杜 娟，張勇萍#，楊世明△，安 寧，李 丹，楊 琳，陳 揚(yáng)，穆士杰▲

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院輸血科，陜西西安 710038；2.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院輸血科，陜西西安 710032)

·臨床研究·

265例血型不規(guī)則抗體特異性及其臨床分布情況的分析*

杜 娟1，張勇萍1#，楊世明1△，安 寧2，李 丹1，楊 琳1，陳 揚(yáng)1，穆士杰1▲

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院輸血科，陜西西安 710038；2.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院輸血科，陜西西安 710032)

目的 探討血型不規(guī)則抗體特異性和陽性率及其在臨床科室的分布情況。方法 采用微柱凝膠法對孕婦產(chǎn)前檢查或擬輸血治療的患者進(jìn)行血型不規(guī)則抗體篩查，對篩查陽性的血標(biāo)本再用相同方法進(jìn)行抗體特異性鑒定，統(tǒng)計分析血型不規(guī)則抗體的特異性和陽性率及其在臨床科室的分布情況。結(jié)果 265例血型不規(guī)則抗體陽性者中，男95例(35.8%)，女170例(64.2%)。非特異性自身抗體32例(12.1%)，特異性同種抗體233例(87.9%)，其中Rh血型系統(tǒng)抗體201例(75.8%)，MNS血型系統(tǒng)14例(5.3%)，P血型系統(tǒng)1例(0.4%)，Lewis血型系統(tǒng)11例(4.2%)，Kidd血型系統(tǒng)3例(1.1%)，Duffy血型系統(tǒng)3例(1.1%)。免疫球蛋白類型：IgG型204例(77.0%)，IgM型58例(21.9%)，IgG+IgM型3例(1.1%)，抗體效價在4～512之間。37℃反應(yīng)性：+/-～++++。血型不規(guī)則抗體在臨床科室中的分布：婦產(chǎn)科、血液科及感染科的血型不規(guī)則抗體陽性率居前三位，分別為15.5%(41/265)、12.8%(34/265)及11.3%(30/265)。結(jié)論 對孕婦或擬輸血者進(jìn)行血型不規(guī)則抗體篩查和特異性鑒定，對防治新生兒溶血病，保障患者手術(shù)和治療及時用血及輸血安全有重要意義。

紅細(xì)胞血型； 不規(guī)則抗體； 特異性鑒定； 臨床科室； 分布情況

血型不規(guī)則抗體是指ABO血型系統(tǒng)以外的所有紅細(xì)胞血型抗體，血型不規(guī)則抗體多為免疫產(chǎn)生的IgG型抗體，可導(dǎo)致母嬰血型不合新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)、ABO血型正反定型不符及交叉配血不合[1]。鑒于血型不規(guī)則抗體導(dǎo)致的上述不良反應(yīng)及危險性，在產(chǎn)前或輸血前對孕婦或患者進(jìn)行血型不規(guī)則抗體檢測，提前預(yù)防或選擇不含相應(yīng)抗原的血液進(jìn)行輸注，是防治新生兒溶血病和降低輸血不良反應(yīng)發(fā)生率，確保輸血安全有效的重要措施[2-3]?，F(xiàn)將265例血型不規(guī)則抗體的特異性和陽性率及其在臨床科室的分布情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年6月30日至2015年6月30日在唐都醫(yī)院住院擇期手術(shù)和擬輸血治療以及在婦產(chǎn)科生殖中心就診，血型不規(guī)則抗體篩查為陽性的血標(biāo)本265例，其中男95例(35.8%)，女170例(64.2%)，年齡24 h至80歲。經(jīng)唐都醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)、患者家屬知情同意。

1.2 試劑與儀器 抗A、抗B、抗D、抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N及抗P1定型血清，抗體篩查細(xì)胞及鑒定譜細(xì)胞、抗IgG、抗C3d及多特異性抗人球蛋白試劑均由上海生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供，抗S、抗Lea、抗Leb、抗Jka、抗Jkb定型試劑為英國BIOSCOT公司產(chǎn)品，聚凝胺試劑盒由貝索公司提供；微柱凝膠血型及配血試劑卡由瑞士達(dá)亞美公司提供。

1.3 檢測方法

1.3.1 血型不規(guī)則抗體篩查 向標(biāo)記的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號微柱凝膠卡中加被檢血清50 μL，再加1%的相應(yīng)抗體篩查紅細(xì)胞25 μL，置37 ℃孵育15 min，取出置專用離心機(jī)離心10 min，觀察結(jié)果，紅細(xì)胞全部沉于微柱凝膠卡底部者為陰性，聚集在微柱凝膠卡上部或中段者為陽性。

