葛愛民+崔曉娜+李汝春+朱俊平

摘要： 用對流免疫電泳方法對山東省濰坊地區(qū)8個水貂規(guī)模化養(yǎng)殖場和13個養(yǎng)殖戶的682個送檢樣品進(jìn)行阿留申病檢測。結(jié)果顯示：該地區(qū)水貂阿留申病平均陽性率為32.8%，說明濰坊地區(qū)水貂阿留申病的感染比較嚴(yán)重。其中規(guī)模化養(yǎng)殖場平均陽性率為33.3%，散養(yǎng)戶陽性率為32.3%，二者差異不顯著；來自諸城市的269個血清檢樣陽性率為48.7%，明顯高于其他地區(qū)，說明諸城市為水貂阿留申病的主要流行地區(qū)；對幼齡水貂和成年水貂的陽性檢出率進(jìn)行比較的結(jié)果顯示，水貂阿留申病的感染率未見明顯的差異。

關(guān)鍵詞： 山東濰坊地區(qū)；水貂阿留申??；流行病學(xué)調(diào)查；對流免疫電泳

中圖分類號： S858.92 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）03-0260-02

水貂阿留申病是由阿留申病毒引起的一種慢性傳染病，特征是終生病毒血癥、持續(xù)感染、全身淋巴細(xì)胞增生、血清 γ-球蛋白增多、腎小球腎炎、動脈炎和肝炎[1]，我國動物檢疫中屬三類動物疫病[2]。自從上世紀(jì)40年代發(fā)現(xiàn)該病，國內(nèi)外檢測陽性率普遍較高，有的地區(qū)甚至可達(dá)80%[3]。水貂阿留申病可引起水貂死亡，影響種貂繁殖性能和造成毛皮質(zhì)量下降。

山東省濰坊地區(qū)近幾年水貂養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴(kuò)大，在很多縣區(qū)已成為農(nóng)民增收、致富的主要養(yǎng)殖項(xiàng)目之一，形成了一重大產(chǎn)業(yè)，既有規(guī)?；酿B(yǎng)殖場，也有管理粗放的小規(guī)模散養(yǎng)戶。在大規(guī)模、爆發(fā)式擴(kuò)種形勢下，存在著市場波動、品種不良、管理水平差、繁殖性能低等問題，其中水貂阿留申病的危害在本地自養(yǎng)殖水貂開始就一直存在，嚴(yán)重影響水貂養(yǎng)殖效益[4]。

阿留申病常用檢測方法有碘凝集試驗(yàn)、對流免疫電泳試驗(yàn)、免疫復(fù)合物檢測法、PCR方法等。本研究采用對流免疫電泳方法對濰坊地區(qū)水貂群進(jìn)行阿留申病檢測，以了解當(dāng)?shù)匕⒘羯瓴〉母腥厩闆r及危害程度，為養(yǎng)殖場水貂引種檢疫提供參考依據(jù)，指導(dǎo)當(dāng)?shù)厮醢⒘羯瓴〉姆揽亍?/p>

1 材料與方法

1.1 病料來源

山東省濰坊地區(qū)8個水貂規(guī)?；B(yǎng)殖場和13個養(yǎng)殖戶的682個隨機(jī)血清樣本。具體采樣情況見表1。

1.2 儀器與器材

電泳儀（北京市六一儀器廠，DYY-5型）、臺式離心機(jī)（長沙英泰儀器有限公司，TD4型）、電泳槽（上海天能科技有限公司，HE-120型）、塑料毛細(xì)采血管、微量可調(diào)移液器及配套吸頭、打孔器等。

1.3 試劑

診斷試劑：水貂阿留申病對流免疫電泳試驗(yàn)抗原（批號：20130915）購自吉林特研生物技術(shù)有限公司，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清均由農(nóng)業(yè)部動物檢疫所提供；電泳緩沖液：巴比妥鈉緩沖液（三羥甲基氨基甲烷6.005 g，巴比妥鈉10.31 g，疊氮鈉0.2 g，各加入適量二級水溶解后，用鹽酸將pH值調(diào)至 8.5～8.6，最后用二級水定容至1 000 mL）；0.8%瓊脂糖：稱取瓊脂糖（電泳級）0.8 g，加入50 mL蒸餾水中，水浴煮沸溶化，再加入Tris-巴比妥鈉緩沖液50 mL，趁熱注板。

1.4 血清采集

趾尖采血，用塑料毛細(xì)管收集血液，經(jīng)3 000 r/min離心 3～5 min，獲得待檢血清。

1.5 對流免疫電泳試驗(yàn)

根據(jù)SN/T 1314—2003《水貂阿留申病對流免疫電泳操作規(guī)程》[5]進(jìn)行操作。

1.5.1 鋪板 吸取已溶化并冷卻到70 ℃左右的0.8%瓊脂糖緩沖液，均勻地鋪于玻璃板上，瓊脂厚度約為3 mm。

1.5.2 打孔與封底 將已凝固的瓊脂糖凝膠板放在打孔模板上打孔，孔徑為3 mm，孔間距為4 mm。將打好孔的凝膠板在乙醇燈外焰上加熱封底。

1.5.3 加樣 將被檢血清按照編號順序用移液器從左向右逐份加到靠陽極端孔內(nèi)，陰極端孔加入抗原，均以加滿孔但不外溢為度。同時，每塊板須設(shè)陽性和陰性血清對照。

1.5.4 電泳 將電泳槽兩側(cè)加滿電泳緩沖液，將加樣完畢的瓊脂糖凝膠板平放于電泳槽架上，接通電源電泳，電壓在 90 V 左右，電泳30～60 min后判定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 規(guī)模化場與散養(yǎng)戶水貂被檢血清的檢測結(jié)果對比

