易禮智鄧學(xué)杰王琴鐘顯飛

樂(lè)山市人民醫(yī)院消化內(nèi)科 四川樂(lè)山 614000

miR-200b在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義

易禮智1鄧學(xué)杰1王琴1鐘顯飛1

樂(lè)山市人民醫(yī)院消化內(nèi)科 四川樂(lè)山 614000

目的 檢測(cè)miR-200b在胃癌(GC)細(xì)胞和組織中的表達(dá)，探討miR-200b的異常表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及其臨床意義。方法 實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)miR-200b在胃癌細(xì)胞株及活檢組織及相應(yīng)癌旁正常組織中mRNA表達(dá)水平的差異，并分析其與胃癌的臨床病理因素的關(guān)系。結(jié)果 在胃癌組織中miR-200b mRNA表達(dá)水平顯著低于正常胃黏膜組織；此外，miR-200b的表達(dá)水平與胃癌分化程度、浸潤(rùn)深度以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論 miR-200b在胃癌中低表達(dá)，其表達(dá)水平與胃癌進(jìn)展密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)胃癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物之一。

胃癌；miR-200b;表達(dá);分子標(biāo)記

胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，全世界排名第四位[1,2]。胃癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的多步驟的過(guò)程，包括上皮細(xì)胞的異常增生，凋亡自然程序的紊亂，異常分化等 GC[3,4]。近些年來(lái)，隨著臨床早期診斷和治療方法的改進(jìn)，早期胃癌患者的生存率要明顯高于晚期胃癌患者。然而，胃癌的整體生存率仍然很低。傳統(tǒng)的治療方法已經(jīng)不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)胃癌患者的預(yù)后，因此，發(fā)現(xiàn)和研究有效的、具有潛在價(jià)值的新的標(biāo)志物對(duì)于胃癌的預(yù)后評(píng)估具有重要意義。

微小RNA（microRNA 或者miRs）是一種小的非編碼RNA，它能在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)節(jié)基因表達(dá)[5，6]。microRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用[7]。研究顯示，它通過(guò)靶定癌基因或腫瘤抑癌基因，參與了腫瘤的凋亡，增殖，分化，發(fā)揮著類似腫瘤抑制因子或癌基因的作用[8-10]。已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道顯示miR-200b參與一些腫瘤的增殖、凋亡和周期，如乳腺癌[11]，肝癌[12]，卵巢癌[13]，宮頸癌[14]，肺癌[15]等，但在胃癌中尚未有相關(guān)的研究報(bào)道。因此這篇文章主要研究miR-200b在胃癌中的表達(dá)情況。

1 材料與方法

1.1 材料 收集樂(lè)山市人民醫(yī)院手術(shù)切除的58對(duì)新鮮的胃癌組織和癌旁正常腸黏膜組織置于液氮中保存?zhèn)溆茫渲心行?3例，女性25例；年齡23～67歲，平均年齡57.5歲。反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara公司)，Trizol、SYBR GREEN MIX(Toyobo公司)，

1.2 方法 實(shí)時(shí)定量PCR采用Trizol裂解相應(yīng)的組織和細(xì)胞，按常規(guī)方法提取RNA，測(cè)其濃度，按照miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，采用特異的引物擴(kuò)增，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。U6基因作為參照基因，反應(yīng)條件50%2 min，95℃10 min預(yù)變性，95℃15 s，60cc 1 min，72℃34 S，30個(gè)循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后得ct值。根據(jù)公式26[(ctof miR-200b)一(ct of GAPDH)]計(jì)算目的基因相對(duì)含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。miR在胃癌組織中N/T值＞2為高表達(dá)，0-2為低表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，miR-200b的mRNA表達(dá)水平和臨床病理因素的相關(guān)性采用Wilcoxon Signed Ranks檢驗(yàn)分析和Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1.在細(xì)胞及胃癌組織中的檢測(cè) miR-200b在GSE(永生化胃正常上皮細(xì)胞株)中含量最高，在 6株胃癌細(xì)胞株中，miR-200b在轉(zhuǎn)移能力較低的AGS中水平最高，在轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)的SGC中含量最低（圖1）。miR-200b在58例配對(duì)組織中，mRNA水平上，CRC組織中miR-200b的表達(dá)水平要低于正常胃黏膜組織中的表達(dá)量，P值為0.0012，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中有43例CRC組織中miR-200b蛋白的表達(dá)顯著低于正常黏膜組織，15例高于正常黏膜組織（圖2）。

圖1 miR-200b在7株胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)

圖2 miR-200b在58例胃癌配對(duì)組織中的表達(dá)

