米永華，黎 洋

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院檢驗科 402160)

·論 著·

孕晚期肌肉注射HBIG與新生兒及產(chǎn)后乳汁HBV-DNA含量相關(guān)性分析*

米永華，黎 洋△

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院檢驗科 402160)

目的 通過對孕產(chǎn)婦各個時期注射高效價乙肝免疫球蛋白(HBIG)后血清及乳汁中HBV DNA含量的分析、比較，為乙肝攜帶者孕產(chǎn)婦的乙肝病毒的母嬰阻斷及產(chǎn)后母乳喂養(yǎng)方案提供實驗依據(jù)。方法 選取2012年6月至2014年6月在該院產(chǎn)科門診進(jìn)行產(chǎn)前檢查HBsAg(+)的乙肝攜帶者孕婦140例，根據(jù)自愿、保密的原則，分為研究組和對照組，其中研究組75例于孕期 28、 32、 36 周進(jìn)行肌注高效價 HBIG 200 U，對照組65例中的孕產(chǎn)婦由于各種原因在孕期未進(jìn)行HBIG注射。分別于注射前、分娩前檢測兩組血清中HBV DNA含量、分娩后對新生兒血清及3～5 d內(nèi)乳汁進(jìn)行HBV DNA含量檢測，分析兩組的差異及相關(guān)性。結(jié)果 注射HBIG前研究組HBV DNA含量<500 copies/mL、500-1×106copies/mL、>1×106copies/mL分別為：28例、17例、30例，產(chǎn)前分別為：35例、20例、20例；對照組產(chǎn)前2次檢測為：19例、21例、25例及20例、17例、28例；在研究組與對照組中新生兒血清 HBV DNA 陽性分別為：1例(5.3%)及5例(7.7%)；在兩組乳汁中HBV DNA陽性分別為：3例(4%)和8例(12.3%)。結(jié)論 乙肝攜帶者孕婦在孕晚期進(jìn)行HBIG的注射可能影響其乙肝病毒的復(fù)制進(jìn)而減少新生兒宮內(nèi)感染的概率，同時降低其產(chǎn)后乳汁的HBV DNA的陽性率。

HBV DNA； 母乳喂養(yǎng)； 母嬰傳播； 乙肝病毒攜帶者； 乙肝免疫球蛋白

乙肝病毒(HBV)感染是當(dāng)前較為嚴(yán)重的世界健康問題，我國是一個HBV感染的高發(fā)區(qū)，在人群中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)攜帶者，有40%～50%是通過母嬰垂直傳播被動感染的。因此，如何減少我國乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)攜帶者數(shù)量，切實有效的措施就是減少母體血液、乳汁中HBV的含量，切斷母嬰傳播途徑，減少圍生期新生兒被感染率。對于乙肝攜帶者孕晚期注射乙肝免疫球蛋白(HBIG)阻斷HBV宮內(nèi)感染的效果和產(chǎn)后母乳喂養(yǎng)會否傳染 HBV仍存在一定的爭議[1-5]，本文采用熒光定量 PCR技術(shù)檢測乙型肝炎病毒攜帶孕產(chǎn)婦血清、乳汁及新生兒血清中 HBV DNA含量，分析孕產(chǎn)婦在經(jīng)過HBIG阻斷或者未經(jīng)處理后其不同時期的血清中HBV DNA濃度含量，以及對乳汁和新生兒血清HBV DNA濃度的影響，為乙肝病毒攜帶者孕晚期的處理和產(chǎn)后母乳喂養(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年6月至2014年6月間在本院產(chǎn)科門診行孕期產(chǎn)前檢查的乙型病毒性肝炎病毒攜帶產(chǎn)婦140例，其平均年齡27.2歲，最大42歲，最小20歲。根據(jù)自愿、保密原則分為研究組和對照組，其中研究組分別在孕期28、32、36周給予高效價HBIG肌肉注射200 U，非用藥組不采取治療措施。兩組均按照孕婦產(chǎn)前保健手冊按時到醫(yī)院進(jìn)行孕期各項檢查。

