共588例(占80.11%)，檢出低危型146例(占19.89%)。所有HPV陽性患者亞型感染率前3種分別為HPV-31、HPV-52、HPV-16。結(jié)論 自貢地區(qū)婦科就診者HPV感染率與我國其他地區(qū)報道的大致相同，但是感染亞型有區(qū)域性。根據(jù)2012年ASCP指南提到不同HPV感染類型其治療方法不同，本調(diào)查對本地區(qū)臨床上選擇治療方法上有提示作用。

HPV分型； 宮頸癌； 結(jié)果分析

宮頸癌是全世界婦女最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在全球婦女腫瘤中位列第二。大量的流行病學(xué)研究和分子生物學(xué)研究已經(jīng)證明HPV 感染是宮頸鱗癌和上皮內(nèi)瘤變發(fā)生的必要因素，沒有持續(xù)的HPV感染，女性發(fā)生宮頸鱗癌的可能性幾乎為零[1]。據(jù)報道，目前已完全鑒別到的HPV亞型有超過200種，型與型之間的差異在于基因結(jié)構(gòu)的不同，有54種可感染生殖道黏膜，約20余種與腫瘤有關(guān)[2-3]。高危性HPV除引起外生性疣類病變外，主要引起外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸癌[4]。低危性HPV主要引起肛門皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道下段的外生性疣類病變和低度子宮頸上皮肉瘤，其自然緩解率高，僅有少數(shù)概率可以進(jìn)展為宮頸癌[5]。本文中調(diào)查自貢地區(qū)2011～2014年4年中2 286例婦科就診可疑HPV感染者的宮頸拭子，進(jìn)行以PCR為基礎(chǔ)的液態(tài)芯片技術(shù)檢測并進(jìn)行分型，旨在分析自貢地區(qū)的婦科就診患者可疑HPV感染者其HPV-DNA陽性率及結(jié)果分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011～2014年在自貢第四人民醫(yī)院及自貢市婦幼保健院可疑HPV感染就診者，共計2 286例，年齡16～70歲，平均(38.3±2.4)歲。入選條件排除：妊娠、無異常陰道流血、無白帶異常等臨床癥狀者。

1．2 儀器與試劑 TEGEN TC-96/T/H(a) PCR擴(kuò)增儀；丹瑞HHW-420高速離心機(jī)；時代北利GT16-3恒溫水箱；博日HB-H100恒溫金屬?。籜H-B型漩渦混勻器；Ⅱ級生物安全柜；透景DNA 提取試劑和HPV 擴(kuò)增試劑,采用液芯微球技術(shù)，同時檢測26種人乳頭病毒(HPV)亞型(包括19種高危型HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-55、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-53、HPV-68、HPV-82、HPV-83及7種低危型HPV-6、HPV-11、HPV-40、HPV-42、HPV-44、HPV-61、HPV-73)。

1．3 研究方法

1．3．1 標(biāo)本采集 臨床醫(yī)生將采樣刷插入宮頸，輕輕搓動采樣刷使其沿順時針方向轉(zhuǎn)動5圈，取出采樣刷后立即置于專用的細(xì)胞保存液中，輕輕搖動液體洗滌采樣刷以獲得更多的宮頸脫落細(xì)胞。4 ℃冰箱保存待用。

1．3．2 DNA的提取 取潔凈的1.5 mL離心管，編號，對應(yīng)的加入200 μL宮頸脫落細(xì)胞懸液，14 000 r/min離心3 min；吸棄上清液，每管中加入200 μL的提取緩沖液，震蕩均勻，放入100 ℃金屬浴中保溫15 min；將EP管取出14 000 r/min離心5 min；將EP管從離心機(jī)中取出，取5 μL上清液進(jìn)行擴(kuò)增。