2.2 胃癌組織中miR-200b mRNA含量與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 癌組織中miR-200b含量高低與胃癌分化程度、是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，（均P＜0.05），而與腫瘤患者的性別、年齡、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)（P＞0.05）（表 1）。結(jié)果顯示，癌組織中miR-200b含量越低，腫瘤分化程度越低，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移的患者癌組織中miR-200b含量要低于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者。

表1：miR-200b在癌組織中的含量與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

本文我們主要探討了miR-200b在胃癌中的作用。miR-200b，作為微小非編碼RNA的一種，和其他大多數(shù)的miRNAs一樣，在疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用。它的高表達(dá)能促進(jìn)瘢痕的增生[16]、能調(diào)節(jié) EB病毒的潛伏及溶解復(fù)制[17]。而在腫瘤的演進(jìn)過(guò)程中miR-200b也發(fā)揮著重要的作用[7]。目前為止，僅有幾篇文章報(bào)道 miR-200b在腫瘤中的作用[11-15]，在胃癌中尚未報(bào)道。在這篇文章中，我們首先檢測(cè)了miRNA在正常的胃上皮細(xì)胞株GSE和6株胃癌細(xì)胞株中的含量。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-200b在正常的胃上皮細(xì)胞中含量最高，在胃癌細(xì)胞株中，在轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)的細(xì)胞中含量相對(duì)較低，轉(zhuǎn)移能力較低的細(xì)胞中含量較高。這一結(jié)果初步證明，miR-200b在胃癌中的含量高低與轉(zhuǎn)移相關(guān)。隨后，我們?cè)?8例配對(duì)的胃癌新鮮組織中檢測(cè)了miR-200b的含量。我們發(fā)現(xiàn)，正常胃粘膜上皮中miR-200b的含量明顯高于胃癌組織中的含量，P值小于0.001，且miR-200b在癌組織中的含量的高低與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。

以上結(jié)果顯示，miR-200b與胃癌的轉(zhuǎn)移是密切相關(guān)的。但其參與胃癌轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制尚不清楚。眾所周知，microRNA能通過(guò)靶定癌基因或腫瘤抑癌基因，調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄后的蛋白水平，發(fā)揮著類似腫瘤抑制因子或癌基因的作用，參與腫瘤的凋亡、增殖、分化和轉(zhuǎn)移[8-10]。有研究報(bào)道顯示，miR-200b能夠靶向作用于ZEB2抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[18]。它還能夠通過(guò)靶向作用于FSCN1抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移[14]。另外，miR-200b還能靶向作用于 RhoE抑制宮頸癌細(xì)胞的上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移[15].除此之外，miR-200b還能通過(guò)抑制其啟動(dòng)子或DNA的甲基化來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲、轉(zhuǎn)移[19,20]。這些研究機(jī)制在我們下一步研究闡述miR-200b在胃癌中的作用機(jī)制中有很重要的參考價(jià)值。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-200b在胃癌腫瘤組織中低表達(dá)，其表達(dá)水平在腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病例中有差異，且呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，故其可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。本研究為miR-200b在胃癌腫瘤轉(zhuǎn)移分子標(biāo)證物提供了理論依據(jù)，也為結(jié)胃癌的治療提供一個(gè)新的思路。

[1]Jemal A, Bray F， Center MM, Ferlay J, Ward E, et al.Global cancer statistics.CA Cancer J Clin 2011; 61: 69–90

[2]Catalano V, Labianca R, Beretta GD, et al.Gastric cancer.Crit Rev Oncol Hematol 2009; 71: 127-164.

[3]hand metastasis of glioma cells via targeting ZEB2.Int J Oncol 2016;48:541-550.

Expression of miR-200b and its clinical pathologic significance in gastric cancer

Yi Lizhi1Deng Xuejie1Wang Qin1Zhong Xianfei1
Department of gastroenterology，People’s hospital of Leshan City, 614000,Sichuan Province，China; Corresponding author：Zhong Xianfei (E—mail：651218437@qq.com)

Purpose To investigate the expression and clinicopathologic significance of miR-200b in gastric cancer.MethodsThe mRNA expression level of miR-200b in GC cell lines and biopsies and their matched adjacent tissues were detected by real time RT—PCR.ResultsmiR-200b mRNA expression levels was significantly lower in gastric cancer biopsies than that in their matched adjacent tissues.Additionally，low expression of miR-200b was significantly associated with GC differentiation, the depth of serosal invasion and distant metastasis(P＜0.05).ConclusionmiR-200b is lowly expressed in gastric cancer.low expression of miR-200b is closely related to progression of GC.miR-200b may serve as a novel molecular marker for prediction of gastric cancer progression and metastasis.

gastric cancer；miR-200b；Expression；Biomarker

R735.2

A

1672-5018（2016）11-006-02