彭湃　段清　魏殿軍

作者單位：300211天津市，天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科

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絕經(jīng)后婦女宮頸糜爛組織hTERC基因表達(dá)的臨床意義

彭湃段清魏殿軍

作者單位：300211天津市，天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科

【摘要】目的探討絕經(jīng)后婦女宮頸糜爛組織中人類染色體末端酶（human telomerase RNA component，hTERC）基因的表達(dá)及其臨床意義。方法選擇2015年2月至2015年8月于我院就診的絕經(jīng)1年及以上婦女經(jīng)肉眼觀為宮頸糜爛的患者60例，根據(jù)宮頸糜爛程度分為宮頸輕度糜爛組（19例）、中度糜爛組（23例）、重度糜爛組（18例）。另收集同期健康查體的宮頸光滑婦女40例為對照組。所有受檢者均行陰道鏡下宮頸活檢，作出組織病理學(xué)診斷，采用熒光原位雜交技術(shù)檢測宮頸組織中hTERC基因表達(dá)情況。結(jié)果隨著宮頸糜爛程度的加重，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅲ及宮頸癌的陽性率呈逐漸升高的趨勢，各組間不同病理分級的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；宮頸糜爛組與對照組宮頸活檢組織標(biāo)本均可見hTERC基因表達(dá)的細(xì)胞；在100例受檢者中，56例hTERC基因擴(kuò)增陽性，陽性表達(dá)率為56.00%（56／100）。在對照組、輕度糜爛組、中度糜爛組及重度糜爛組中hTERC基因的陽性表達(dá)率分別為10.00%（4／40）、68.42%（13／19）、91.30%（21／23）及100.00%（18／18），四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝41.283，P＜0.05）；且宮頸活檢組織中hTERC基因與宮頸糜爛有較好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r為0.936（P＝0.000）。宮頸活檢組織中hTERC基因?qū)m頸糜爛的診斷性能較好，靈敏度及特異性分別為87.03%和83.33%。結(jié)論宮頸糜爛的患者其組織學(xué)診斷多樣化，糜爛程度越高，發(fā)生CIN及宮頸癌的可能性越大，hTERC基因表達(dá)水平亦有隨之升高的趨勢。

【關(guān)鍵詞】絕經(jīng)后；婦女；宮頸糜爛；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；人類染色體末端酶基因

絕經(jīng)后婦女宮頸病變有其自身的特點(diǎn)，多無明顯自覺癥狀，肉眼擬診為宮頸糜爛時(shí)，陰道鏡下病理活檢結(jié)果包括：正常、宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）、宮頸癌。隨著老年人口的增加，老年宮頸癌患者也相應(yīng)增加［1］。CIN發(fā)展為原位癌、浸潤癌的風(fēng)險(xiǎn)分別是正常人群的20倍和7倍［2］。宮頸浸潤癌的高發(fā)年齡為50～55歲，是絕經(jīng)后婦女的發(fā)病高峰期［3］。宮頸細(xì)胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變過程中幾乎都伴有3號染色體長臂擴(kuò)增，其中涉及的最重要的基因可能是人類染色體末端酶（human telomerase RNA component，hTERC）基因，其有望成為非典型細(xì)胞癌變的基因［4］。本文研究通過比較各宮頸糜爛組不同病理分級的陽性率及檢測hTERC基因的表達(dá)情況，探討絕經(jīng)后婦女宮頸糜爛的組織學(xué)特點(diǎn)及hTERC基因在宮頸糜爛組織中的表達(dá)及臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料隨機(jī)抽取2015年2月至2015年8月于我院就診的肉眼觀為宮頸糜爛的患者60例，按照《婦產(chǎn)科學(xué)》第七版診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］將宮頸糜爛患者分為輕度糜爛組（19例）、中度糜爛組（23例）、重度糜爛組（18例）。同期選取40例宮頸光滑者為對照組，所有研究對象均簽署知情同意書后接受宮頸活檢。所有對象年齡50～65歲，中位年齡53.5歲，均有性生活史，子宮和雙側(cè)附件均正常，排除有陰道炎性病變、宮頸充血、宮頸息肉、囊腫、宮頸舉擺痛、性交后出血者。

