黃啟當(dāng),李澤泳，吳曉昀，嚴(yán) 芳

(廣東省第二人民醫(yī)院：1.風(fēng)濕免疫科；2.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，廣東廣州 510000)

·論 著·

抗核抗體聯(lián)合抗心磷脂抗體、抗精子抗體和抗β2糖蛋白I抗體檢測在女性不孕不育中的價(jià)值

黃啟當(dāng)1,李澤泳2，吳曉昀2，嚴(yán) 芳2

(廣東省第二人民醫(yī)院：1.風(fēng)濕免疫科；2.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，廣東廣州 510000)

目的 探討抗核抗體(ANA)聯(lián)合抗心磷脂抗體(ACA)、抗精子抗體(AsAb)和抗β2糖蛋白I抗體(β2GPI)檢測在女性不孕不育疾病診斷中的價(jià)值。方法 187例不孕不育女性患者為不孕不育組用間接免疫熒光法檢測血清中的ANA、AsAb抗體，同時(shí)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中的ACA、β2GPI抗體；對(duì)80例正常生育女性作為正常組聯(lián)合測定ANA、ACA、AsAb、β2GPI抗體。結(jié)果 187例不孕不育女性患者組中ANA陽性率為18.1%(34/187)，正常組為2.5%(2/80)；ACA陽性率為22.3%(43/187)，正常組為5.0%(4/80)；AsAb陽性率為18.7%(35/187)，正常組為3.8%(3/80)；β2GPI陽性率為20.3%(38/187)，正常組為3.8%(3/80)；兩組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 不孕不育與體內(nèi)存在的ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗體有密切關(guān)系，聯(lián)合檢測有助于免疫性不孕不育的病因查找和提高臨床診斷率。

不孕不育； 抗核抗體； 抗心磷脂抗體； 抗精子抗體； 抗β2糖蛋白I抗體

不孕不育癥是指正常育齡夫婦雙方在同居一年以上，有正常的性生活且沒有采用任何避孕措施但未能成功懷孕。近年來，不孕不育比例呈大幅上升趨勢，與西方國家不孕不育比例已比較接近[1]。引起不孕不育的原因眾多，主要包括生殖器官畸形等器質(zhì)性病變 、微生物感染和免疫因素三大方面。隨著生殖免疫學(xué)的進(jìn)步，人們逐漸認(rèn)識(shí)到不孕不育和自身免疫抗體存在密切的關(guān)系[2]。研究發(fā)現(xiàn)免疫因素約占不孕不育病因10%～30% 以上，在不孕不育的發(fā)生、發(fā)展過程中起到了重大作用，而在眾多的自身抗體中，人們往往忽略了對(duì)抗核抗體的檢測。本文對(duì)187例不孕不育女性患者和80例正常生育女性進(jìn)行了抗核抗體(ANA)、抗心磷脂抗體(ACA)、抗精子抗體(AsAb)和β,糖蛋白I抗體(β2GPI)抗體的聯(lián)合檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年5月至2015年5月期間本院收治的 187例不孕不育女性患者，年齡21～44歲，平均31歲，所有患者均行婦產(chǎn)科檢查，排除排卵異常、輸卵管不通、外周血染色體異常、內(nèi)分泌異常、生殖道畸形、男方不孕因素、感染等一系列病變狀況。對(duì)照組為有正常生育史的健康女性80例，年齡18～40歲，平均29歲。

1.2 檢測方法 抽取每例病例靜脈血3～5 mL不做抗凝處理，2 000 r/min離心10 min，離心后分離出血清，置于-20 ℃ 冰箱保存，測定前血清經(jīng)解凍并平衡至室溫。ANA和AsAb抗體測定采用間接免疫熒光法(IIF)，ACA、β2GPI抗體測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),試劑盒均由德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司提供，儀器采用Berthold Mithras LB940微孔板多功能酶標(biāo)儀以及德國EUROStar Ⅲ Plus型熒光顯微鏡，操作和結(jié)果判定均按試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 187例不孕不育女性患者和80例對(duì)照組人群ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗體聯(lián)合檢測結(jié)果見表1。

2.2 把34例ANA陽性設(shè)為一個(gè)組別，然后分別與ACA、AsAb和β2GPI抗體陽性結(jié)果聯(lián)合分析見表2。

2.3 34例ANA陽性結(jié)果核型分析見表3。

表1 ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗體聯(lián)合

*：P<0.05，與對(duì)照組比較。

表2 ANA分別與ACA、AsAb和β2GPI抗體聯(lián)合檢測結(jié)果[n(%)]