表2數(shù)據(jù)顯示，規(guī)?；B(yǎng)殖場水貂阿留申病陽性率為18%～52%，平均陽性率為33.3%，散養(yǎng)戶陽性率為32.3%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，規(guī)?；瘓雠c散養(yǎng)戶差異不顯著（P>0.05），說明水貂阿留申病的感染率與飼養(yǎng)規(guī)模大小無關(guān)。

2.2 不同地區(qū)水貂被檢血清的檢測結(jié)果

由表3可知，諸城市水貂養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶阿留申病陽性率為48.7%，其他縣區(qū)陽性率在16.7%～28%之間，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，諸城與安丘、昌邑、坊子、奎文、臨朐5地相比水貂阿留申病血清陽性率差異顯著（P<0.05），說明諸城市為水貂阿留申病的主要流行地區(qū)。

2.3 成年貂與幼年貂血清檢測結(jié)果

由表4可知，356只成年貂檢出陽性貂120只，陽性率為33.7%，326只幼齡貂檢出陽性貂104只，陽性率為31.9%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，成年貂與幼齡貂差異不顯著（P>0.05），說明水貂阿留申病在不同年齡階段感染率無明顯差別。

3 討論

通過對濰坊地區(qū)部分水貂養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶的阿留申病毒感染情況調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該地區(qū)水貂阿留申病平均陽性率為32.8%，這與我國其他一些地方報(bào)道的陽性水平相比略微偏高，但相差不是非常明顯，比如2005年薛強(qiáng)等對青島一家水貂場進(jìn)行檢測，440只種貂檢出陽性水貂117只，陽性率為26.6%[6]；2014年陳超然等對威海榮成的2家水貂場用碘凝集試驗(yàn)檢測，“+ + +”以上強(qiáng)陽性的占總數(shù)的25.3%[7]，說明我國水貂養(yǎng)殖集中區(qū)域阿留申病普遍存在，而且陽性率均不低。

調(diào)查研究水貂規(guī)模化養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶阿留申病的陽性率，可以了解阿留申病在規(guī)模化飼養(yǎng)與管理水平相對較高的散養(yǎng)情況下的感染差別，結(jié)果表明二者差別不大，說明在目前的引種狀況、疫病防控水平下，阿留申病的傳播與飼養(yǎng)規(guī)模大小無關(guān)。

諸城市在水貂養(yǎng)殖規(guī)模上處于濰坊地區(qū)的領(lǐng)先地位，本次阿留申病檢測結(jié)果顯示，A、B、C 3個規(guī)?；B(yǎng)殖場陽性率明顯高于其他地區(qū)，且散養(yǎng)戶的陽性率也很高，這恰好反映了前幾年諸城地區(qū)水貂引種、炒種的混亂局面，同時也體現(xiàn)了我國目前水貂養(yǎng)殖現(xiàn)狀，即養(yǎng)殖密度越大的地區(qū)，環(huán)境污染越嚴(yán)重，疫病防控越困難，造成的經(jīng)濟(jì)損失也越大。

本次調(diào)查在采樣階段刻意均衡了各場成年水貂與幼齡水貂的數(shù)量，以達(dá)到充分了解水貂阿留申病在不同年齡階段的感染差異，結(jié)果顯示，雖然幼齡水貂較成年水貂陽性率偏低，但差異并不明顯，這說明水貂阿留申病的垂直傳播不可忽視。從而，無論本場自留種貂還是外場引種，嚴(yán)格檢疫、及時淘汰陽性種貂至關(guān)重要。同時，雖然成年水貂生長期長，但養(yǎng)殖場（戶）在成年階段一般會對阿留申病癥狀明顯的病貂及早淘汰，也是差異不明顯的一大原因。

在檢測方法的選擇上，目前廣泛使用碘凝集試驗(yàn)法和對流免疫電泳法。碘凝集試驗(yàn)要求條件低，方便、經(jīng)濟(jì)，但由于凡是造成丙種球蛋白增多的疾病都可以發(fā)生碘凝集反應(yīng)，所以為非特異性方法，與其他方法相比有一定的欠缺，但在基層大規(guī)模篩查時為比較適合的檢測方法[8-9]。對流免疫電泳法要求的檢測設(shè)備相對簡單，便于操作，檢測成本也較低，準(zhǔn)確率高，目前被普遍使用[10]。PCR方法成本太高，無法用于較大樣本數(shù)檢測，檢測結(jié)果就不可能反映實(shí)際感染情況[10]。

本試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果表明，濰坊地區(qū)水貂阿留申病的感染率較高，造成的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失較大，說明大規(guī)模擴(kuò)種，大量新養(yǎng)殖戶涌入，使得對水貂阿留申病的危害認(rèn)識不足，不清楚阿留申病檢測及淘汰陽性種貂的重要性。由于水貂阿留申病無有效治療方法，現(xiàn)階段疫苗免疫效果也不是很理想，建議每年定期檢疫2次，特別是在10、11月份檢測，陽性貂可隨季節(jié)皮一起取皮淘汰，需要3～5年的凈化，逐漸培養(yǎng)出無阿留申病健康水貂群。

本次檢測在重點(diǎn)養(yǎng)殖區(qū)域、采樣數(shù)量及年齡結(jié)構(gòu)方面進(jìn)行綜合考慮，旨在充分了解濰坊地區(qū)水貂阿留申病的感染分布與危害程度，為水貂養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供指導(dǎo)，為水貂阿留申病的科學(xué)防控提供依據(jù)。

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