1.2主要儀器與試劑hTERC／CSP3DNA雙色熒光探針（購自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司）。hTERC DNA探針作為檢測探針，雜交到3號染色體長臂3q26.3，熒光信號為紅色（四甲基羅丹明）；CSP3 DNA作為對照探針，雜交到3號染色體著絲粒（3p11.1－q11.1），熒光信號為綠色（細(xì)胞綠）。

1.3方法

1.3.1組織病理學(xué)檢查采用光學(xué)電子陰道鏡對全部受檢對象進(jìn)行陰道鏡下活檢［6］。10%中性福爾馬林固定組織。送病理科做切片、HE染色后做出組織學(xué)診斷。

1.3.2熒光原位雜交技術(shù)（fluorescence in situ hybridisation，F(xiàn)ISH）檢測hTERC基因表達(dá)宮頸組織蠟塊標(biāo)本，用FISH技術(shù)檢測hTERC基因表達(dá)。按照FISH檢測試劑盒說明書操作。每個(gè)樣本觀察100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)其中hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目和信號模式，繪制受試者工作特征曲線，確定宮頸糜爛組織hTERC基因的陽性界值。本實(shí)驗(yàn)宮頸活檢組織hTERC基因的陽性臨界值為11%，如圖1所示，超過此閾值為標(biāo)本hTERC基因表達(dá)陽性。

圖1　hTERC基因診斷宮頸糜爛的受試者工作特征曲線

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)；hTERC基因與宮頸癌糜爛程度的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各宮頸糜爛組不同病理分級的陽性率結(jié)果比較按照宮頸活檢及組織病理學(xué)檢測結(jié)果，可分為正常、宮頸炎，CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌。由表1可見，隨著宮頸糜爛程度的加重，CINⅢ及宮頸癌陽性率呈逐漸升高趨勢，各組間不同病理分級的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

2.2宮頸活檢組織hTERC基因表達(dá)情況單個(gè)間期細(xì)胞核中紅色及綠色信號各2個(gè)為正常細(xì)胞，單個(gè)間期細(xì)胞核中綠色信號不少于2個(gè)、紅色信號多于2個(gè)為hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞。宮頸糜爛組與對照組宮頸活檢組織標(biāo)本與hTERC／CSP3DNA雙色熒光探針雜交后，均可清晰的看到紅色及綠色的探針雜交信號亮點(diǎn)，見圖2、3。

圖2　hTERC基因陽性表達(dá)細(xì)胞

圖3　正常細(xì)胞

2.3宮頸糜爛組織hTERC基因的陽性表達(dá)率結(jié)果在100例受檢者中，56例hTERC基因擴(kuò)增陽性，陽性表達(dá)率為56.00%（56／100）。在對照組、輕度糜爛組、中度糜爛組及重度糜爛組hTERC基因的陽性表達(dá)率分別為10.00%（4／40）、68.42%（13／19）、91.30% （21／23）及100.00%（18／18），四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝41.283，P＜0.05），見表2。

表2　宮頸糜爛組織hTERC基因的陽性表達(dá)率結(jié)果［n（%）］

2.4hTERC基因與宮頸糜爛嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，宮頸活檢組織中hTERC基因與宮頸糜爛有較好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r為0.936（P＝0.000）。