因ANA與ACA、AsAb、β2GPI 3項(xiàng)中的任2項(xiàng)或全部3項(xiàng)均未同時(shí)檢出陽性，故上表中未做分析。

表3 ANA核型分析[n(%),n=34]

3 討 論

不孕不育一直是困擾著人類生殖健康的難題。隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)并證明了不孕不育的發(fā)病機(jī)制與自身免疫因素有關(guān)，自身免疫產(chǎn)生的自身抗體又使得機(jī)體出現(xiàn)了免疫反應(yīng)并貫穿著生殖過程的各個(gè)環(huán)節(jié)。

目前，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ACA 、AsAb和β2GPI抗體對(duì)于不孕不育女性患者的病因分析和臨床診斷具有重要的指導(dǎo)意義。ACA是一種以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體。ACA 的產(chǎn)生是由于免疫系統(tǒng)無法識(shí)別位于細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層內(nèi)層帶負(fù)電荷的磷脂，而帶負(fù)電荷的磷脂如果暴露于內(nèi)層之外，就會(huì)產(chǎn)生抗心磷脂抗體(ACA)[3]。而當(dāng)ACA與磷脂結(jié)合，通過爭奪胎盤血管的磷脂受體，使胎盤血管形成血栓，導(dǎo)致了流產(chǎn)、胎盤早剝、不孕不育等一系列生殖疾病的發(fā)生。ACA 還可以結(jié)合精子的磷脂部分，使精子失去活性，不能穿透入卵，引起不孕[4]。AsAb 是最早被發(fā)現(xiàn)的可導(dǎo)致不孕不育的自身免疫性抗體。AsAb產(chǎn)生是由女性在有性活動(dòng)的情況下所導(dǎo)致，據(jù)對(duì)AsAb陽性患者進(jìn)行臨床觀察，往往都存在生殖器官及經(jīng)期異常出血時(shí)性交史，還有些患者患有子宮內(nèi)膜、陰道以及輸卵管等生殖系統(tǒng)炎癥。當(dāng)在損傷或者感染生殖道情況下進(jìn)行性生活，會(huì)導(dǎo)致精子抗原由女性生殖道黏膜上皮屏障，滲進(jìn)上皮下，接觸于女性B淋巴細(xì)胞而產(chǎn)生AsAb，而AsAb則直接影響受精卵著床、精卵結(jié)合以及精子正?；顒?dòng)等，進(jìn)而導(dǎo)致不孕[5]。在血清或生殖道分泌物中出現(xiàn)AsAb，對(duì)于精子活動(dòng)產(chǎn)生很強(qiáng)的抑制作用并干擾精子運(yùn)行，導(dǎo)致精子穿透困難以及阻礙精卵相結(jié)合，使正常的受精過程無法完成。AsAb 可通過不同途徑作用于受孕過程的多個(gè)環(huán)節(jié)，所以即使在精卵結(jié)合已經(jīng)完成的情況下，仍然可以對(duì)胚胎發(fā)育產(chǎn)生影響，造成流產(chǎn)、死胎。β2GPI又稱載脂蛋白H，由肝細(xì)胞合成,相對(duì)分子質(zhì)量為50 ×103,是血漿中含量較豐富的一種單鏈糖蛋白。Chamley等[6]發(fā)現(xiàn)抗β2GPI抗體可由胎盤能產(chǎn)生，該抗體能抑制內(nèi)源性的凝集通路及抑制血小板上的凝血酶原酶的活性，證明了β2GPI作為血栓形成的致病因出現(xiàn)在免疫性不孕不育疾病中。師萍等[7]探討了β2GPI抗體與不孕不育的關(guān)系，在檢測中發(fā)現(xiàn)β2GPI抗體在不孕不育中的陽性率約為29.4%，證實(shí)了β2GPI抗體表達(dá)異常與不孕不育有一定的相關(guān)性。本文187 例不孕不育患者中ACA陽性率約為22.3%，而對(duì)照組的陽性率僅約為5.0%；AsAb 陽性率約為18.7%，而對(duì)照組的陽性率僅約為3.8%；β2GPI抗體陽性率約為20.3%,而對(duì)照組的陽性率僅約為3.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這與之前學(xué)者們的研究相符合，也表明了本文能夠?qū)Σ辉胁挥难芯刻峁┝艘欢ǖ膬r(jià)值。

