陳 軍，趙文暉，劉玲玲，謝克亮，宋張駿

（1.陜西省腫瘤醫(yī)院麻醉科，陜西西安 710061；2.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院麻醉科，天津市麻醉學(xué)研究所，天津 300052；3.陜西省腫瘤醫(yī)院乳腺科，陜西西安 710061）

異丙酚通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移

陳 軍1，趙文暉1，劉玲玲2，謝克亮2，宋張駿3

（1.陜西省腫瘤醫(yī)院麻醉科，陜西西安 710061；2.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院麻醉科，天津市麻醉學(xué)研究所，天津 300052；3.陜西省腫瘤醫(yī)院乳腺科，陜西西安 710061）

目的 研究異丙酚對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)信號(hào)通路PI3K/Akt的影響。方法 將來源于人類乳腺癌細(xì)胞株移植到SPF級(jí)裸基因的免疫缺陷型小鼠制備乳腺癌模型。將接種成功小鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（C組，n＝6）、異丙酚輸注組（P組，50mg/kg，輸注2h，n＝6）、PI3K抑制劑（BYL719）組（B組，n＝6）和異丙酚加PI3K抑制劑組（P＋B組，n＝6）。于給藥后4周分別采用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)（Western blot）檢測(cè)4組小鼠癌組織中PI3K、磷酸化Akt （p－Akt）、Akt的蛋白表達(dá)水平，逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）檢測(cè)PI3KR1（PI3Kregulatory subunit 1）和Akt （Akt1和Akt2）的mRNA表達(dá)水平；取雙肺，觀察小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。結(jié)果 與C組相比，P組PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)明顯增高（P＜0.05），PI3KR1的mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少（P＜0.05）；B組PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），PI3KR1 mRNA、Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），肺表面結(jié)節(jié)數(shù)明顯增加（P＜0.05）。與B組相比，P＋B組明顯上調(diào)了PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)（P＜0.05），PI3KR1的mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），肺表面結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少（P＜0.05）。結(jié)論 異丙酚可通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

異丙酚；PI3K/Akt；乳腺癌；轉(zhuǎn)移

與其他治療方法相比，手術(shù)切除早期乳癌原發(fā)灶仍是治療乳腺癌的有效方法，且預(yù)后良好。因此，手術(shù)仍是目前治療早期乳癌的最常用的方法［1］。但有研究發(fā)現(xiàn)手術(shù)是一把雙刃劍，它在切除癌癥灶的同時(shí)，會(huì)誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移［2－3］。而乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡率增高的主要原因。手術(shù)誘發(fā)的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移可能與多種因素有關(guān)，如術(shù)后炎癥反應(yīng)［4］和免疫抑制［5］等。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)磷酸肌醇3－激酶（PI3K）/Akt通路與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有著高度的相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞會(huì)引起該通路活性異常，造成PI3K的基因突變，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)［6］。行乳癌根治術(shù)的患者大多在全身麻醉下施術(shù)，異丙酚是目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的全身麻醉藥物。該藥在發(fā)揮全身麻醉作用的同時(shí)，具有抗炎、抗氧化等作用［7］。而且大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)異丙酚具有抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能，其具體機(jī)制尚不完全清楚，其中包括減輕術(shù)后對(duì)自然殺傷細(xì)胞的抑制［5］以及抑制與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的酶的活性，如基質(zhì)金屬蛋白酶－2（MMP－2）和MMP－9［8］。關(guān)于異丙酚是否通過作用于PI3K/Akt信號(hào)通路抑制癌癥患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移尚未見相關(guān)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 SPF級(jí)裸基因的免疫缺陷型小鼠（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），8～10周，體質(zhì)量18～25g。將來源于人類乳腺癌細(xì)胞株（ATCC來源）移植到裸基因的免疫缺陷小鼠制備乳腺癌模型［9］。應(yīng)用雌激素受體陽(yáng)性的MCF－7人乳癌細(xì)胞株接種于裸鼠右側(cè)胸壁乳墊下，移植細(xì)胞總數(shù)為1×106/只。將裸鼠飼養(yǎng)于無特殊病原菌環(huán)境中：溫度22～25℃，相對(duì)濕度約40％，每日12h晝/夜交替，自由飲水、飲食。接種10d后在接種部位可見硬結(jié)，表明接種成功。將接種成功小鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（C組）、異丙酚輸注組（P組，50mg/kg，經(jīng)股靜脈輸注2h）、異丙酚加PI3K抑制劑組（P＋B組）和PI3K抑制劑組（B組，BYL719，1μmol/L，i.v.），每組6只。