1.2 標(biāo)本采集方式 血清：所有研究對象于孕期12周、產(chǎn)前分別采集空腹靜脈抗凝血標(biāo)本2 mL，新生兒出生后 24 h 內(nèi)乙肝被動-主動免疫前股靜脈采集標(biāo)本，所有標(biāo)本均在 2 h 內(nèi)分離，待檢。乳汁：于產(chǎn)婦分娩后3～5 d內(nèi)乳房局部清洗消毒后用一次性無菌容器采取乳汁1～2 mL，將乳汁3 000 r/min棄上層脂肪，取中層乳清進(jìn)行乳汁HBV DNA檢測(檢測方法同血液標(biāo)本)。

1.3 HBV DNA熒光定量PCR檢測 儀器：上海宏石SLAN6.0，試劑:乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒(PCR-熒光探針法)

1.3.1 試劑準(zhǔn)備 取出試劑，衡溫，備用。根據(jù)待測樣本、陰陽性對照以及定量參考品A-D，按比例取相應(yīng)量的反應(yīng)液、酶混合液及內(nèi)標(biāo)，充分混合成PCR-mix,瞬時離心后備用。

1.3.2 樣本處理 在反應(yīng)管中加入核酸釋放劑5 μL，然后分別加入待測樣本、陰陽性對照以及定量參考品A-D各5 μL,混勻。10 min后，加入PCR-mix 40 μL，2 000 r/min離心30 s。

1.3.3 PCR擴(kuò)增 將PCR反應(yīng)管放入擴(kuò)增樣品槽，按對應(yīng)順序設(shè)置陰陽性對照、定量參考品A-D及未知樣本，并設(shè)置樣本名稱定量參考濃度，選擇熒光檢測通道，設(shè)定循環(huán)參數(shù)。

1.3.4 結(jié)果分析 反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的Start值、End值以及Threshold值，進(jìn)行分析，得出結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所有實驗數(shù)據(jù)都應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理、分析，計量資料用t檢驗，計數(shù)資料以χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 在表1中可見研究組在孕期28、32、36周給予高效價HBIG肌肉注射200 U后血清中HBV-DNA含量較以前有所下降，但是P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義，對照組中各組的HBV-DNA含量差異無統(tǒng)計意義(P>0.05)。表明對于乙肝攜帶者孕產(chǎn)婦在孕期給予高效價HBIG肌肉注射對于降低血清中HBV-DNA含量無明顯意義。

表1 孕婦產(chǎn)前HBV DNA檢測變化情況

2.2 表2可見研究中初乳及新生兒HBV DNA陽性占4%和5.3%，對照組占12.3%和7.7%。兩組中對照組較研究組有明顯差異(P<0.05)，表明在孕晚期給予高效價HBIG肌肉注射可能對于減少新生兒宮內(nèi)感染率及產(chǎn)后初乳的HBV DNA陽性率有一定的意義。