1.3.2 血型不規(guī)則抗體特異性鑒定 對抗體篩查陽性的血標(biāo)本再用微柱凝膠法進(jìn)行抗體特異性鑒定，取微柱凝膠卡標(biāo)記1～10號，在各微柱管中加入與標(biāo)記號相對應(yīng)的抗體鑒定譜細(xì)胞20 μL，再于各管中加入被檢血清40 μL，于37 ℃孵育15 min，置專用離心機(jī)1 030 r/min離心10 min，觀察結(jié)果；被檢血清與10個譜細(xì)胞中任何一個凝集，與自身對照不凝集判者為有特異性抗體，與所有譜細(xì)胞和自身對照均凝集者，判為有自身抗體或未檢出特異性抗體，與譜細(xì)胞均不凝集者判為未檢出特異性抗體，同時檢測其紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原是否為陰性。

1.3.3 血型不規(guī)則抗體效價及37 ℃反應(yīng)性的檢測 對檢出特異性抗體的血標(biāo)本進(jìn)行倍比稀釋后，用試管法進(jìn)行抗體效價測定。血型不規(guī)則抗體37 ℃反應(yīng)性的檢測：采用試管鹽水法及間接抗人球蛋白試驗(yàn)兩種方法，分別將被檢血清與含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞在37 ℃進(jìn)行反應(yīng)，只要其中任何一種方法在37 ℃出現(xiàn)凝集者，即判為有臨床意義的血型不規(guī)則抗體。

2 結(jié) 果

2.1 血型不規(guī)則抗體的特異性和Ig類型及37 ℃反應(yīng)性 在265例血型不規(guī)則抗體陽性中，男95例(35.8%)，女170例(64.2%)。非特異性自身抗體32例(12.1%)，特異性同種抗體233例(87.9%)，其中Rh血型系統(tǒng)抗體201例(75.8%)，MNS血型系統(tǒng)14例(5.3%)，P血型系統(tǒng)1例(0.4%)，Lewis血型系統(tǒng)11例(4.2%)，Kidd血型系統(tǒng)3例(1.1%)；Duffy血型系統(tǒng)3例(1.1%)。免疫球蛋白類型：IgG型204例(77.0%)，IgM型58例(21.9%)，IgG+IgM型3例(1.1%)，抗體效價在4～512之間；37 ℃反應(yīng)性：+/-～++++(表1)。

表1 265例血型不規(guī)則抗體特異性鑒定結(jié)果

“/”：無資料；“+/-～++++”：凝集強(qiáng)度；“-”：陰性。

2.2 血型不規(guī)則抗體陽性在臨床科室的分布 在265例血型不規(guī)則抗體中，婦產(chǎn)科41例(15.5%)，血液科34例(12.8%)，傳染科30例(11.3%)，腦外科29例(10.9%)，普外21例(7.9%)，骨科18例(6.8%)，胸外科17例(6.4%)，消化科14例(5.3%)，腫瘤科11例(4.2%)，泌尿科7例(2.6%)，新生兒科5例(1.9%)，其他科室38例(14.3%)。婦產(chǎn)科、血液科及感染科的血型不規(guī)則抗體陽性居前三位。

2.3 血型不規(guī)則抗體陽性與輸血及妊娠的關(guān)系 在265例血型不規(guī)則抗體陽性中，多次輸血或妊娠大于或等于2次者163例(61.5%)，孕產(chǎn)婦及新生兒溶血病患者67 例(25.3%)，初次輸血或原因不明者35例(13.2%)。

3 討 論

輸血是臨床治療疾病和搶救危重患者生命及時有效的重要手段，但因血液制品含有抗原及抗體成分的特殊性，在輸血過程中有可能出現(xiàn)不同程度的輸血不良反應(yīng)[4]。近年來，隨著單克隆抗體血型檢測試劑敏感度的不斷提高，由ABO血型定型錯誤而引起的輸血不良反應(yīng)已極少見，但由ABO以外的血型不規(guī)則抗體引起的輸血不良反應(yīng)仍時有發(fā)生[5]。血型不規(guī)則抗體在人群中的檢出率約為0.3%～2%[6]，可由母嬰血型不合的妊娠、異型輸血、注射血液制品以及其他難以察覺的免疫刺激而導(dǎo)致血型不規(guī)則抗體的產(chǎn)生[7]。由于血型不規(guī)則抗體可引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病、ABO血型正反定型不符及交叉配血不合[8-11]，因此在產(chǎn)前及輸血前對孕婦和受血者進(jìn)行血型不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定，提前采取干預(yù)措施和選擇不含相應(yīng)抗原的血液進(jìn)行輸注，對預(yù)防新生兒溶血病、確保臨床輸血安全尤為重要。