1.2 Western blot檢測(cè)PI3K、磷酸化Akt（p－Akt）和Akt表達(dá) 于給藥后4周，用20g/L水合氯醛（15mg/kg）麻醉小鼠，分別取腫瘤組織通過Western blot檢測(cè)PI3K、p－Akt和Akt的表達(dá)水平。取癌組織，稱重，加入RIPA裂解液和蛋白酶抑制劑（批號(hào)：P1905，上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司），液氮?jiǎng)驖{，4℃離心5min，取上清，BCA法蛋白定量后于－80℃保存。取20g蛋白樣品，加入4×蛋白上樣緩沖液（北京索萊寶科技有限公司），95℃煮沸5min，SDS－PAGE電泳60min，濕轉(zhuǎn)90min，50g/L脫脂奶粉室溫封閉1h，分別滴加兔來源的多克隆PI3K一抗（1∶1 000，Abcam公司，英國(guó)）、磷酸化絲氨酸－473－Akt蛋白一抗（1∶1 000，Abcam公司，英國(guó)）和兔來源的多克隆Akt一抗（1∶5 000，Millipore公司，德國(guó)）。4℃搖床過夜，1×TBST洗膜5min×3次，加HRP－羊抗兔IgG二抗（1∶5 000，Millipore公司，德國(guó)），室溫封閉1h。電化學(xué)發(fā)光溶液中顯影10～30s，暴露于X感光膠片。通過磷酸化法對(duì)條帶進(jìn)行分析，并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。采用Ge1－pro軟件（Media Cybernetics公司，美國(guó)）進(jìn)行分析。

1.3 熒光定量PCR檢測(cè)PI3KR1、Akt1和Akt2的mRNA表達(dá) 于給藥后4周，用20g/L水合氯醛（15 mg/kg）麻醉小鼠，分別取腫瘤組織提取總RNA。用RevertAidTM第一鏈cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，42℃孵育60min，70℃加熱5min終止反應(yīng)。通過SYBR Green法進(jìn)行模板的熒光定量PCR檢測(cè)（天根Real Master Mix熒光定量PCR試劑盒）。PI3KR1、Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)水平均以三磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參照。引物序列為PI3KR1（F：5′－CAGCAACCTGGCAGAATTACGA－3′；R：5′－TGACAGGATTTGGTAAGTCCAGGAG－3′），Akt1（F：5′－CCCTTCTACAACCAGGACCA－3′；R：5′－ATACACAATAATGCCACACGA－3′），Akt2（F：5′－TTTGTGTTCCCTTCCCTGTC－3′；R：5′－TCACTCTCCATCCTCCCAAC－3′）和GAPDH（F：5′－A ACAGCAACTCCACTCTTC－3′；R：5′－CCTCTCTTGCTCAGTGTCCT－3′）。用iQTM5多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增并對(duì)各組腫瘤組織中的目的基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析。

1.4 肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)計(jì)數(shù) 于給藥后4周，用20g/L水合氯醛（15mg/kg）麻醉小鼠，取雙肺觀察肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（珔x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與C組相比，P組PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)明顯增高（P＜0.05），PI3KR1的mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞ 0.05），肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少（P＜0.05）；B組PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），PI3KR1、Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），肺表面結(jié)節(jié)數(shù)明顯增加（P＜0.05，圖1～圖3）。