表2 產(chǎn)婦初乳及新生兒血清中HBV DNA

*：P<0.05，與研究組比較。

3 討 論

HBV感染的最主要的傳播途徑是母嬰垂直傳播，其中傳播的方式主要有：產(chǎn)前宮內(nèi)感染、 分娩時傳播(產(chǎn)道感染)及產(chǎn)后水平傳播(產(chǎn)后感染)。馬靜等[6]研究發(fā)現(xiàn)血清中高濃度的HBV DNA含量將直接影響其產(chǎn)前宮內(nèi)感染率。因此，在此環(huán)節(jié)需降低孕婦HBV DNA含量從而控制新生兒發(fā)生宮內(nèi)感染，本研究中觀察不同濃度血清HBV DNA含量孕婦給予高效價HBIG肌肉注射后其HBV DNA濃度較注射之前有所下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，對于新生兒HBV-DNA陽性率統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)研究組明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因此，對于有條件的家庭來說，筆者建議在孕期給予高效價HBIG肌肉注射，其可能對于減少其宮內(nèi)感染有一定的作用。產(chǎn)道感染大部分是由于分娩時胎盤剝離，母血通過臍靜脈進(jìn)入胎兒體內(nèi)，還有一些是胎兒經(jīng)過產(chǎn)道時，皮膚擦傷而接觸了母血受到感染。對于此種感染方式的預(yù)防需要產(chǎn)科醫(yī)師密切配合。產(chǎn)后感染途徑只要是食物傳播，對于新生兒來說，就是母乳傳播以及密切接觸?？偹苤?，母乳是嬰兒成長最理想的營養(yǎng)品,它富含水、 優(yōu)質(zhì)蛋白、不飽和脂肪酸、 乳糖、 礦物質(zhì)及維生素,以及免疫球蛋白,有益于嬰兒生長發(fā)育,國家大力提倡母乳喂養(yǎng)，但是對 HBsAg陽性產(chǎn)婦可否采用母乳喂養(yǎng)尚無統(tǒng)一意見[7-8],對于檢查產(chǎn)婦初乳中HBV DNA含量，是指導(dǎo)新生兒喂養(yǎng)方式的一個較為科學(xué)的辦法，血液中的 HBV主要來源于肝臟，而乳汁中的 HBV 主要來源于血液。當(dāng)乳汁中含有高濃度的HBV DNA時，嬰兒吸吮母乳時也將吸入含有HBV-DNA的血液。因此，但當(dāng)新生兒口腔、 咽喉、 食道、 胃腸黏膜等處有破損、 潰瘍時，HBV 就可能通過毛細(xì)血管進(jìn)入血液循環(huán)而引起其感染。本研究中發(fā)現(xiàn)在孕期注射高效價HBIG組中，產(chǎn)后乳汁中HBV DNA陽性率明顯下降，這也為新生兒進(jìn)行母乳喂養(yǎng)提供理論依據(jù)。

綜上所述，在對于乙肝攜帶者孕婦在孕晚期進(jìn)行規(guī)律的高效價HBIG肌肉注射，可能降低新生兒宮內(nèi)感染率及初乳中HBV DNA陽性率，從而降低新生兒感染HBV的概率并為其母乳喂養(yǎng)提供理論依據(jù)。

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[4]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)會感染病學(xué)分會．慢性乙型肝炎防治指南[J]．中華肝臟病雜志，2005，13(12)：881-891．

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Analysis on correlation between intramuscular HBIG in late pregnancy with neonatal and postnatal milk HBV DNA content*

MiYonghua,LiYang△

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedYongchuanHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing402160,China)

Objective To analyze and compare the HBV DNA contents in serum and breast milk after injection of hepatitis B immunoglobulin (HBIG) in different periods of pregnant and lying-in women to provide the experimental basis for blocking the maternal-neonatal transmission(PMTCT) and breast feeding scheme.Methods 140 pregnant women carrying hepatitis B virus with HBsAg(+) by antenatal examination in the obstetric outpatient department of our hospital from June 2012 to June 2014 were selected and divided into the research group and the control group according to the voluntary and secretive principle.Among them,75 cases in the research group were intramuscularly injected by high titer HBIG 200 U at 28,32,36 weeks of pregnancy,while 65 cases in the control group were injected by HBIG at the end of pregnancy due to different causes.Serum HBV-DNA content before injection and before delivery was detected in the two groups,and which in neonatal serum and breast milk within 3-5 d also detected.The differences and correlation between the two groups were analyzed.Results The HBV-DNA content <500 copies/mL，500-1×106copies/mL，>1×106copies/mL before HBIG injection in the research group were 28 cases，17 cases，30 cases respectively,which before delivery were 35 cases，20 cases，20 cases respectively; which in antenatal twice detection in the control group were 19 cases，21 cases，25 cases and 20 cases，17 cases，28 cases respectively;neonatal serum HBV-DNA positive in the research group and control group had 1 case(5.3%) and 5 cases (7.7%) respectively；the breast milk HBV-DNA positive in the two groups had 3 cases(4%)/ and 8 cases(12.3%) respectively.Conclusion HBIG injection at late pregnancy in the pregnant women carrying HBV could influence the HBV replication,thus reduces the probability of neonatal intrauterine infection,at the same time reduces the HBV-DNA positive rate of postpartum breast milk.

HBV-DNA； milk breast； maternal-neonatal transmission； hepatitis B virus carriers； hepatitis B immune globulin

永川市科委基金資助項目(2012BE5022)。

米永華,女，主管技師，主要從事腫瘤診斷方法學(xué)研究。

△，E-mail：iamliyang@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.005 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0878-03

2015-11-18)