ANA是人類自身抗體中最重要的部分，臨床大量資料已經(jīng)證實(shí)，ANA與人體多種免疫性疾病密切相關(guān)，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、原發(fā)性膽汁性肝硬化、混合性結(jié)締組織病、干燥綜合征等，然而研究其對(duì)不孕不育的影響相對(duì)較少。雖然ANA對(duì)不孕不育不具有非常明確的特異性，它只作為自身免疫性疾病的一個(gè)總的篩查指標(biāo)，但是仍然有學(xué)者在研究中報(bào)道：不育癥和原發(fā)不孕者抗核抗體陽性檢出率高,抗核抗體陽性妊娠者的妊娠中毒癥發(fā)生率高,提示了可能是免疫學(xué)機(jī)制在影響妊娠初期而造成不孕、妨礙妊娠導(dǎo)致不育和引發(fā)妊娠中毒癥[8]。此外，抗核抗體還與產(chǎn)科并發(fā)癥及不良妊娠結(jié)局(如習(xí)慣性流產(chǎn)、妊娠期糖尿病和胎兒生長受限等)密切相關(guān)，特別是與免疫功能異常相關(guān)的習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系更為密切[9-10]。所以本文研究目的是想通過目前在自身免疫疾病領(lǐng)域中廣泛使用的ANA測定，來探討不明原因的不孕、不育(母體無臨床發(fā)病)患者中與自身免疫疾病的相關(guān)性。從結(jié)果上看，187例不孕不育患者中，ANA陽性率約為18.1%，而對(duì)照組的陽性率僅約為2.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在34例ANA陽性不孕不育患者中，ANA合并ACA陽性約有17.6%，ANA合并AsAb陽性約有23.5%，ANA合并β2GPI陽性約有14.7%，這表明了在不孕不育患者中經(jīng)常有ANA合并其他的自身抗體的存在；另一方面，在這34例ANA陽性不孕不育患者中主要為顆粒型(約占47.1%)、均質(zhì)型(約占17.6%)、核仁型(約占23.5%)這3種低滴度(滴度為1∶100)的核型，這說明在不孕不育患者里可能存在著低滴度的抗核抗體

但是患者沒有什么臨床表現(xiàn)，使得臨床上往往忽略掉ANA的檢測。在187例不孕不育患者組檢出抗體陽性里，除外ACA、AsAb和β2GPI抗體的陽性，仍然有15例即約8.0%的患者可以單獨(dú)檢出ANA陽性，這表明ANA的檢測可以成為不孕不育的一個(gè)篩查指標(biāo)。綜上所述，ANA抗體的檢測對(duì)不育不孕病因的分析有一定的指導(dǎo)意義，可為臨床診斷提供很好的幫助。

綜上所述，對(duì)女性不孕不育患者進(jìn)行ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗體聯(lián)合檢查，能夠提高疾病的檢出率，從而有利于從多方面多角度進(jìn)行不孕不育免疫因素的考慮和分析，這對(duì)于不孕不育疾病的病因查找、臨床診斷、治療和優(yōu)生優(yōu)育咨詢具有重要的意義。

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Value of detections of antinuclear antibody combined with anti-cardiolipin antibody,anti-sperm antibody and anti-β2-glycoprotein I antibody in female infertility

HuangQidang1,LiZeyong2,WuXiaoyun2,YanFang2

(1.DepartmentofRheumatology; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuangdongProvincialSecondPeople′sHospital,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Objective To investigate the value of detections of anti-nuclear antibody (ANA) combined with anti-cardiolipin antibody (ACA),anti-sperm antibody (AsAb) and anti-beta 2 glycoprotein I (β2GPI) antibody in the diagnosis of female infertility disease.Methods A total of 187 female cases of infertility(infertility group) were detected serum ANA and AsAb by the indirect immunofluorescence assay,and ACA and β2GPI antibody by the enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).ANA,ACA,AsAb and β2GPI antibody also were detected in 80 females cases of normal fertility(normal group).Results Among 187 cases of female infertility,ANA positive rate was 18.1%(34/187) and which in the normal group was 2.5%(2/80).The ACA positive rate was 22.3% (43/187) in the infertility group and 5.0%(4/80) in the normal group; the AsAb positive rate was 18.7%(35/187) in the infertility group and 3.8%(3/80) in the normal group; the β2GPI positive rate was 20.3%(38/187) in the infertility group and 3.8%(3/80) in the normal group; the differences between the two groups had statistical significance (P<0.05).Conclusion Infertility is closely correlated with the in vivo existence of ANA,ACA,AsAb and β2GPI antibody,the joint detection is conducive to find the etiology of infertility and improve the clinical diagnosis rate.

infertility; antinuclear antibody; anti-cardiolipin antibodies; antisperm antibody; anti-β2-glycoprotein I antibody

黃啟當(dāng),男，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.018 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-4130(2016)07-0915-03

2015-12-28)