與B組相比，P＋B組明顯上調(diào)了PI3K和p－Akt的蛋白表達(dá)（P＜0.05），PI3KR1的mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），Akt1和Akt2的mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），肺表面結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少（P＜0.05，圖1～圖3）。

圖1 Western blot檢測(cè)不同組小鼠PI3K、p－Akt和Akt的蛋白表達(dá)水平（％對(duì)照組，珔x±s）Fig.1Expressions of PI3K，p－Akt and Akt protein detected by Western blot in different groups

圖2 RT－RCR檢測(cè)不同組小鼠PI3KR1、Akt1和Akt2 mRNA的表達(dá)水平（％對(duì)照組，珔x±s）Fig.2Expressions of PI3KR1，Akt1and Akt2mRNA detected by RT－PCR in different groups

圖3 不同組小鼠肺表面的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)（珔x±s）Fig.3The number of pulmonary metastasis tumor in rats in different groups

3 討論

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，世界上導(dǎo)致患者死亡的癌癥中，乳腺癌排在第二位。據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)婦女中1/3的癌癥是乳腺癌［10－11］。乳腺癌的轉(zhuǎn)移情況是決定患者生存率的主要因素。與癌癥轉(zhuǎn)移相關(guān)的機(jī)制復(fù)雜，涉及多種蛋白和信號(hào)通路活性狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)，在癌細(xì)胞周圍包圍著許多細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、髓源抑制細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞。這些炎癥細(xì)胞產(chǎn)生促炎癥因子，如TGF－β、TNF－α、IL－6和IL－1，激活NF－κB和STAT 3，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子和蛋白酶誘發(fā)內(nèi)皮－間皮轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［12］。本實(shí)驗(yàn)采用的人類乳腺癌細(xì)胞株移植法制備裸鼠乳癌模型，具有方法簡(jiǎn)單、成功率高、對(duì)全身影響小等優(yōu)點(diǎn)。

免疫抑制也是誘發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，某些麻醉藥物通過抑制機(jī)體的免疫反應(yīng)，如抑制自然殺傷（NK）細(xì)胞活性和損傷機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫力，造成腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［5］。但異丙酚作為目前應(yīng)用最為廣泛的全身麻醉藥物，具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，據(jù)報(bào)道50mg/kg異丙酚可抑制靜脈注射的腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移［13］。其作用機(jī)制可能是該藥具有抗炎［14］、抗氧化［15］和調(diào)節(jié)免疫力的功能［5］。手術(shù)本身是造成患者術(shù)后癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的又一主要原因，手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致患者處于心理和生理的高度應(yīng)激狀態(tài)，從而降低機(jī)體的免疫力，加速癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移［16］。行乳腺癌根治術(shù)的患者一般在全身麻醉下施術(shù)，全麻藥異丙酚具有鎮(zhèn)靜麻醉和減輕患者應(yīng)激反應(yīng)的作用。因此可以增加患者的免疫力，抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt通路是腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵通路。Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可被與PI3K依賴的細(xì)胞外信號(hào)通路激活，使其處于磷酸化狀態(tài)。被激活的Akt進(jìn)入到胞質(zhì)、胞核和細(xì)胞內(nèi)的其他部位，造成細(xì)胞內(nèi)大量底物蛋白磷酸化，最終調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和遷移［17］。據(jù)報(bào)道，持續(xù)活化的Akt可降低活化的T細(xì)胞核因子和環(huán)氧合酶（COX）－2的表達(dá)，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲性［18－19］。活化的Akt還可以通過促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞的分化抑制其轉(zhuǎn)移［20］。另?yè)?jù)報(bào)道，超過70％的乳腺癌患者出現(xiàn)PI3K/Akt信號(hào)通路遺傳學(xué)改變，主要是PIK3CA基因突變和HER2擴(kuò)增，進(jìn)而導(dǎo)致該通路活性降低和Akt磷酸化水平降低，從而不能抑制其下游的MEK/ERK通路，進(jìn)而造成腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移［21］。因此，PI3K/Akt通路活性與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但異丙酚能否通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，異丙酚可上調(diào)PI3K的蛋白和基因的表達(dá)水平，明顯增加p－Akt水平，減少肺轉(zhuǎn)移的癌結(jié)節(jié)數(shù)，并且異丙酚還能減輕PI3K抑制劑導(dǎo)致的p－Akt水平降低，降低PI3K抑制劑導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移增強(qiáng)。綜上所述，異丙酚可通過上調(diào)和激活PI3K/Akt信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