2.5hTERC基因診斷宮頸糜爛的靈敏度及特異性宮頸活檢組織中hTERC基因?qū)m頸糜爛的診斷性能較好，其靈敏度及特異性分別為87.03%和83.33%。

3　討論

宮頸糜爛是婦科臨床工作中最常用的診斷術(shù)語，以往一直被認(rèn)為是慢性宮頸炎最常見的病理類型。隨著陰道鏡及病理學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到“宮頸糜爛”的形成是因卵巢分泌的雌激素使原始鱗－柱交界外移至宮頸陰道部所致，由于肉眼觀似糜爛，過去稱為宮頸糜爛，而非病理學(xué)中上皮脫落的真性糜爛。婦女絕經(jīng)后雌激素水平下將，宮頸萎縮，原始鱗－柱交接部退回至宮頸管內(nèi)，絕經(jīng)后婦女應(yīng)表現(xiàn)為光滑的宮頸，然而在臨床工作中經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后婦女仍存在“宮頸糜爛”。由于對宮頸糜爛認(rèn)識上的不同，對宮頸糜爛的治療國內(nèi)外存在不同的觀念。國外學(xué)者主張對宮頸糜爛無臨床癥狀者不須治療，僅做細(xì)胞學(xué)篩查，若細(xì)胞學(xué)異常，則根據(jù)細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)處理。國內(nèi)部分學(xué)者認(rèn)為，宮頸柱狀上皮抵抗力低，病原體易進(jìn)入發(fā)生炎癥，采用各種治療方法破壞異位的柱狀上皮，使宮頸陰道部全部被新生的鱗狀上皮所覆蓋，減少異?；案腥镜臋C(jī)會，以減少宮頸癌的發(fā)生。因?qū)m頸糜爛的發(fā)生與宮頸癌形成機(jī)制不明，雖然宮頸內(nèi)膜外移是誘發(fā)感染的危險(xiǎn)因素，但是到底是先有宮頸內(nèi)膜外移后誘發(fā)感染、惡變，還是先有感染后誘發(fā)宮頸內(nèi)膜外移，目前尚無定論，也未見相關(guān)報(bào)道。

本文研究結(jié)果顯示，隨著糜爛程度的加重，CINⅢ及宮頸癌的陽性率呈逐漸升高的趨勢，各組間不同病理分級的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），進(jìn)一步表明絕經(jīng)后婦女的宮頸糜爛程度與CIN及宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，宮頸糜爛程度越重，發(fā)展為宮頸癌的可能性越大。但本文研究中有1例宮頸光滑的患者也檢出宮頸癌，提示對于絕經(jīng)期婦女，肉眼觀正常亦不能排除宮頸癌的發(fā)生，對于高危人群，應(yīng)進(jìn)一步做宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查或組織病理學(xué)檢查以排除診斷。

早在1914年Boveri就提出染色體異常是腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)。近年來，美國NIH針對宮頸癌的研究表明，宮頸細(xì)胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中，幾乎都伴有3號染色體長臂擴(kuò)增［6］。其中，涉及到的最重要的基因是hTERC基因，位于3q26.3。該基因?yàn)槎肆Ｃ傅闹匾M成部分。有研究［7］證明，單一外源性TERC就能增強(qiáng)細(xì)胞的增殖潛能及端粒酶的活性，并延長端粒的長度，所以說hTERC基因在端粒酶活性的上調(diào)中起著重要作用。端粒酶的激活與細(xì)胞的增殖有關(guān)，是許多腫瘤發(fā)生的必經(jīng)之路，是宮頸癌形成的早期事件。另有學(xué)者研究［8］認(rèn)為，hTERC基因的檢測可以作為宮頸癌的遺傳學(xué)診斷手段，對hTERC基因擴(kuò)增的檢測有助于宮頸癌的篩查及早期診斷。本文應(yīng)用FISH技術(shù)檢測宮頸糜爛活檢組織中hTERC基因的表達(dá)，結(jié)果顯示，在100例受檢者中，56例hTERC基因擴(kuò)增陽性，陽性表達(dá)率為56.00%（56／100）。在對照組及宮頸糜爛各組患者中均可見到hTERC基因的陽性表達(dá)，在對照組、輕度糜爛組、中度糜爛組以及重度糜爛組中hTERC基因的陽性表達(dá)率分別為10.00% （4／40）、68.42%（13／19）、91.30%（21／23）及100.00% （18／18），呈逐漸升高的趨勢，且四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝41.283，P＜0.05），提示隨著宮頸糜爛程度的加重，hTERC基因的陽性表達(dá)率逐漸升高，18例重度宮頸糜爛患者均有hTERC基因的陽性表達(dá)，說明hTERC基因的陽性表達(dá)率與宮頸病變的嚴(yán)重程度相關(guān)。本文研究對hTERC基因的表達(dá)與宮頸糜爛程度的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，二者的相關(guān)系數(shù)r為0.936（P＝0.000），進(jìn)一步驗(yàn)證了宮頸糜爛嚴(yán)重程度與hTERC基因的表達(dá)相關(guān)。說明hTERC基因的表達(dá)水平可用于宮頸糜爛及CIN的輔助診斷，與相關(guān)研究［8］報(bào)道一致。