本研究265例血型不規(guī)則抗體中，檢出非特異性自身抗體32例(12.1%)，主要為血液系統(tǒng)疾病患者，由于患者存在自身免疫性溶血性貧血，檢出的不規(guī)則抗體多數(shù)為自身溫抗體，在血型鑒定和交叉配血中起干擾作用[12]。自身溫抗體主要是IgG型，極少部分為IgM型，自身冷抗體是一種溫度范圍很窄的IgM型冷凝集素[13]，在4 ℃反應(yīng)較強(qiáng)，超過37 ℃通常不反應(yīng)?；颊唧w內(nèi)存在較強(qiáng)的自身溫抗體時，應(yīng)采用自身洗滌或放散后的紅細(xì)胞在4 ℃吸收血清中的自身抗體后再進(jìn)行同種抗體的檢測，以免其封閉或掩蓋同種抗體，導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)。確定了同種抗體的特異性以后，選擇不含相應(yīng)抗原的血液進(jìn)行交叉配血及輸注[14]。

本研究檢出特異性同種血型不規(guī)則抗體233例(87.9%)，其中Rh血型系統(tǒng)抗體201例(75.8%)，MNS血型系統(tǒng)14例(5.3%)，P血型系統(tǒng)1例(0.4%)，Lewis血型系統(tǒng)11例(4.2%)，Kidd血型系統(tǒng)3例(1.1%)，Duffy血型系統(tǒng)3例(1.1%)。結(jié)果顯示，Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體的陽性率最高，其次為MNS血型系統(tǒng)，提示Rh及MNS血型系統(tǒng)最容易產(chǎn)生血型不規(guī)則抗體。其中Rh血型系統(tǒng)的抗E、抗cE及抗-C是最常見的血型不規(guī)則抗體，也是引起遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)及新生兒溶血病的主要因素[8-9]?？筂、抗Le、抗Jk及抗Fy是除Rh抗體之外比較常見的血型不規(guī)則抗體，但其臨床意義明顯小于Rh抗D、抗E及抗C。通常RhD抗原性比E抗原性更強(qiáng)，抗D的檢出率本應(yīng)高于抗E，因我國較早采用RhD抗原相容性輸血，由輸血引起的抗D逐漸下降，由輸血引起的抗E呈上升趨勢[15]。本研究265例血型不規(guī)則抗體中，免疫球蛋白類型為：IgG型204例(77.0%)，IgM型58例(21.9%)，IgG+IgM型3例(1.1%)，抗體效價在4～512之間。37 ℃反應(yīng)性：+/-～++++。其中IgG型或IgG+IgM型血型不規(guī)則抗體207例(78.1%)，而且絕大多數(shù)為IgG型抗體，能在37 ℃與含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞發(fā)生+/-～++++的凝集反應(yīng)，因此說明所檢出的血型不規(guī)則抗體具有臨床意義[16]。

本研究265例血型不規(guī)則抗體臨床分布情況顯示，婦產(chǎn)科、血液科及感染科的血型不規(guī)則抗體陽性率居前三位，分別為15.5%、12.8%及11.3%。婦產(chǎn)科的血型不規(guī)則抗體陽性主要為孕產(chǎn)婦，血液科主要為白血病、自身免疫性溶血性貧血及多發(fā)性骨髓瘤患者，傳染科主要為乙型及丙型肝炎患者，可能與上述患者反復(fù)多次輸血有關(guān)[17]。從血型不規(guī)則抗體產(chǎn)生的種類及途徑分析，抗D多由妊娠免疫引起，抗E及抗Le多由反復(fù)輸血引起。本研究結(jié)果顯示，有輸血史或妊娠史的患者血型不規(guī)則抗體陽性明顯高于無輸血史或妊娠史者，女性患者的血型不規(guī)則抗體陽性(64.2%)明顯高于男性患者(35.8%)。其原因可能是由于女性患者受到妊娠和輸血的雙重免疫機(jī)會[18]，從而導(dǎo)致其血型不規(guī)則抗體陽性明顯高于男性。

綜上所述，反復(fù)輸血和多次妊娠極易受到免疫刺激而產(chǎn)生血型不規(guī)則抗體[19-20]，且絕大部分為IgG型抗體，在37 ℃有反應(yīng)性，可引起溶血性輸血反應(yīng)及新生兒溶血病。因此，在產(chǎn)前和輸血前對孕婦及受血者進(jìn)行血型不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定，及早發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)有臨床意義的血型不規(guī)則抗體，對防治新生兒溶血病，確保臨床輸血安全和有效有重要意義。

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陜西省自然科學(xué)基金(2009JM4006)；陜西省社發(fā)公關(guān)項(xiàng)目(2010K15-03-07)。

#同為第一作者。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.035 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0956-03

2015-11-20)