［1］KüMMEL S，HOLTSCHMIDT J，LOIBL S.Surgical treatment of primary breast cancer in the neoadjuvant setting［J］.Br J Surg，2014，101（8）：912－924.

［2］BAUM M，DEMICHELI R，HRUSHESKY W，et al.Does surgery unfavourably perturb the“natural history”of early breast cancer by accelerating the appearance of distant metastases？［J］.Eur J Cancer，2005，41（4）：508－515.

［3］SHAKHAR G，BEN－ELIYAHU S.Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression：could they reduce recurrence rates in oncological patients［J］？Ann Surg Oncol，2003，10（8）：972－992.

［4］AN G，KULKARNI S.An agent－based modeling framework linking inflammation and cancer using evolutionary principles：Description of a generative hierarchy for the hallmarks of cancer and developing a bridge between mechanism and epidemiological data［J］.Math Biosci，2015，260（1）：16－24.

［5］MELAMED R，BAR－YOSEF S，SHAKHAR G，et al.Suppression of natural killer cell activity and promotion of tumor metastasis by ketamine，thiopental，and halothane，but not by propofol：mediating mechanisms and prophylactic measures ［J］.Anesth Analg，2003，97（5）：1331－1339.

［6］BASELGA J.Targeting the phosphoinositide－3（PI3）kinase pathway in breast cancer［J］.Oncologist，2011，16（Suppl 1）：12－19.

［7］GOKCINAR D，ERGIN V，CUMAOGLU A，et al.Effects of ketamine，propofol，and ketofol on proinflammatory cytokines and markers of oxidative stress in a rat model of endotoxemiainduced acute lung injury［J］.Acta Biochim Pol，2013，60（3）：451－456.

［8］WU KC，YANG ST，HSIA TC，et al.Suppression of cell invasion and migration by propofol are involved in down－regulating matrix metalloproteinase－2 and p38 MAPK signaling in A549 human lung adenocarcinoma epithelial cells［J］.Anticancer Res，2012，32（11）：4833－4842.

［9］GAROFALO A，CHIRIVI RG，SCANZIANI E，et al.Comparative study on the metastatic behavior of human tumors in nude，beige/nude/xid and severe combined immunodeficient mice［J］.Invasion Metastasis，1993，13（2）：82－91.

［10］FERLAY J，SHIN HR，BRAY F，et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：GLOBOCAN2008［J］.Int J Cancer，2010，127（12）：2893－2917.

［11］DESANTIS C，SIEGEL R，BANDI P，et al.Breast cancer statistics，2011［J］.CA Cancer J Clin，2011，61（6）：409－418.

［12］WU Y，ZHOU BP.Inflammation：a driving force speeds cancer metastasis［J］.Cell Cycle，2009，8（20）：3267－3273.

［13］張雅靜，林春水，汪威，等.丙泊酚對(duì)荷瘤大鼠腫瘤肺轉(zhuǎn)移及MTA1和Wnt1表達(dá)的影響［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，34 （7）：1011－1015.

［14］HSING CH，LIN MC，CHOI PC，et al.Anesthetic propofol reduces endotoxic inflammation by inhibiting reactive oxygen species－regulated Akt/IKKβ/NF－κB signaling［J］.PLoS One，2011，6（3）：e17598.

［15］YANG SC，CHUNG PJ，HO CM，et al.Propofol inhibits superoxide production，elastase release，and chemotaxis in formyl peptide－activated human neutrophils by blocking formyl peptide receptor 1［J］.J Immunol，2013，190（12）：6511－6519.