FISH技術(shù)檢測宮頸糜爛活檢組織hTERC基因的擴(kuò)增對宮頸癌的輔助診斷具有較高的敏感性及特異性，Heselmeyer-Haddad等［9］報(bào)道其敏感性為92%，特異性為91%。本文研究結(jié)果顯示，宮頸活檢組織中hTERC基因陽性表達(dá)診斷宮頸糜爛的靈敏度及特異性分別為87.03%和83.33%，略低于上述研究結(jié)果，推測可能與標(biāo)本采集、制作，試劑選擇及地域差異有關(guān)。但足以說明hTERC基因陽性表達(dá)對宮頸糜爛有較好的診斷價(jià)值。

宮頸癌是目前唯一可早期發(fā)現(xiàn)并可預(yù)防的婦科惡性腫瘤，絕經(jīng)后婦女是該病發(fā)病的高危人群。據(jù)研究［10］顯示，絕經(jīng)后宮頸癌發(fā)病占宮頸癌發(fā)病總數(shù)的30%。宮頸糜爛是婦科常見病、多發(fā)病，且有發(fā)展為宮頸癌的可能，對于絕經(jīng)后宮頸糜爛患者尤其要加強(qiáng)重視，宮頸糜爛程度越高，發(fā)展為CIN及宮頸癌的可能性越大。本文研究結(jié)果表明hTERC基因陽性表達(dá)與宮頸糜爛程度呈正相關(guān)，可用于CIN及宮頸癌的輔助診斷，對絕經(jīng)后婦女宮頸糜爛的早期篩查、早期診斷有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

4　參考文獻(xiàn)

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（本文編輯：李霦）

臨床研究

Clinical significance of hTERC expression in post－menopausal women with cervical erosion

PENG Pai，DUAN Qing，WEI Dian－jun.Department of Clinical Laboratory，the Second Hospital of Tianjin Medical University，Tianjin 300211，China

【Abstract】Objective To explore the clinical significance and expression of the human telomerase RNA component（hTERC）gene in postmenopausal women with cervical erosion.Methods 60 cases postmenopausal women with cervical erosion by naked eye view from February 2015 to August 2015 in our hospital were collected，and they were divided into mild cervical erosion group（19 cases），moderate erosion group（23 cases），severe erosion group（18 cases）.40 cases patients with no cervical erosion were collected as the control group at the same time.All the subjects were all detected by colposcopy and cervical biopsy.The hTERC gene expression was detected by fluorescence in situ hybridization（FISH）technique.Results All the patients were divided into normal，cervicitis，cervical intraepithelial neoplasia（CIN）Ⅰ，CINⅡ，CINⅢand cervical cancer according to the results of cervical biopsy pathology.The positive rates of CINⅢand cervical cancer showed a increasing trend along with the severity of disease.There were statistical significance in the differences of positive rate of different pathology degree among all the groups（Pall＜0.05）.The samples of each cervical erosion group and control group all showed hTERC gene expression.There were 56 cases patients showed hTERC gene expression，the positive rate was 56.00%（56／100）.The positive rates of control group，mild cervical erosion group，moderate erosion group and severe erosion group were 10.00%（4／40），68.42%（13／19），91.30%（21／23）and 100.00%（18／18），and the difference had statistical significance（χ2＝41.283，P＜0.05）.There was positive correlation between cervical erosion and hTERC gene expression（r＝0.936，P＝0.000）.The sensitivity and specificity of hTERC gene in cervical erosion diagnosis were 87.03%and 83.33%，respectively.ConclusionCervical erosion patients with the naked eye diagnosed show diverse histological diagnosis，the higher the degree of erosion，the greater the likelihood of CIN and cervical cancer，and hTERC gene expression levels with an increasing trend there.

【Key words】Postmenopausal；Women；Cervical erosion；Cervical intraepithelial neoplasia；Human telomerase RNA componentgene

收稿日期：（2016－02－25）

doi：10.3969／j.issn.1674－7151.2016.01.003