1．3．3 HPV-DNA的擴(kuò)增 按比例將PCR預(yù)反應(yīng)液10 μL、引物5 μL及酶0.8 μL配制反應(yīng)液，加入5 μL抽提的上清液上機(jī)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序：95 ℃孵育5 min；95 ℃孵育30 s；58 ℃孵育30 s；68 ℃孵育30 s，循環(huán)5次；95 ℃孵育30 s，55 ℃孵育30 s，68 ℃孵育30 s，循環(huán)35次；68 ℃孵育10 min。

1．3．4 雜交 檢測孔中加入22 μL微球雜交液、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物3 μL，混勻；PCR儀中98 ℃變性5 min，48 ℃ 30 min使探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合；再加入75 μL鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅蛋白(SP)，48 ℃孵育15 min；最后放入Luminexu200多功能流式點(diǎn)陣儀進(jìn)行檢測。并判讀結(jié)果，共檢測26種HPV亞型，具體包括高危型HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-55、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-53、HPV-68、HPV-82、HPV-83；低危型HPV-6、HPV-11、HPV-40、HPV-42、HPV-44、HPV-61、HPV-73。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計分析，分析方法包括一般頻數(shù)分布。

2 結(jié) 果

2．1 HPV檢測結(jié)果在被檢查的2 286例女性中，HPV陽性共計589例，總陽性率為25.00%，單一感染471例(20.06%)，混合感染118例(5.16%)。其中所有感染陽性標(biāo)本(589例)中，總共檢出感染亞型有734例，其中高危型感染588例(78.71%)，低危型感染95例(21.29%)。

2.3 HPV亞型分布各亞型分布由表2可見，4年中2 286例女性HPV感染的各亞型分布中其感染頻度前6位依次為HPV31型(20.00%)、HPV52型(12.00%)、HPV16 型(12.00%)、HPV6型(8.00%)、HPV11型(11%)、HPV58 型(7.00%)。

2.2 HPV檢測結(jié)果中2014年、2013年、2012年、2011年陽性率分別為27.10%、20.80%、27.10%和28.50%。其中4年中2 286例女性中，單一感染及混合感染具體見表1。

表1 自貢地區(qū)2011～2014年HPV單一感染

表2 自貢地區(qū)2011～2014年HPV感染者

3 討 論

女性感染HPV受地區(qū)、年齡、相關(guān)疾病、個人衛(wèi)生等影響[6]，其感染類型各個區(qū)域內(nèi)明顯不同，HPV不同亞型的致病性及疾病預(yù)后均有差異[7-8]。通過參考國內(nèi)外其他文獻(xiàn)，自貢地區(qū)感染率(總陽性率25.77%)與國內(nèi)其他地區(qū)報道相似，由于HPV相對便捷且優(yōu)于傳統(tǒng)宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查方法[9]，故大量開展HPV監(jiān)測，以便及時發(fā)現(xiàn)早期病變。全球25個國家的宮頸癌患者中以HPV-16占比為57.4%，HPV-18次之[10]，其中亞洲國家以HPV-52和HPV-58型更常見[8]。北京感染頻率則依次為HPV-16、HPV-18、HPV-68、HPV-58和HPV-33型，上海以HPV-52、HPV-58為主，重慶感染頻率依次是HPV-16、HPV-52、HPV-31[11-14]。自貢地區(qū)，感染亞型前三為HPV-31、HPV-52、HPV-16，呈現(xiàn)明顯的地域特點(diǎn)。據(jù)2012年ASCP指南，本文通過調(diào)查2011年至2014年本院婦科就診患者HPV的感染率及感染亞型情況，可以指導(dǎo)本地區(qū)沒有開展HPV分型單位的臨床醫(yī)師經(jīng)驗用藥，也能根據(jù)HPV感染亞型概率對患者進(jìn)行隨訪觀察以盡早發(fā)現(xiàn)癌前病變，同時也可以作為自貢地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查為今后本地區(qū)進(jìn)一步引進(jìn)疫苗提供依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.054 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0990-03

2015-12-03)