［16］NEEMAN E，BEN－ELIYAHU S.Surgery and stress promote cancer metastasis：new outlooks on perioperative mediating mechanisms and immune involvement［J］.Brain Behav Immun，2013，30（Suppl）：S32－40.

［17］KATSO R，OKKENHAUG K，AHMADI K，et al.Cellular function of phosphoinositide 3－kinases：implications for development，homeostasis，and cancer［J］.Annu Rev Cell Dev Biol，2001，17（1）：615－675.

［18］YOELI－LERNER M，YIU GK，RABINOVITZ I，et al.Akt blocks breast cancer cell motility and invasion through the transcription factor NFAT［J］.Mol Cell，2005，20（4）：539－550.

［19］YIU GK，TOKER A.NFAT induces breast cancer cell invasion by promoting the induction of cyclooxygenase－2［J］.J Biol Chem，2006，281（18）：12210－12217.

［20］HUTCHINSON JN，JIN J，CARDIFF RD，et al.Activation of Akt－1（PKB－alpha）can accelerate ErbB－2－mediated mammary tumorigenesis but suppresses tumor invasion［J］.Cancer Res，2004，64（9）：3171－3178.

［21］EBI H，COSTA C，F(xiàn)ABER AC，et al.PI3K regulates MEK/ERK signaling in breast cancer via the Rac－GEF，P－Rex1［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2013，110（52）：21124－21129.

（編輯 邱 芬）

Propofol inhibits the metastasis of tumor cells via activating PI3K/Akt signaling pathway

CHEN Jun1，ZHAO Wen－h(huán)ui1，LIU Ling－ling2，XIE Ke－liang2，SONG Zhang－jun3
（1.Department of Anesthesiology，Shaanxi Provincial Tumor Hospital，Xi’an 710061；2.Department of Anesthesiology，Tianjin Medical University General Hospital；Tianjin Institute of Anesthesiology，Tianjin 300052；3.Department of Galactophore，Shaanxi Provinical Tumor Hospital，Xi’an 710061，China）

Objective To study the effects of propofol on the metastasis of tumor cells related PI3K/Akt signaling pathway.Methods The breast cancer model was established by transplanting human derived breast cancer cell lines into immunodeficient mice with naked gene.The mice，inoculated successfully，were randomly divided into 4 groups：control group（C group，n＝6），propofol group（P group，n＝6），propofol＋PI3K inhibitor （BYL719）group（P＋B group，n＝6），and PI3K inhibitor group（BYL719）（B group，n＝6）.The expressions of PI3K，p－Akt and Akt were examined by Western blot at week 4 after administration；the gene levels of PI3KR1，Akt1 and Akt2 were detected by RT－PCR at week 4 after administration；the number of metastatic lung nodules from both lungs was also observed at week 4 after administration.Results Compared with those in C group，the expressions of PI3K and p－Akt were significantly higher in P group（P＜0.05），the level of PI3KR1 mRNA but not Akt1 and Akt2 mRNA was significantly increased（P＜0.05），and metastatic lung nodules significantly decreased （P＜0.05）.In B group，the expressions of PI3K and p－Akt were significantly decreased（P＜0.05），the levels of PI3KR1，Akt1 and Akt2 mRNA were not significantly increased（P＞0.05），but metastatic lung nodules significantly increased（P＜0.05）.Compared with those in B group，in P＋B group the expressions of PI3K and p－Akt were markedly higher（P＜0.05），the level of PI3KR1 mRNA but not Akt1 and Akt2 mRNA was significantly increased （P＜0.05），and metastatic lung nodules significantly decreased（P＜0.05）.Conclusion Propofol can inhibit the metastasis of tumor cells through the upregulated and activated PI3K/Akt signaling pathway.

propofol；PI3K/Akt；breast cancer；metastasis

R73－37

A

10.7652/jdyxb201602016

2015－06－15

2015－12－22

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81101409）Supported by the National Natural Science Foundation of China（No.81101409）

謝克亮.E－mail：xiekeliang2009@hotmail.com

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160202.1112.002.html（2016－02－02）